试样观察装置和试样观察方法制造方法及图纸

试样观察装置(1)包括：保持被第一荧光物质染色的试样(S)和包含第二荧光物质的溶液(W)的试样容器(2)；照射第一激发光(L1)和第二激发光(L2)的照射部(11)；在一个方向上扫描试样容器(2)的扫描部(12)；将来自试样(S)的第一荧光(J1)和来自溶液(W)的第二荧光(J2)成像的成像部(17)；输出基于第一荧光(J1)的第一图像数据(G1)和基于第二荧光(J2)的第二图像数据(G2)的拍摄部(13)；生成基于多个第一图像数据(G1)的第一荧光图像(F1)和基于多个第二图像数据(G2)的第二荧光图像(F2)的图像处理部(32)；和基于第二荧光图像(F2)确定试样(S)的存在区域(N4)，设定第一荧光图像(F1)中的解析区域(N5)的解析部(33)。

Sample observation device and method

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】试样观察装置和试样观察方法
本专利技术涉及试样观察装置和试样观察方法。
技术介绍
作为观察细胞等试样的技术，例如具有非专利文献1所记载的方法。该现有的方法中，用荧光物质将细胞核染色，基于激发荧光物质而得到的荧光图像确定细胞核的位置。然后，基于确定的细胞核的位置推测试样的存在区域，设定解析区域。现有技术文献非专利文献非专利文献1：PerkinElmerAPPLICATIONNOTE,“Image-basedQuantificationofApoptosisusingtheOperetta”
技术实现思路
专利技术所要解决的课题上述的现有的方法中，仅是基于细胞核的位置推测试样的存在区域，难以说确定解析区域的精度充分。为了基于荧光强度高精度地实施试样的分析，需要能够以充分的精度确定解析区域的技术。本专利技术是为了解决上述课题而研发的，其目的在于，提供能够以充分的精度确定解析区域的试样观察装置和试样观察方法。用于解决课题的方案本专利技术的一个方面提供一种使用荧光观察试样的试样观察装置，其包括：试样容器，其将被第一荧光物质染色的试样保持于注入有包含第二荧光物质的溶液的孔内；照射部，其向孔照射激发第一荧光物质的第一激发光和激发第二荧光物质的第二激发光；扫描部，其在与第一激发光和第二激发光的光轴交叉的一个方向上相对地扫描试样容器；成像部，其将因第一激发光而在试样产生的第一荧光和因第二激发光而在溶液产生的第二荧光分别成像；拍摄部，其拍摄由成像部成像的第一荧光的光像的至少一部分而输出第一图像数据，且拍摄由成像部成像的第二荧光的光像的至少一部分而输出第二图像数据；图像处理部，其基于对于一个方向所得到的多个第一图像数据生成第一荧光图像，且基于对于一个方向所得到的多个第二图像数据生成第二荧光图像；和解析部，其基于第二荧光图像确定试样的存在区域，基于试样的存在区域设定第一荧光图像中的解析区域，解析解析区域中的荧光的强度。该试样观察装置中，基于来自将试样染色的第一荧光物质的第一荧光生成第一荧光图像，并基于来自包含于溶液的第二荧光物质的第二荧光生成第二荧光图像。利用该第二荧光图像能够掌握试样的存在区域。因此，基于第二荧光图像确定试样的存在区域，且基于该存在区域设定第一荧光图像的解析区域，由此，能够基于第一荧光图像的解析区域的荧光强度，高精度地实施试样的分析。另外，也可以是，成像部具有切换部，该切换部在成像光路上切换使第一荧光透过的第一荧光滤光片和使第二荧光透过的第二荧光滤光片。此时，能够通过简单的结构实现第一荧光与第二荧光的分割。另外，也可以是，成像部具有分割第一荧光与第二荧光的光分割元件，拍摄部具有：拍摄由光分割元件分割后的第一荧光的至少一部分的第一光检测器；和拍摄由光分割元件分割后的第二荧光的至少一部分的第二光检测器。此时，能够通过简单的结构实现第一荧光与第二荧光的分割。另外，也可以是，成像部具有分割第一荧光与第二荧光的光分割元件，拍摄部包括光检测器，该光检测器具有拍摄由光分割元件分割后的第一荧光的至少一部分的第一拍摄区域和拍摄由光分割元件分割后的第二荧光的至少一部分的第二拍摄区域。此时，能够通过简单的结构实现第一荧光与第二荧光的分割。另外，也可以是，第一激发光和第二激发光为面状光。此时，在拍摄部能够将第一图像数据和第二图像数据作为二维数据取得。另外，也可以是，成像部具有相对于第一激发光和第二激发光的照射面倾斜的观察轴。此时，不需要视野选择动作，能够同时进行试样的扫描和拍摄。因此，能够实现直到得到第一荧光图像和第二荧光图像的吞吐量的提高。另外，也可以是，解析部通过对第二荧光图像进行二值化，提取试样的存在区域。此时，能够通过二值化而高精度地提取试样的存在区域。另外，第一激发光的波长和第二激发光的波长可以是不同的波长，也可以是相同的波长。在第一激发光的波长和第二激发光的波长不同的情况下，不同的荧光物质的激发变得容易。即使在第一激发光的波长和第二激发光的波长相同的情况下，在第一荧光的波长和第二荧光的波长不同的情况下，也能够取得第一荧光图像和第二荧光图像。另外，第一荧光的波长和第二荧光的波长可以是不同的波长，也可以是相同的波长。在第一荧光的波长和第二荧光的波长不同的情况下，容易利用第二荧光图像掌握试样的存在区域。即使在第一荧光的波长和第二荧光的波长相同的情况下，在第一荧光物质的激发波长和第二荧光物质的激发波长不同的情况下，也能够通过在不同的时机进行第一激发光的激发和第二激发光的激发，而得到第一荧光图像和第二荧光图像。另外，本专利技术的一个方面提供一种使用荧光观察试样的试样观察方法，其包括：将被第一荧光物质染色的试样保持于注入有包含第二荧光物质的溶液的试样容器的孔内的准备步骤；向孔照射激发第一荧光物质的第一激发光和激发第二荧光物质的第二激发光的照射步骤；在与第一激发光和第二激发光的光轴交叉的一个方向上相对地扫描试样容器的扫描步骤；将因第一激发光而在试样产生的第一荧光和因第二激发光而在溶液产生的第二荧光分别成像的成像步骤；拍摄由成像步骤成像的第一荧光的光像的至少一部分而输出第一图像数据，拍摄由成像步骤成像的第二荧光的光像的至少一部分而输出第二图像数据的拍摄步骤；基于对于一个方向所得到的多个第一图像数据生成第一荧光图像，且基于对于一个方向所得到的多个第二图像数据生成第二荧光图像的图像处理步骤；和基于第二荧光图像确定试样的存在区域，基于存在区域设定第一荧光图像的解析区域，解析解析区域中的荧光的强度的解析步骤。该试样观察方法中，基于来自将试样染色的第一荧光物质的第一荧光生成第一荧光图像，并基于来自包含于溶液的第二荧光物质的第二荧光生成第二荧光图像。利用该第二荧光图像能够掌握试样的存在区域。因此，基于第二荧光图像确定试样的存在区域，基于该存在区域设定第一荧光图像的解析区域，由此能够基于第一荧光图像的解析区域的荧光强度来高精度地实施试样的分析。另外，也可以是，还具有在成像光路上切换使第一荧光透过的第一荧光滤光片和使第二荧光透过的第二荧光滤光片的切换步骤。此时，能够通过简单的结构实现第一荧光与第二荧光的分割。另外，也可以是，还具有利用光分割元件分割第一荧光与第二荧光的光分割步骤，拍摄步骤具有：拍摄由光分割元件分割后的第一荧光的至少一部分的第一拍摄步骤；和拍摄由光分割元件分割后的第二荧光的至少一部分的第二拍摄步骤。此时，能够通过简单的结构实现第一荧光与第二荧光的分割。另外，也可以是，还具有利用光分割元件分割第一荧光与第二荧光的光分割步骤，拍摄步骤中，利用具有包含第一拍摄区域和第二拍摄区域的受光面的光检测器，在第一拍摄区域拍摄由光分割元件分割后的第一荧光的至少一部分，在第二拍摄区域拍摄由光分割元件分割后的第二荧光的至少一部分。此时，能够通过简单的结构实现第一荧光与第二荧光的分割。另外，也可以是，成像步骤中，使用具有相对于照射面倾斜的观察轴的成像部，将通过面状光的照射而产生的第一荧光和第二荧光分别成像。此时，不需要视野选择本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种使用荧光来观察试样的试样观察装置，其特征在于，包括：/n试样容器，其将被第一荧光物质染色的所述试样保持于注入有包含第二荧光物质的溶液的孔内；/n照射部，其向所述孔照射激发所述第一荧光物质的第一激发光和激发所述第二荧光物质的第二激发光；/n扫描部，其在与所述第一激发光和所述第二激发光的光轴交叉的一个方向上相对地扫描所述试样容器；/n成像部，其将因所述第一激发光而在所述试样产生的第一荧光和因所述第二激发光而在所述溶液产生的第二荧光分别成像；/n拍摄部，其拍摄由所述成像部成像的所述第一荧光的光像的至少一部分而输出第一图像数据，且拍摄由所述成像部成像的所述第二荧光的光像的至少一部分而输出第二图像数据；/n图像处理部，其基于对于所述一个方向所得到的多个所述第一图像数据生成第一荧光图像，且基于对于所述一个方向所得到的多个所述第二图像数据生成第二荧光图像；和/n解析部，其基于所述第二荧光图像确定所述试样的存在区域，基于所述试样的存在区域设定所述第一荧光图像中的解析区域，解析所述解析区域中的荧光的强度。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170711 JP 2017-1354261.一种使用荧光来观察试样的试样观察装置，其特征在于，包括：
试样容器，其将被第一荧光物质染色的所述试样保持于注入有包含第二荧光物质的溶液的孔内；
照射部，其向所述孔照射激发所述第一荧光物质的第一激发光和激发所述第二荧光物质的第二激发光；
扫描部，其在与所述第一激发光和所述第二激发光的光轴交叉的一个方向上相对地扫描所述试样容器；
成像部，其将因所述第一激发光而在所述试样产生的第一荧光和因所述第二激发光而在所述溶液产生的第二荧光分别成像；
拍摄部，其拍摄由所述成像部成像的所述第一荧光的光像的至少一部分而输出第一图像数据，且拍摄由所述成像部成像的所述第二荧光的光像的至少一部分而输出第二图像数据；
图像处理部，其基于对于所述一个方向所得到的多个所述第一图像数据生成第一荧光图像，且基于对于所述一个方向所得到的多个所述第二图像数据生成第二荧光图像；和
解析部，其基于所述第二荧光图像确定所述试样的存在区域，基于所述试样的存在区域设定所述第一荧光图像中的解析区域，解析所述解析区域中的荧光的强度。


2.根据权利要求1所述的试样观察装置，其特征在于：
所述成像部具有切换部，该切换部在成像光路上切换使所述第一荧光透过的第一荧光滤光片和使所述第二荧光透过的第二荧光滤光片。


3.根据权利要求1所述的试样观察装置，其特征在于：
所述成像部具有分割所述第一荧光与所述第二荧光的光分割元件，
所述拍摄部具有：拍摄由所述光分割元件分割后的所述第一荧光的至少一部分的第一光检测器；和拍摄由所述光分割元件分割后的所述第二荧光的至少一部分的第二光检测器。


4.根据权利要求1所述的试样观察装置，其特征在于：
所述成像部具有分割所述第一荧光与所述第二荧光的光分割元件，
所述拍摄部包括光检测器，该光检测器具有拍摄由所述光分割元件分割后的所述第一荧光的至少一部分的第一拍摄区域和拍摄由所述光分割元件分割后的第二荧光的至少一部分的第二拍摄区域。


5.根据权利要求1～4中任一项所述的试样观察装置，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：杉山范和，松原正典，山本谕，
申请(专利权)人：浜松光子学株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP