一种HPLC法测定血浆中氟尿嘧啶含量的方法技术

本发明专利技术提供一种HPLC法测定血浆中氟脲嘧啶含量的方法，该方法包括：对照品溶液的制备，样品预处理和利用高效液相色谱法进行含量测定；本发明专利技术提供的方法具有含量测定准确，灵敏度高，重复性好的特点。

A HPLC method for the determination of fluorouracil in plasma

【技术实现步骤摘要】
一种HPLC法测定血浆中氟尿嘧啶含量的方法
本专利技术属于含量测定领域，特别涉及一种HPLC法测定血浆中氟尿嘧啶含量的方法。
技术介绍
氟尿嘧啶是临床上常用的嘧啶类抗代谢药物，其通过抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻断脱氧嘧啶核苷酸转换成胸腺嘧啶核苷，干扰DNA合成。氟尿嘧啶主要用于治疗消化道肿瘤，或较大剂量治疗绒毛膜上皮癌，也用于治疗乳腺癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌皮肤癌等。氟尿嘧啶在体内代谢半衰期短，毒性大，吸收代谢不规则，体内浓度过高容易产生骨髓移植等不良反应。且血浆的组成及其复杂，包括蛋白质、脂类、无机盐、糖、氨基酸、代谢废物以及大量的水；如何检测血浆内药物浓度是药代动力学研究的基础；因此，为了检测血浆中氟尿嘧啶的含量，现有技术建立了一系列血浆中氟尿嘧啶的含量测定方法，例如叶丽卡等在期刊文献《高效液相色谱法测定人血浆中5-FU的浓度》中公开了一种测定人血浆中氟尿嘧啶含量的方法，该方法首先配置对照品溶液，然后对血浆进行处理，在处理过程中，用乙酸乙酯作为萃取剂，然后经过漩涡、离心等操作获得供试品溶液，最后利用HPLC法进行含量测定，由于氟尿嘧啶的溶解性不好，因此该含量测定方法的回收率低，且精密度差。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种HPLC法测定血浆中氟尿嘧啶含量的方法。本专利技术具体技术方案如下：本专利技术其中一个方案提供一种HPLC法测定血浆中氟脲嘧啶含量的方法，该方法包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备将氟尿嘧啶用甲醇溶解，再用甲醇稀释至每mL甲醇中含氟尿嘧啶0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取1mL，用流动相稀释至每mL含有氟尿嘧啶0.25μg；(2)样品预处理取待测血浆，置于试管内，加入0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液，用磷酸调节pH至3.2，摇匀，加入萃取剂萃取，用于0.5mol/L磷酸氢二钠水溶液调节pH至6-7，漩涡振摇2-5min，3000rpm离心5-15min，取上清液置于另一试管内，在加入萃取剂进行第二次萃取，漩涡振摇2-5min，3000rpm离心5-15min；取上清液，合并两次上清液，于40-60℃下氮气吹干，加入流动相定容，漩涡混匀，取上清液进样；(3)含量测定利用高效液相色谱法进行含量测定。进一步改进的方案中，所述流动相为0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液(磷酸调节pH至3.2)：乙腈＝90：10。进一步改进方案中，所述萃取剂是体积比为8：1：1的乙酸乙酯、乙腈和三乙胺的混合物。进一步改进的方案中，所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：C18色谱柱；流动相：0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液(磷酸调节pH至3.2)：乙腈＝90：10；检测波长：265nm；柱温：45℃；流速：1.0mL/min；等度洗脱。进一步改进的方案中，KromacilC18柱，4.6×250mm，5μm。进一步改进的方案中，进样量为10μL。进一步改进的方案中，所述含量测定还包括先用流动相洗脱5-10min，然后再进行含量测定。本专利技术提供的HPLC法测定血浆中氟尿嘧啶含量的方法，具有含量测定准确，灵敏度高，重复性好的特点。附图说明图1是空白血浆的色谱图。图2为氟脲嘧啶对照品溶液的色谱图；图3为血浆中氟脲嘧啶含量测定的色谱图。具体实施方式试剂氟尿嘧啶，纯度99.5％，中国食品药品检定研究院；其余试剂均为市售的色谱纯。实施例1一种HPLC法测定血浆中氟脲嘧啶含量的方法，该方法包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备将氟尿嘧啶用甲醇溶解，在用甲醇稀释至每mL甲醇中含氟尿嘧啶0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取1mL，用流动相稀释至每mL含有氟尿嘧啶0.25μg，所述流动相为0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液(磷酸调节pH至3.2)：乙腈＝90：10；(2)样品预处理取待测血浆100μL，置于5mL试管内，加入1mL0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液(磷酸调节pH至6-7)摇匀，加入0.5mL萃取剂，所述萃取剂为：体积比为8：1：1的乙酸乙酯、乙腈和三乙胺的混合物；用于0.5mol/L磷酸氢二钠水溶液调节pH至6-7，漩涡振摇5min，3000rpm离心10min，取上清液置于另一试管内，在加入0.5mL萃取剂，漩涡振摇2min，3000rpm离心10min；取上清液，合并两次上清液，于60℃下氮气吹干，加入100μL流动相，漩涡混匀，取上清液10μL进样；(3)含量测定利用高效液相色谱法进行含量测定，色谱条件为：色谱柱：KromacilC18柱，4.6×250mm，5μm；流动相：0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液(磷酸调节pH至3.2)：乙腈＝90：10；检测波长：265nm；柱温：45℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL等度洗脱。实施例2一种HPLC法测定血浆中氟脲嘧啶含量的方法，该方法包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备将氟尿嘧啶用甲醇溶解，在用甲醇稀释至每mL甲醇中含氟尿嘧啶0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取1mL，用流动相稀释至每mL含有氟尿嘧啶0.25μg，所述流动相为0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液(磷酸调节pH至3.2)：乙腈＝90：10；(2)样品预处理取待测血浆100μL，置于5mL试管内，加入1mL0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液(磷酸调节pH至3.2)摇匀，加入0.5mL萃取剂，所述萃取剂为：体积比为8：1：1的乙酸乙酯、乙腈和三乙胺的混合物；调节pH至6-7，漩涡振摇3min，3000rpm离心15min，取上清液置于另一试管内，在加入0.5mL萃取剂，漩涡振摇5min，3000rpm离心5min；取上清液，合并两次上清液，于40℃下氮气吹干，加入100μL流动相，漩涡混匀，取上清液10μL进样；(3)含量测定利用高效液相色谱法进行含量测定：先用流动相洗脱10min，然后再进行含量测定，色谱条件为：色谱柱：KromacilC18柱，4.6×250mm，5μm；流动相：0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液(磷酸调节pH至3.2)：乙腈＝90：10；检测波长：265nm；柱温：45℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL等度洗脱。对照例1一种HPLC法测定血浆中氟脲嘧啶含量的方法，该方法与实施例1的基本相同，不同的是，样品预处理过程如下：取待测血浆100μL，置于5mL试管内，加入1mL0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液(磷酸调节pH至3.2)摇匀，加入0.5mL萃取剂，所述萃取剂为：体积比为8：1：1的乙酸乙酯、乙腈和三乙胺的混合物；调节pH至6-7，漩涡振摇3min，3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种HPLC法测定血浆中氟脲嘧啶含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n(1)对照品溶液的制备/n将氟尿嘧啶用甲醇溶解，再用甲醇稀释至每mL甲醇中含氟尿嘧啶0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取1mL，用流动相稀释至每mL含有氟尿嘧啶0.25μg；/n(2)样品预处理/n取待测血浆，置于试管内，加入0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液，用磷酸调节pH至3.2，摇匀，加入萃取剂萃取，用于0.5mol/L磷酸氢二钠水溶液调节pH至6-7，漩涡振摇2-5min，3000rpm离心5-15min，取上清液置于另一试管内，在加入萃取剂进行第二次萃取，漩涡振摇2-5min，3000rpm离心5-15min；取上清液，合并两次上清液，于40-60℃下氮气吹干，加入流动相定容，漩涡混匀，取上清液进样；/n(3)含量测定/n利用高效液相色谱法进行含量测定。/n

【技术特征摘要】
1.一种HPLC法测定血浆中氟脲嘧啶含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备
将氟尿嘧啶用甲醇溶解，再用甲醇稀释至每mL甲醇中含氟尿嘧啶0.1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取1mL，用流动相稀释至每mL含有氟尿嘧啶0.25μg；
(2)样品预处理
取待测血浆，置于试管内，加入0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液，用磷酸调节pH至3.2，摇匀，加入萃取剂萃取，用于0.5mol/L磷酸氢二钠水溶液调节pH至6-7，漩涡振摇2-5min，3000rpm离心5-15min，取上清液置于另一试管内，在加入萃取剂进行第二次萃取，漩涡振摇2-5min，3000rpm离心5-15min；取上清液，合并两次上清液，于40-60℃下氮气吹干，加入流动相定容，漩涡混匀，取上清液进样；
(3)含量测定
利用高效液相色谱法进行含量测定。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相为...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴光彦，
申请(专利权)人：黑龙江福和制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙;23