一种耐高温降解柴油的复合菌剂制造技术

本发明专利技术公开了一种耐高温降解柴油的复合菌剂，其包括：假单胞菌LS1，假结合棒杆菌ATCC 19410，接近棒杆菌ATCC 51488必要的辅剂。本发明专利技术团队意外发现荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）CLW17配合假单胞菌LS1，可以大大增强其在低温下的柴油降解率，同时提高对柴油的耐受性，并且不需要额外添加碳源，在实际应用中非常方便，具有很大的应用潜力。

A compound bacterial agent for high temperature resistant degradation of diesel oil

【技术实现步骤摘要】
一种耐高温降解柴油的复合菌剂
本专利技术涉及一种耐高温降解柴油的复合菌剂，属于微生物

技术介绍
随着石化行业的快速发展，石油产品的需求量日益增加，同时石油开采、运输、加工及使用过程中的石油泄漏和油污废水的排放问题也日趋严峻。石油烃污染物进入水体或土壤后，给生态环境和人体健康带来了潜在的威胁。目前油污废水常用的技术方法包括隔油池处理法、混凝剂投加法、生物降解法及膜分离法等。其中，生物降解法具有安全高效、费用较低及应用较广等优点。柴油主要成分为饱和烷烃(约70％)、芳香烃及环烷烃等。尽管这些烃类物质有较强的毒性和疏水性，但大多数成分依然可被微生物彻底氧化分解。另外，由于烃类物质的疏水性，导致其在自然水体中的溶解性较小，这很大程度上限制了微生物的降解速率。通常，一般的石油烃降解菌降解水平有限，短时间内降解率较低。但存在一些菌株，例如铜绿假单胞菌，在合适的培养条件下能够产生生物表面活性剂，进而提高烃降解能力。“一株耐盐柴油降解菌的分离鉴定及其降解性能”，环境工程学报Vol9，No4，2015年4月，公开过一株以柴油为惟一碳源的耐盐菌株LS1。通过对菌株的生理生化特性、菌体的形态观察及16SrDNA基因序列分析鉴定菌株LS1为假单胞菌属(pseudomonas)。该菌株可耐受的最高盐度(NaCl)和柴油浓度分别为6％～8％和12000mg/L。菌株在盐度为6％、pH为7.0、温度为32℃、菌种投加量为10％的条件下，初始浓度为3000mg/L的柴油经6d降解后，去除率可达78.3％，加入适量外加碳源葡萄糖和蔗糖，可使降解率分别提高至92％和90％左右。菌株LS1的耐盐机理可能是通过在细胞内积累甜菜碱以调节菌株细胞内外渗透压平衡。投加甜菜碱可提高耐盐菌LS1在高盐环境下对柴油的降解效率。石油污染物的完全降解需要多株菌的相互配合，菌群的降解效果往往也优于单菌，活性剂菌之间的作用尚且缺乏足够的探索。本专利技术旨在提供一种降解柴油的复合菌剂及其应用，复合菌剂具有显著增强的抗逆性和降解能力，在治理污染的土壤上具有很大的应用潜力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种降解柴油的复合菌剂及其应用，复合菌剂具有显著增强的抗逆性和降解能力，尤其是更能耐受高温，在治理污染的土壤上具有很大的应用潜力。“一株耐盐柴油降解菌的分离鉴定及其降解性能”，环境工程学报Vol9，No4，2015年4月，公开过一株以柴油为惟一碳源的耐盐菌株LS1。通过对菌株的生理生化特性、菌体的形态观察及16SrDNA基因序列分析鉴定菌株LS1为假单胞菌属(pseudomonas)。本专利技术用到的假单胞菌LS1为江苏科技大学研究人员赠送获得。本专利技术用到的假结合棒杆菌ATCC19410为购买获得。本专利技术用到的接近棒杆菌ATCC51488为购买获得。本专利技术团队意外发现假结合棒杆菌ATCC19410，接近棒杆菌ATCC51488配合假单胞菌LS1，可以大大增强其在高温下的柴油降解率，同时提高对柴油的耐受性，并且不需要额外添加碳源，在实际应用中非常方便，具有很大的应用潜力。本专利技术所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。一种降解柴油的复合菌剂，其包括：假单胞菌LS1，假结合棒杆菌ATCC19410，接近棒杆菌ATCC51488必要的辅剂。所述假单胞菌LS1来源为：“一株耐盐柴油降解菌的分离鉴定及其降解性能”，环境工程学报Vol9，No4，2015年4月，公开过一株以柴油为惟一碳源的耐盐菌株LS1。通过对菌株的生理生化特性、菌体的形态观察及16SrDNA基因序列分析鉴定菌株LS1为假单胞菌属(pseudomonas)。本专利技术用到的假单胞菌LS1为江苏科技大学研究人员赠送获得。本专利技术用到的假结合棒杆菌ATCC19410为购买获得。本专利技术用到的接近棒杆菌ATCC51488为购买获得。本专利技术研究方法：无机盐培养基(g/L)：NaNO32，NaCl5，K2HPO41，KH2PO40.5，MgSO4·7H2O1，CaCl20.1，KCl0.1，FeSO4·7H2O0.01，pH7.4。柴油培养基(g/L)：在无机盐培养基中加入适量0#柴油。柴油固体培养基(g/L)：在无机盐培养基中加入琼脂20，待凝固冷却后，培养基表面加入0.1mL柴油，并均匀涂开。发酵培养基(g/L)：在无机盐培养基中加入2％(V/V)甘油。菌株对不同碳数烷烃的降解能力分析：柴油的主要成分为C10～C22的直链烷烃，故分别以2000mg/L的正癸烷、正十二烷、正十四烷、正十五烷、正十六烷、正十七烷、正十八烷、正十九烷、正二十烷和正二十二烷(固态烷烃先用丙酮溶解，再放入经灭菌后的无机盐培养基中趁热挥发丙酮)作唯一碳源，菌液富集至OD600值为1，接种量为2％，30℃、180r/min振荡培养，7d后测试各菌株的OD600值。将菌株振荡活化并富集至菌液OD600值为1，再以2％菌液总量接种至浓度为1.5％(V/V)的柴油培养基中，30℃、180r/min振荡培养，以不接入细菌的空白样为对照组，7、14d后分别测试柴油降解率，每组实验设置3个平行样。本专利技术的优点：本专利技术团队意外发现假结合棒杆菌ATCC19410，接近棒杆菌ATCC51488配合假单胞菌LS1，可以大大增强其在高温下的柴油降解率，同时提高对柴油的耐受性，并且不需要额外添加碳源，在实际应用中非常方便，具有很大的应用潜力。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。本专利技术的具体实施例如以下说明。实施例1活化菌种：假单胞菌LS1：取一环荧光假单胞菌CLW17接种到LB固体培养基中划线，37℃厌氧培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至LB液体培养基中活化，厌氧培养成108cfu/ml假单胞菌LS1种子液。假结合棒杆菌ATCC19410和接近棒杆菌ATCC51488:配置方法和培养浓度同荧光假单胞菌CLW17。配置柴油培养基:NaCl30g，MgSO4·7H2O7.0g，NH4NO31.0g，KCl0.7g，KH2PO42.0g，Na2HPO43.0g，蒸馏水1000mL，pH为7.5。121℃灭菌20min后补加适量经0.22μm滤膜过滤除菌微量元素液，加入加入适量0#柴油，最终配置柴油浓度为1500g/L。设置以下不同组别的菌液组合：空白对照组：不含菌的LB液体培养基实验组1:2％假结合棒杆菌ATCC19410菌液实验组2:2％假单胞菌LS1菌液实验组3：2％接近棒杆菌ATCC51488实验组4:2％假结合棒杆菌ATCC19410菌液+1％假单胞菌LS1菌液+2％接近棒杆菌ATCC51488将各组按照2％液体(空白组、实验组1、2，3,4菌液)总量接种至柴油培养基中，30℃,60℃、180r/min振荡本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种降解柴油的复合菌剂，其包括：/n假单胞菌LS1，假结合棒杆菌 ATCC 19410，接近棒杆菌ATCC 51488必要的辅剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种降解柴油的复合菌剂，其包括：
假单胞菌LS1，假结合棒杆菌ATCC19410，接近棒杆菌ATCC51488必要的辅剂。


2.权利要求1所述的降解柴油的复合菌剂，其特征在于：
做成粉末剂型。


3.权利要求1所述的降解柴油的复合菌剂，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘文慧，
申请(专利权)人：南昌诺汇医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36