一种干细胞组合物及其应用制造技术

本发明专利技术一种干细胞组合物及其在痛风疾病上的应用，具体涉及乳牙间充质干细胞及没食子酸的组合物，及该组合物在痛风上的应用。干细胞组合物包括：乳牙间充质干细胞和没食子酸及稳定剂。乳牙间充质干细胞同没食子酸混合后的细胞组合物对痛风具有良好的治疗和缓解效果，降低痛风进展中痛疼，关节肿胀等，且该组合物从根本上修复机体细胞功能，降低患者复发几率。

A stem cell composition and its application

【技术实现步骤摘要】
一种干细胞组合物及其应用
：本专利技术涉及生物
，具体涉及干细胞组合物及其在疾病上的应用，更具体涉及干细胞组合物在痛风疾病上的应用。
技术介绍
：干细胞被普遍定义为能自我更新和多系分化的克隆形成细胞，根据细胞来源可将干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞。当受精卵分裂发育成胚泡时，内层细胞团的细胞即为胚胎干细胞。胚胎干细胞具有全能性，可以自我更新并具分化为体内所有组织的能力，但是对其的研究利用牵涉到一定的伦理问题。成体干细胞来自成年动物的许多组织和器官，在特定的条件下，成体干细胞能够进行一定的程序分化，形成新的功能细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。在口腔中也发现了多种干细胞，例如上皮内的干细胞、牙髓中的干细胞和牙周膜中的干细胞等，还有与牙齿相关组织有关的间充质干细胞。他们不仅有自我更新能力，还能多系分化成各种组织。利用患者的自体干细胞，可分化为包括培养牙本质、牙髓在内的各种组织，为口腔颌面外科的损伤修复提供了无限可能。剥落乳牙牙髓干细胞(SHED：stemcellsfromexfoliateddeciduousteeth)是从人类乳牙牙髓中分离出来的具有较强增殖能力和多向分化潜能的成体间充质干细胞，有学者又称为未成熟的牙髓干细胞(immaturedentalpulpstemcells)。SHED不仅表达STRO-1、CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、MUC18、CD146和CD166等间充质干细胞标志，还表达胚胎干细胞标志(Oct4和Nanog)、阶段特异性胚胎抗原(SSEA-3和SSEA-4)以及肿瘤识别抗原(TRA-1-60和TRA-A-81)等。与牙髓干细胞相比，脱落乳牙干细胞增殖活性高、群体倍增时间短、克隆形成能力强，细胞中MMP1、TIMP1、MMP2、TIMP2和IL-6等炎性因子表达水平较高。多向分化能力与DPSC相似，包括成骨、成牙本质、成脂、成软骨、成肌等，而SHED细胞的成血管、成神经分化能力强于DPSC。由于其可表达多种神经细胞标志，在神经诱导培养基诱导下，βⅢ-tubulin、GAD等神经细胞标志性蛋白的表达水平上调，细胞突起较多，形成类似神经干细胞的球样集落。在血管内皮生长因子的刺激下，脱落乳牙干细胞可表达VEGF2、CD31、血管内皮钙粘蛋白等血管内皮标志性蛋白，形成毛细血管。此外SHED细胞还具有诱导周边宿主分化形成骨形成细胞的特性。体内移植实验可以形成牙本质牙髓样组织、成牙本质样细胞及骨样组织，但不能形成完整牙髓牙本质复合体样结构。以上提示了SHED是一类更为原始、属于发育早期的干细胞。痛风是一种由于嘌呤生物合成代谢增加，尿酸产生过多或因尿酸排泄不良而致血中尿酸升高，尿酸盐结晶沉积在关节滑膜、滑囊、软骨及其他组织中引起的反复发作性炎性疾病。它是由于单钠尿酸盐结晶(MSU)或尿酸在细胞外液形成超饱和状态，使其晶体在组织中沉积而造成的一组异源性疾病。本病以关节液和痛风石中可找到有双折光性的单水尿酸钠结晶为其特点。其临床特征为：高尿酸血症及尿酸盐结晶、沉积所致的特征性急性关节炎、痛风石、间质性肾炎，严重者见关节畸形及功能障碍，常伴尿酸性尿路结石。病因分为原发性和继发性两大类。在现有的痛风治疗方案中，经常有以下几种药物治疗方法：1、抑制尿酸生成；2、促尿酸排泄物；3、新型降尿酸药；4、碱性药物：在降尿酸治疗的同时简化尿酸。目前有报道称可以采用干细胞治疗痛风。各种治疗方法有效的同时也有其欠缺的地方。
技术实现思路
针对上述所述问题，本专利技术公开了一种干细胞组合物及其在痛风疾病上的应用，具体涉及乳牙间充质干细胞及没食子酸的组合物，该组合物在痛风上的应用。所述干细胞组合物包括：乳牙间充质干细胞和没食子酸及稳定剂。其中干细胞组合物中乳牙间充质干细胞为1-2.5*1010个/ml。上述没食子酸的浓度为0.5-50μg/ml。其中所述稳定剂选用枸橼酸。其中上述稳定剂不仅包含枸橼酸，可以包括其他可以稳定组合物体系的其他稳定剂或缓冲剂等。干细胞与没食子酸在无菌条件下混合，将没食子酸加入干细胞液中，并在37℃水浴锅中孵育10-30Min，并通过常规方法混匀细胞组合物，后分装细胞组合物于容器中。上述干细胞组合物在痛风上的应用。进一步的，上述所述痛风为在进行西药、中药及其结合治疗后治疗效果不佳、容易复发的痛风。其中上述乳牙间充质干细胞的获得方法如下培养基：无血清完全培养基I：含DMEM基础培养基，2mM/LL-谷氨酰胺，4％UltroserG溶液，充分混匀，4℃冰箱保存。无血清完全培养基II:含DMEM基础培养基，2mM/LL-谷氨酰胺，10％KnockOutSR血清替代物，10ng/mlEGF，10ng/mlbFGF。培养方法：1)新鲜剥落的乳牙采用MasakoMiura等的分离办法，用I型胶原酶消化后，过滤离心获得间充质干细胞进行原代培养，培养基为无血清完全培养基Ⅱ与无血清完全培养基Ⅰ的混合培养基，培养周期7-14天；2)将培养有P0代乳牙间充质干细胞的T75方瓶中的细胞原始培养基吸弃，加入DPBS洗涤一次；3)加入0.25％的胰蛋白酶消化4-10分钟后用无血清完全培养基Ⅱ重悬细胞；4)将细胞悬液转移至无菌离心管中，200-500G，20℃，离心5-10分钟；5)离心后去上清，使用无血清完全培养基Ⅱ以5×104cells/ml接种于新的T25方瓶中，然后再加入培养基Ⅰ，用移液管反复吹打混匀，然后将方瓶放置于二氧化碳培养箱中，在37℃，5％二氧化碳浓度中培养直至细胞汇合度为80％-90％；6)在细胞达到上述汇合度时，将方瓶从二氧化碳培养箱转移至生物安全柜中，吸弃原始培养基，加入DPBS洗涤一次，弃DPBS；7)加入胰蛋白酶37℃消化4-10分钟；8)消化结束后用无血清完全培养基Ⅱ重悬细胞，并将细胞悬液转移至无菌离心管中，400G，20℃，离心5分钟，离心结束后去上清；9)用无血清完全培养基Ⅱ以5×104cells/ml接种于新的方瓶中，然后再加入培养基Ⅰ，用移液管反复吹打混匀，然后将方瓶放置于二氧化碳培养箱中，在37℃，5％二氧化碳浓度中培养直至细胞汇合度为80％-90％；10)在细胞再次达到上述汇合度时，将方瓶从二氧化碳培养箱转移至生物安全柜中，吸弃原始培养，加入DPBS洗涤一次，弃DPBS；11)加入胰蛋白酶37℃消化4-10分钟后用无血清完全培养基Ⅱ重悬细胞，并将细胞悬液转移至无菌离心管中，400-600G，20℃，离心5-10分钟，离心结束后去上清；12)用无血清完全培养基Ⅱ以5.5×104cells/ml接种于新的方瓶中，然后再加入培养基Ⅰ，用移液管反复吹打混匀后将方瓶放置于二氧化碳培养箱中，在37℃，5％二氧化碳浓度中培养直至细胞汇合度为80％-90％。其中上述无血清完全培养基Ⅱ与无血清完全培养基Ⅰ的使用比例为1-5:1。本专利技术所用原料和试剂除有特殊说明外，均本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种干细胞组合物，其特征在于：所述干细胞组合物包括：乳牙间充质干细胞和没食子酸及稳定剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种干细胞组合物，其特征在于：所述干细胞组合物包括：乳牙间充质干细胞和没食子酸及稳定剂。


2.根据权利要求1所述干细胞组合物，其特征在于：其中干细胞组合物中乳牙间充质干细胞为1-2.5*1010个/ml。


3.根据权利要求2所述干细胞组合物，其特征在于：其中干细胞组合物中乳牙间充质干细胞为2*1010个/ml。


4.根据权利要求1所述干细胞组合物，其特征在于：所述没食子酸的浓度为0.5-50μg/ml。


5.根据权利要求3所述干细胞组合物，其特征在于：所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟亮，吴疆，吴向阳，
申请(专利权)人：青海晨菲制药有限公司，
类型：发明
国别省市：青海;63