本发明专利技术提供了一种黄芪桂枝五物汤全成分的分析方法，属于药物分析技术领域。本发明专利技术采用超快速高效液相色谱三重四级杆飞行时间串联质谱联用(HPLC‑Q‑TOF‑MS/MS)技术对黄芪桂枝五物汤样品进行检测，同时采用药典标识性的5种化学成分——黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、葡萄糖苷、桂皮醛、芍药苷、6‑姜辣素对黄芪桂枝五物汤检测结果进行确认，明确识别了31种成分，实现了对黄芪桂枝五物汤复方成分的全面分析，提高了其质量控制的可靠性。
An analytical method for the total components of Huangqi Guizhi Wuwu Decoction
【技术实现步骤摘要】
一种黄芪桂枝五物汤全成分的分析方法
本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种黄芪桂枝五物汤全成分的分析方法。
技术介绍
黄芪桂枝五物汤于汉代张仲景《金匮要略》首次记载，由黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣5味中药组成，具有益气温经，和营通痹之效，为治疗血痹虚劳症的名方，现代临床常用于治疗糖尿病神经性病变、中风后遗症、血栓闭塞性脉管炎和颈椎病等疾病。现有的关于黄芪桂枝五物汤的成分研究，包括运用HPLC-ELSD(高效液相色谱-蒸发光散射法)、LC-MS(液相色谱-质谱联用法)、UFLC(超快速液相色谱法)法对黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芍药苷、芍药内酯苷和桂皮酸这些主要成分进行含量测定，以达到综合评价黄芪桂枝五物汤的质量的目的；并且使用HPLC方法[4]建立黄芪桂枝五物汤中药指纹图谱，试图为黄芪桂枝五物汤的质量控制提供依据。但目前对黄芪桂枝五物汤的成分研究存在一定的局限和不足：(1)含量检测方法主要集中在组方单味药材以及代表性成分的含量测定研究；(2)现有的关于黄芪桂枝五物汤成分检测的方法灵敏度低，无法检测到含量低的成分，如关于黄芪桂枝五物汤中药指纹图谱研究，采用HPLC方法也只是筛选出了黄芪桂枝五物汤13个共有峰(魏国利,曹鹏,霍介格,等.黄芪桂枝五物汤HPLC指纹图谱研究[J].中华中医药学刊,2013(12):2796-2798.)。但中药复方的药效物质组成复杂，其影响不是单个成分的累积效应，而是包含各成分之间的相互作用，单一成分的含量不能全面地反映复方的质量；同时现有的关于黄芪桂枝五物汤成分检测的方法无法检测到含量低的成分，无法反应复方的整体情况。因此，需要采用多技术方法结合多指标成分测定进行全面的质量控制。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的上述缺陷，提供一种黄芪桂枝五物汤全成分的分析方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：本专利技术提供了一种黄芪桂枝五物汤全成分的分析方法，其采用HPLC-Q-TOF-MS/MS法(超快速高效液相色谱三重四级杆飞行时间串联质谱联用方法)，对黄芪桂枝五物汤样品进行检测；其中，所述高效液相色谱的条件为：色谱柱为C18柱，柱长100-250mm，柱内径3.0-4.6mm，粒径1.5-5.0μm；流动相流速0.2-1mL/min；进样量5-20μL；流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为含0.1％(v/v)甲酸的水溶液，流动相B为含0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液，采用如表1所示的梯度洗脱程序：表1流动相梯度洗脱程序所述三重四级杆飞行时间串联质谱的条件为：采用电喷雾正、负离子模式，全扫描质荷比范围50～1200，雾化气压力35-75psi，辅助气压力37-75psi，气帘气压力25-45psi，雾化温度350-600℃，喷雾压力绝对值4000-6000V，碰撞能量20-60V，去簇电压40-80V；所述黄芪桂枝五物汤样品由黄芪、桂枝、白芍、生姜和大枣制备而成。通过所述HPLC-Q-TOF-MS/MS法能实现同时对黄芪桂枝五物汤中黄芪甲苷、黄芪皂苷II、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、山奈酚、槲皮素、黄芪皂苷VII、异鼠李素、柒料木苷、桂皮醛、桂皮酸、香豆素、原儿茶酸、原儿茶醛、肉桂醇、2-甲氧基桂皮酸、芍药苷、苯甲酰芍药苷、丹皮酚、羟基芍药苷、没食子酸、芍药苷亚硫酸酯、没食子酰基芍药苷、6-姜辣素、姜油酮、β-倍半水芹烯、齐墩果酸、东莨菪内酯、芦丁等31种成分的定性分析。作为本专利技术分析方法的优选实施方式，所述色谱柱的柱长为150mm，柱内径为3.0mm，粒径为2.8μm；所述流动相流速为0.3mL/min；所述进样量为10μL。作为本专利技术分析方法的优选实施方式，所述色谱柱的柱温为40℃。作为本专利技术分析方法的优选实施方式，所述雾化气压力为55psi，辅助气压力为55psi，气帘气压力为35psi，雾化温度为550℃，碰撞能量为40V，去簇电压为60V。作为本专利技术分析方法的优选实施方式，采用电喷雾正离子模式时，喷雾电压为5500V；采用电喷雾负离子模式时，喷雾电压为-4500V。作为本专利技术分析方法的优选实施方式，所述分析方法还采用相同的超快速高效液相色谱三重四级杆飞行时间串联质谱联用方法对黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、桂皮醛、芍药苷和6-姜辣素的标准物进行检测分析以验证所述黄芪桂枝五物汤样品的分析结果的准确性和可靠性。作为本专利技术分析方法的优选实施方式，所述黄芪桂枝五物汤样品的进样生药浓度为0.4～0.6g/mL。作为本专利技术分析方法更优选的实施方式，所述黄芪桂枝五物汤样品的进样生药浓度为0.4g/mL。作为本专利技术分析方法的优选实施方式，所述黄芪、桂枝、白芍、生姜和大枣的质量比为黄芪：桂枝：白芍：生姜：大枣＝1:1:1:2:1。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果：本专利技术采用HPLC-Q-TOF-MS/MS法对黄芪桂枝五物汤进行全成分检测，可识别其中31种有效成分，不但能准确、全面、可靠的分析黄芪桂枝五物汤制剂的质量，而且高效快速；另外，将黄芪桂枝五物汤的分析结果与黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、桂皮醛、芍药苷和6-姜辣素5种药典成分标准物的分析结果进行对比能验证前者的准确性。附图说明图1为不同处理方法得到的不同生药浓度的黄芪桂枝五物汤样品在负离子模式下的总离子流图，其中图1A黄芪桂枝五物汤浓缩液样品的生药浓度为0.562g/mL，图1B黄芪桂枝五物汤冻干粉水溶液样品的生药浓度为0.4g/mL；图2为黄芪桂枝五物汤冻干粉水溶液样品的总离子流图，其中图2A为负离子模式，图2B为正离子模式。具体实施方式为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。1、仪器、试剂与材料1.1仪器新型密封式粉碎机(500g密封型摇摆式粉碎机)、二号筛(24目)、四号筛(65目)、挥发油提取装置(包括：KDM型调温电热套、5000mL圆底烧瓶、挥发油提取器、冷凝管)、旋蒸仪(IKA公司，型号RV10，包括真空泵、低温冷却液循环泵)、低温真空干燥机(LABCONCO公司)、超快速高效液相色谱仪(LC-20AD-XR二元泵，SIL-20AD-XR自动进样器，CTO-20A柱温箱，日本岛津公司)；四级杆-飞行时间质谱仪(TripleTOF5600+，美国ABSCIEX公司)、超纯水器(美国Millipore公司，型号Simplicity)。1.2试剂对照品：黄芪甲苷(纯度≥98.0wt.％)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷(纯度≥98.0wt.％)、桂皮醛(纯度≥98.0wt.％)、芍药苷(纯度≥98.0wt.％)、6-姜辣素(纯度≥98.0wt.％)均购自成都曼思特生物科技有限公司。甲醇(分析纯，广东光华化学厂有限公司)、乙腈(色谱纯，FisherScientific公司)、甲酸(Sigma公司，批号：0001408600)。1.3材料(本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种黄芪桂枝五物汤全成分的分析方法，其特征在于，所述分析方法采用超快速高效液相色谱三重四级杆飞行时间串联质谱联用方法对黄芪桂枝五物汤样品进行检测；/n其中，所述高效液相色谱的条件为：色谱柱为C18柱，柱长100-250mm，柱内径3.0-4.6mm，粒径1.5-5.0μm；流动相流速0.2-1mL/min；进样量5-20μL；流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为含0.1％(v/v)甲酸的水溶液，流动相B为含0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液，采用如下梯度洗脱程序：1)0～30min，流动相A的体积百分含量由95％降至5％；2)30～35min，流动相A的体积百分含量为5％；3)35～37min，流动相A的体积百分含量由5％升至95％；4)37～45min，流动相A的体积百分含量为95％；/n所述三重四级杆飞行时间串联质谱的条件为：采用电喷雾正、负离子模式，全扫描质荷比范围50～1200，雾化气压力35-75psi，辅助气压力37-75psi，气帘气压力25-45psi，雾化温度350-600℃，喷雾压力绝对值4000-6000V，碰撞能量20-60V，去簇电压40-80V；/n所述黄芪桂枝五物汤样品由黄芪、桂枝、白芍、生姜和大枣制备而成。/n...
【技术特征摘要】
1.一种黄芪桂枝五物汤全成分的分析方法，其特征在于，所述分析方法采用超快速高效液相色谱三重四级杆飞行时间串联质谱联用方法对黄芪桂枝五物汤样品进行检测；
其中，所述高效液相色谱的条件为：色谱柱为C18柱，柱长100-250mm，柱内径3.0-4.6mm，粒径1.5-5.0μm；流动相流速0.2-1mL/min；进样量5-20μL；流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为含0.1％(v/v)甲酸的水溶液，流动相B为含0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液，采用如下梯度洗脱程序：1)0～30min，流动相A的体积百分含量由95％降至5％；2)30～35min，流动相A的体积百分含量为5％；3)35～37min，流动相A的体积百分含量由5％升至95％；4)37～45min，流动相A的体积百分含量为95％；
所述三重四级杆飞行时间串联质谱的条件为：采用电喷雾正、负离子模式，全扫描质荷比范围50～1200，雾化气压力35-75psi，辅助气压力37-75psi，气帘气压力25-45psi，雾化温度350-600℃，喷雾压力绝对值4000-6000V，碰撞能量20-60V，去簇电压40-80V；
所述黄芪桂枝五物汤样品由黄芪、桂枝、白芍、生姜和大枣制备而成。
2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述色谱柱的柱长为150mm，柱内径为3.0mm，粒径为2.8μm；所述流动相流速为0.3mL/min；所述进样量为10μL。
3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为40℃。
4.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚琳，程红，陈永君，周颖虹，张敏宜，郭淇，姚雨彤，周娜，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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