一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法技术

本发明专利技术提供了一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法，包括以下步骤：1)提供针对特定脑膜炎球菌血清群的抗血清，其中该抗血清中包含针对所述特定脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的所需抗体和针对其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的干扰抗体；2)向所述抗血清中加入至少一种所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖；3)当所述抗血清开始由清澈变浑浊时，停止加入所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖，并去除浑浊物。本发明专利技术的方法能够有效去除交叉反应，获得特异性的纯化的脑膜炎球菌抗血清，所获得的抗血清质量稳定、基本无交叉反应、效价较高，可用于脑膜炎球菌疫苗的所有免疫学检测。

A method of de cross reaction of meningococcal antiserum

【技术实现步骤摘要】
一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法
本专利技术属于生物医药领域，具体而言，涉及一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法。
技术介绍
流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)是由脑膜炎球菌感染引起的一种呼吸道传染病。脑膜炎球菌为革兰阴性细菌，根据其荚膜多糖的化学结构，可将该细菌分为A、B、C、D等13个血清群，其中A、B、C、Y和W135群为主要流行菌群。据统计报道，全世界每年发生流脑病例约50万，其中以儿童为主，对人类健康造成严重威胁。脑膜炎球菌疫苗的接种对于中国预防和控制流脑流行发挥了重要作用，根据制备工艺不同，脑膜炎球菌疫苗包括脑膜炎球菌多糖疫苗(MPV)、脑膜炎球菌多糖结合疫苗(MCV)及联合疫苗。多糖抗原是脑膜炎球菌疫苗的主要抗原成分，多糖含量测定在疫苗的质量控制中尤为重要，在实际工作中常采用化学或免疫学方法测定疫苗多糖含量。化学法只能检测单价脑膜炎球菌疫苗(如MPV-A)，多价脑膜炎球菌疫苗(如MPV-AC、MPV-ACYW、MCV-AC、MCV-ACYW135、MCV-AC-Hib)群间存在严重交叉干扰，只能借助于高度特异性的免疫学检测手段，如火箭电泳法、速率比浊法等。但这些方法对抗原性的分析完全依赖于血清中的抗体，供试品中存在多种多糖抗原或/和载体蛋白的干扰，要求血清具备高度的特异性；某些长期试验(如稳定性试验、相容性试验)开展时间长达3年或以上，要求血清具备良好的稳定性。因此，需要对现有抗血清纯化技术进行改进，以使得脑膜炎球菌疫苗的多糖含量检测更加简便、高效。
技术实现思路
为解决上述现有技术中所存在的问题，本专利技术提供了一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法。具体而言，本专利技术提供了：(1)一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法，包括以下步骤：1)提供针对特定脑膜炎球菌血清群的抗血清，其中该抗血清中包含针对所述特定脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的所需抗体和针对其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的干扰抗体；2)向所述抗血清中加入至少一种所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖；3)当所述抗血清开始由清澈变浑浊时，停止加入所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖，并去除浑浊物。(2)根据(1)所述的方法，其中在步骤2)中，以逐滴的方式加入至少一种所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖(3)根据(1)所述的方法，其中在步骤2)中，所加入的其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的浓度为大于或等于5mg/mL。(4)根据(1)所述的方法，其中重复步骤2)和步骤3)，直至加入至少一种所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖后，抗血清不再变浑浊。(5)根据(1)所述的方法，其中在步骤3)中，通过离心去除所述浑浊物。(6)根据(1)所述的方法，其中在步骤2)中，所加入的其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖为精制荚膜多糖。(7)根据(1)所述的方法，其中所述特定脑膜炎球菌血清群为脑膜炎球菌W135血清群和脑膜炎球菌Y血清群中的一者，所述其他脑膜炎球菌血清群为脑膜炎球菌W135血清群和脑膜炎球菌Y血清群中的另一者。(8)根据(1)-(7)中任一项所述的方法，其中所述方法还包括：4)对去除所述浑浊物的脑膜炎球菌抗血清进行除菌过滤。本专利技术与现有技术相比具有以下优点和积极效果：本法明提出通过加入其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖来将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应，从而得到特异性的脑膜炎球菌抗血清，进而解决脑膜炎球菌疫苗多糖含量检测的问题。本专利技术的方法能够有效去除交叉反应，获得特异性的纯化的脑膜炎球菌抗血清，所获得的抗血清质量稳定、基本无交叉反应、效价较高，可用于脑膜炎球菌疫苗的所有免疫学检测。相比于传统的添加菌液去交叉反应的方法，本专利技术的方法高效、稳定、可控性强、简便。特别地，可实现更有效的添加，而且稳定性更强，脑膜炎球菌菌液以混悬液的形式4℃保存，批间差异大且稳定性只有数月，而所添加的荚膜多糖可以抽真空冻干的形式-70℃储存，稳定性长达5年以上。另外，本专利技术进一步提出以逐滴的方式添加荚膜多糖，可以出乎意料地获得非常优异的吸收纯化/去交叉反应效果，抗血清的交叉反应可以被全部去除，血清特异性大幅度增强，由此具备更加优良的应用价值，可用于脑膜炎球菌疫苗的所有免疫学检测。而且更易控制多糖的添加量，荚膜多糖以逐滴加入的方式能够刚好去除非特异性成分而不过分添加。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。为了解决上述现有技术中的问题，本专利技术的专利技术人提出制备稳定、无交叉反应的脑膜炎球菌抗血清是控制脑膜炎球菌疫苗质量的关键因素。然而，脑膜炎球菌抗血清吸收纯化/去交叉反应的方法少有报道，其他致病菌抗血清吸收纯化/去交叉反应的方法虽有诸多报道和研究，但仍存在一些不足。例如，文献“LUNDE,HENRICHSENJ.Laboratorydiagnosis,serologyandepidemiologyofStreptococcuspneumonia[M]//BERGANT,NORRISJR.Methodsinmicrobiology.NewYork:AcademicPress,1978:242-261”中描述了一种经典的肺炎球菌抗血清吸收纯化/去交叉反应的方法，即在存在交叉反应的肺炎球菌血清中，按经验不等体积适量加入对应型别的肺炎球菌菌液来吸收血清中的非特异性成分。该方法本身并不繁琐，但添加物肺炎球菌菌液的制备过程却相当耗时耗力：将肺炎球菌菌株传种于固体培养基上，然后刮取菌苔经液体培养基培养，待生长至适宜的OD时收获，灭活处理后离心弃上清，生理盐水洗涤收集的菌体两次，再以比浊法将菌体浓度稀释至适宜浓度。此外，添加物肺炎球菌菌液的制备不可避免的存在批间差异，且菌液在4℃保存，稳定性较差。本专利技术的专利技术人通过充分地研究和试验以及巧妙地构思，创新性地提出通过加入荚膜多糖的方式来将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应。由此，本专利技术提供了一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法，该方法包括以下步骤：1)提供针对特定脑膜炎球菌血清群的抗血清，其中该抗血清中包含针对所述特定脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的所需抗体和针对其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的干扰抗体；2)向所述抗血清中加入至少一种所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖；3)当所述抗血清开始由清澈变浑浊时，停止加入所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖，并去除浑浊物。相比于用菌液来吸收血清中的非特异性成分，本专利技术的方法高效、稳定、可控性强、简便，特别地，可实现①更有效的添加，添加物荚膜多糖为脑膜炎球菌毒力的必须条件和主要因素；②稳定性更强，脑膜炎球菌菌液以混悬液的形式4℃保存，批间差异大且稳定性只有数月，而多糖(如精制多糖)以抽真空冻干的形式-70℃储存，稳定性长达5年以上。在吸收纯化/去交叉反应的效果上，本专利技术的方法能够有效去除交叉本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法，包括以下步骤：/n1)提供针对特定脑膜炎球菌血清群的抗血清，其中该抗血清中包含针对所述特定脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的所需抗体和针对其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的干扰抗体；/n2)向所述抗血清中加入至少一种所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖；/n3)当所述抗血清开始由清澈变浑浊时，停止加入所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖，并去除浑浊物。/n

【技术特征摘要】
1.一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法，包括以下步骤：
1)提供针对特定脑膜炎球菌血清群的抗血清，其中该抗血清中包含针对所述特定脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的所需抗体和针对其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的干扰抗体；
2)向所述抗血清中加入至少一种所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖；
3)当所述抗血清开始由清澈变浑浊时，停止加入所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖，并去除浑浊物。


2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤2)中，以逐滴的方式加入至少一种所述其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖。


3.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤2)中，所加入的其他脑膜炎球菌血清群的荚膜多糖的浓度为大于或等于5mg/mL。


4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘倩，罗树权，刘方蕾，白贵杰，
申请(专利权)人：兰州生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：甘肃;62