重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用制造技术

本发明专利技术提供了重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用，属于免疫调节技术领域，所述重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2能够诱导小鼠机体产生Th2型免疫应答，诱导小鼠的CD4

Application of recombinant thioredoxin peroxidase 2 from Trichinella spiralis in the preparation of vaccine against Trichinella spiralis infection

【技术实现步骤摘要】
重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用
本专利技术属于免疫调节
，尤其涉及重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用。
技术介绍
旋毛虫为线形动物门(PhylumNemathelminthes)线虫纲(Nematoda)寄生蠕虫，又称旋毛形线虫(Trichinellaspiralis)。旋毛虫能够引起人和其他哺乳动物(猪、犬、猫、熊、狐、鼠)的严重疾病——旋毛虫病(trichinosis)。旋毛虫在宿主小肠内交配，然后雌虫钻入肠壁内产出幼虫，幼虫被淋巴/血液带到身体各部。在肌肉组织中，旋毛虫幼虫诱导肌细胞发生一系列生理、生化特征及结构的重建，使之丧失肌细胞的特性，形成包囊。感染性的旋毛虫肌幼虫被合适的宿主吞食後，感染性第一期幼虫被消化释放出来，迅速进入小肠中的细胞内龛中，经4次蜕皮，发育成成虫。旋毛虫成虫寄生在小肠，称肠期；幼虫寄生在横纹肌内，称肌肉期。旋毛虫病呈世界性广泛分布，尤其是欧洲及北美流行较为严重。我国旋毛虫病呈现局部与暴发感染流行的特点。现阶段众多学者都在进行旋毛虫的免疫预防研究，但到目前为止尚无适用的生物制品。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用；所述重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2能够诱导小鼠机体产生Th2型免疫应答，诱导小鼠的CD4+T细胞的增殖以及巨噬细胞转化成M2型；而上述这些免疫应答反应在抗旋毛虫感染过程中发挥主要作用；因此，重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2作为抗原分子，能够用于制备抗旋毛虫感染疫苗。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用。优选的，所述抗旋毛虫感染疫苗为亚单位疫苗。优选的，所述抗旋毛虫感染疫苗还包括佐剂。优选的，所述佐剂包括完全弗氏佐剂和/或不完全弗氏佐剂。优选的，所述抗旋毛虫感染疫苗的作用对象包括哺乳动物。优选的所述哺乳动物包括人和小鼠。本专利技术提供了重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备诱导巨噬细胞分化的生物制剂中的应用。优选的，所述重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2诱导巨噬细胞分化为M2型细胞。本专利技术提供了所述的巨噬细胞在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用。本专利技术提供了重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备激活CD4+T细胞的生物制剂中的应用，所述重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2通过诱导巨噬细胞分化为M2型细胞；所述M2型细胞能够刺激CD4+T细胞向Th2表型转化。本专利技术的有益效果：本专利技术提供的重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2(rTsTPX2，以下简称rTsTPX2)在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用；所述重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2能够刺激巨噬细胞，使巨噬细胞中的Arg-1和MRC-1基因上调表达，以替代途径激活(alternativelyactivatedmacrophages)巨噬细胞使其分化成M2型细胞。所述rTsTPX2诱导激活的巨噬细胞刺激CD4+T细胞显著增殖；经rTsTPX2诱导激活的巨噬细胞刺激CD4+T细胞后，CD4+T细胞能够大量分泌IL-4细胞因子，产生Th2型免疫应答反应。根据本专利技术实施例的记载，用所述rTsTPX2刺激巨噬细胞，将刺激后的巨噬细胞腹腔注射Balb/C小鼠，结果显示，经rTsTPX2刺激巨噬细胞过继的小鼠体内IL-4水平显著升高，IFN-γ的水平显著下降；CD4+T细胞显著升高，但CD8+T细胞含量显著下降。过继后3周，每只小鼠经口感染500条旋毛虫肌幼虫，计算旋毛虫3日龄成虫的减虫率。结果显示，较过继未经rTsTPX2蛋白刺激的巨噬细胞的小鼠，实验组小鼠肠道内3日龄成虫数量下降了44.7％。说明所述rTsTPX2能够用于制备抗旋毛虫感染疫苗，效果显著。用所述rTsTPX2免疫小鼠三次后，每只小鼠经口感染200条旋毛虫肌幼虫，计算旋毛虫肌幼虫的减虫率，以(不)完全弗氏佐剂与PBS混合液免疫小鼠作为对照组；结果显示，较对照组，rTsTPX2免疫小鼠肌幼虫的数量下降39.6％。附图说明图1为rTsTPX2体外诱导巨噬细胞表型的分化结果，其中A为qRT-PCR方法检测rTsTPX2体外刺激RAW264.7细胞后Arg-1和MRC-1基因的表达；B为qRT-PCR方法检测rTsTPX2体外刺激Babl/C鼠外周血巨噬细胞后Arg-1和MRC-1基因的表达；C为WesternBlotting方法检测rTsTPX2体外刺激RAW264.7细胞后Arg-1和MRC-1基因的表达；D为WesternBlotting方法检测rTsTPX2体外刺激Babl/C鼠外周血巨噬细胞后Arg-1和MRC-1基因的表达；图2为rTsTPX2刺激分化的巨噬细胞诱导CD4+T细胞分化与增殖结果，其中A为rTsTPX2刺激分化的巨噬细胞诱导CD4+T细胞增殖的MTs实验；B为ELISA方法检测巨噬细胞与CD4+T细胞共培养的上清液中的IL-4和IFN-γ；***p<0.001，**0.001<p<0.01，*0.01<p<0.05；n≥3。图3为rTsTPX2诱导小鼠Th2免疫应答结果，其中A～C为ELISA检测rTsTPX2免疫小鼠的IL-4变化；D～F为ELISA检测rTsTPX2免疫小鼠的IFN-γ变化；G为设门策略分析外周血淋巴细胞中的CD4+T细胞和CD8+T细胞，其中(I)标记恰当的T细胞，(II)基于(I)对CD3+T细胞设门，(III)基于(II)对CD8+T细胞设门，(IV)基于(II)对CD4+T细胞设门；H：免疫小鼠外周血CD4+T细胞和CD8+T的比例；***p<0.001，**0.001<p<0.01，*0.01<p<0.05；n≥5；图4为rTsTPX2诱导激活的巨噬细胞过继小鼠的抗旋毛虫感染效果；图5为rTsTPX2诱导激活的巨噬细胞过继小鼠的免疫应答反应类型结果，其中(A)为rTsTPX2诱导激活的巨噬细胞过继小鼠3周后的IL-4和IFN-γ的水平；(B)为rTsTPX2诱导激活的巨噬细胞过继小鼠的CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例；***p<0.001，**0.001<p<0.01，*0.01<p<0.05；n≥7。具体实施方式本专利技术提供了重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用。在本专利技术中，所述重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2的克隆以及制备方法参见参考文献Zhangetal.,CloningandcharacterizationofthioredoxinperoxidasesfromTrichinellaspiralis.VeterinaryParasitology231(2016)53–58.中的记载；所述重组旋毛虫硫氧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.重组旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶2在制备抗旋毛虫感染疫苗中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗旋毛虫感染疫苗为亚单位疫苗。


3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述抗旋毛虫感染疫苗还包括佐剂。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述佐剂包括完全弗氏佐剂和/或不完全弗氏佐剂。


5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗旋毛虫感染疫苗的作用对象包括哺乳动物。


6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述哺乳动物包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：张念章，李文卉，金启旺，秦洪涛，付宝权，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62