一种用于测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法技术

本发明专利技术涉及一种用于测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法。所述高效液相色谱方法使用利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱并采用磷酸水溶液‑甲醇混合液为流动相，其中所述磷酸水溶液中磷酸的浓度质量分数为0.04％～0.06％，磷酸水溶液与甲醇的体积比为99:1 ～99:5。根据本发明专利技术的方法增强了对强极性杂质的保留，能够有效分离磷霉素钠复杂的杂质体系，具有较好的通用性和特定杂质的专属性，灵敏度高，操作方便，分析时间适中，为该化合物的质量控制提供了有效保障。

A high performance liquid chromatography method for the determination of impurities in fosfomycin sodium

【技术实现步骤摘要】
一种用于测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法
本专利技术属于本药物分析
，具体涉及一种用于测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法。
技术介绍
磷霉素是1967年由美国默克公司(Merck公司)和西班牙CEPA公司联合开发的一种新型广谱抗菌素，在结构上属于磷酸衍生物，具有独特的化学结构，分子量小。磷霉素的作用机制独特，能够抑制细胞壁合成的早期阶段，并且不对其他抗生素产生交叉耐药性，主要用于治疗革兰氏阴性和阳性细菌感染。目前，磷霉素主要有4个品种，分别是磷霉素钠盐、磷霉素钙盐、磷霉素氨丁三醇盐、磷霉素苄胺盐。磷霉素钠盐、钙盐于1975年在欧洲上市，首先在西班牙投入工业化生产，之后意大利和德国也陆续开始了工业化生产。1980年明治公司的产品在日本上市。磷霉素氨丁三醇于1988年在欧洲上市；1996年12月被美国FDA批准在美国上市。就使用情况而言，欧洲和日本及东南亚使用较多的是钠盐和钙盐，日本药典只收载了磷霉素钠盐、磷霉素钙盐两个品种。而在美国以磷霉素氨丁三醇为主，销量较大。其中，磷霉素钠的制备及存储过程中可能会生成多种杂质，而产品中杂质的种类和含量直接关系到药品质量和用药安全，因此在使用之前需要准确测定磷霉素钠相关杂质的含量。刘辉等人的“高效液相色谱法测定磷霉素关键中间体丙二烯磷酸和顺丙烯磷酸”(刘辉，裴世红等，《分析试验室》，2014，33(3):300)公开了一种测定磷霉素钠有关物质的方法。该方法采用AgilentZORBAX氨基柱为固定相、以磷酸盐溶液和乙腈为流动相、以氨基柱为色谱柱研究了2种中间体杂质丙二烯磷酸和顺丙烯磷酸的含量测定。从结果来看，该方法适于磷霉素合成反应中丙二烯磷酸和顺丙烯磷酸的含量测定。然而，上述方法存在不少缺点，例如采用的氨基柱较为脆弱，且由于磷霉素钠系列杂质极性大、出峰快而无法有效保留、分离极性较大的复杂杂质混合体系。因此，为了能够有效分析和检测药品质量，保证用药安全，仍需要开发出一种便捷、有效检测磷霉素钠及其复杂杂质的分析方法。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的一个目的在于提供一种高效分离和测定磷霉素钠((-)-(1R，2S)-1，2-环氧丙基膦酸二钠盐，结构式见式(1))杂质的高效液相色谱方法，从而实现对其杂质谱的准确监控和质量的严格控制。上述目的通过以下方案来实现：在一方面，本专利技术提供了一种测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法，所述方法使用利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱并采用磷酸水溶液-甲醇混合液为流动相，其中所述磷酸水溶液中磷酸的浓度质量分数为0.04％～0.06％，磷酸水溶液与甲醇的体积比为99:1～99:5。在一个优选方案中，磷酸水溶液中磷酸的浓度质量分数为0.05％。针对磷霉素钠杂质的分子量较小、极性大的特点，本专利技术采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(例如，WartersAtlantisT3色谱柱)进行检测，该色谱柱采用三官能团C18烷基键合相，保证了键合密度，提升了极性化合物的保留并且能够实现100％水相流动相兼容，从而提高了分离效果。进一步优选地，所述色谱柱的粒径为5μm，色谱柱长度为250mm，色谱柱内径为4.6mm。通过利用粒径为5μm的色谱柱，分离较快，柱效较高。同时，采用长度较长的色谱柱(例如250mm)，能够提高分离度，从而提高分离水平。进一步优选地，在所述方法中，所述色谱柱的工作柱温为8℃至12℃。在一个优选实施方案中，柱温为8℃、9℃、10℃、11℃或12℃。进一步地，在所述方法中，流动相流速0.5ml/min至0.7ml/min，检测波长为205nm，进样体积10μl。在一个优选实施方案中，所述流动相的流速为0.6ml/min。在上述方案中，本专利技术采用低温(10℃左右)进行异构体的细微区分，保证了结构相似的同分异构体(包括顺反异构体)杂质之间的分离，从而提高了分离效果。若温度高于12℃或低于8℃，则分离效果较差，例如出现杂质峰合并等。进一步优选地，在所述方法中，利用紫外检测器作为检测器。在所述方案中，紫外检测器具有灵敏度高、噪音低、非破坏性、线性范围宽、对流速和温度变化不敏感等优点。进一步优选地，在所述方法中，使用包含丙二烯磷酸钠、顺丙烯磷酸钠、2,3-烯丙基磷酸苯乙胺盐和反丙烯磷酸钠的混合溶液作为系统适应性溶液。在所述技术方案中，利用前述物质的混合溶液作为系统适应性溶液并观察各个杂质峰之间的分离效果，能够对色谱系统进行试验和调整，并全面检测电信号、分析操作及样品等方面的综合特性。进一步优选地，所述方法至少能检测出磷霉素钠中存在的以下四种杂质：丙二烯磷酸钠、顺丙烯磷酸钠、2,3-烯丙基磷酸苯乙胺盐和反丙烯磷酸钠。如前所述，由于本专利技术方法采用利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱并且在8-12℃的较低柱温工作，大幅提高了磷霉素钠杂质的分离和检测水平，从而使本专利技术方法能够有效保留、分离极性较大的复杂杂质混合体系。综上所述，通过上述技术方案，本专利技术能够实现如下良好的技术效果：(1)本专利技术采用使用利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(例如，WartersAtlantisT3色谱柱)进行检测，该色谱柱采用三官能团C18烷基键合相，保证了键合密度，提升了极性化合物的保留并且能够实现100％水相流动相兼容，从而提高了分离效果；(2)本专利技术采用低温(10℃左右)进行异构体的细微区分，保证了结构相似的同分异构体(包括顺反异构体)杂质之间的分离，从而提高了分离效果；(3)根据本专利技术的方法增强了对强极性杂质的保留，能够有效分离磷霉素钠复杂的杂质体系，具有较好的通用性和特定杂质的专属性，灵敏度高，操作方便，分析时间适中，为该化合物的质量控制提供了有效保障；(4)根据本专利技术的方法能够有效分离和测定磷霉素钠相关杂质(尤其是极性较大的复杂杂质混合体系)，因此可作为磷霉素钠质量控制的重要组成部分。附图说明以下将结合附图来具体描述本专利技术的一些优选实施方式。本领域的普通技术人员将会理解，这些附图仅用于举例说明的目的，而无意于以任何方式来限制本专利技术的范围。图1是根据本专利技术一个实施方案的系统适用性溶液的检测图谱；图2是顺丙烯磷酸线性关系图(峰面积-浓度)；图3是丙二烯磷酸线性关系图(峰面积-浓度)；图4是反丙烯磷酸线性关系图(峰面积-浓度)；图5是2,3-烯丙基磷酸线性关系图(峰面积-浓度)。具体实施方式以下将结合附图和实施例来描述本专利技术的一些具体实施方式。本领域的普通技术人员会理解，提供这些实施例的目的仅仅是为了举例说明如何能够实施本专利技术的方案，而非以任何方式限制本专利技术的范围。磷霉素是一种新型广谱抗菌素，用途广泛。然而，在制备其具体各种衍生物(例如磷霉素钠)的过程中，不可避免地引入各种杂质，而这些杂质不容易检测和去除，从而给其应用带来诸多障碍。为了解决该问题，本专利技术人对磷霉素(尤其是磷霉素钠)的合成工艺本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法，其特征在于，所述方法使用利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱并采用磷酸水溶液-甲醇混合液为流动相，其中所述磷酸水溶液中磷酸的浓度质量分数为0.04％～0.06％，磷酸水溶液与甲醇的体积比为99:1 ～99:5。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法，其特征在于，所述方法使用利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱并采用磷酸水溶液-甲醇混合液为流动相，其中所述磷酸水溶液中磷酸的浓度质量分数为0.04％～0.06％，磷酸水溶液与甲醇的体积比为99:1～99:5。


2.根据权利要求1所述的高效液相色谱方法，其特征在于，所述磷酸水溶液中磷酸的浓度质量分数为0.05％。


3.根据权利要求1所述的高效液相色谱方法，其特征在于，所述色谱柱的粒径为5μm，色谱柱长度为250mm，色谱柱内径为4.6mm。


4.根据权利要求1所述的高效液相色谱方法，其特征在于，所述色谱柱的工作柱温8℃至12℃。


5.根据权利要求1所述的高效液相色谱方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.5ml/min至0.7ml/...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑玉林，陈玉双，刘丽娟，
申请(专利权)人：上海峰林生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31