白术多糖通过调控ATF-6在保护Cr（VI）诱导的细胞凋亡中的应用制造技术

本发明专利技术涉及白术多糖的医药用途领域，具体涉及白术多糖通过调控ATF‑6在保护Cr(VI)诱导的细胞凋亡中的应用。本发明专利技术首次发现，转录因子ATF‑6对Cr(VI)诱导的鸡胚成纤维细胞(DF‑1细胞)凋亡具有调控作用；白术多糖对Cr(VI)诱导的ATF‑6表达上调具有拮抗作用。进一步的，白术多糖能够通过拮抗Cr(VI)诱导的ATF‑6表达上调从而对Cr(VI)引起的细胞过度凋亡具有保护作用。本发明专利技术拓展了白术多糖的医药用途，有利于以白术多糖为有效成分的具有新适应症药物的开发。

Application of Atractylodes macrocephala polysaccharide in protecting apoptosis induced by Cr (VI) by regulating atf-6

【技术实现步骤摘要】
白术多糖通过调控ATF-6在保护Cr(VI)诱导的细胞凋亡中的应用
本专利技术涉及白术多糖的医药用途领域，具体涉及白术多糖通过调控ATF-6在保护Cr(VI)诱导的细胞凋亡中的应用。
技术介绍
一些细胞应激条件，导致内质网(ER)腔内未折叠和/或错误折叠的蛋白质的积累和聚集，并引起所谓的ER应激，ER通过激活一系列应激反应信号通路来响应应激条件，导致内质网腔内未折叠或错误折叠的蛋白质的积累和聚集，发生未折叠蛋白反应(UPR)。六价铬Cr(VI)是环境中的重金属污染物，Cr(VI)化合物被广泛用于制革、纺织品生产、印染以及镀铬等行业。工业过程中含铬水，空气和土壤处理不当造成的环境污染已成为全球性问题。研究表明，Cr能够导致细胞发生凋亡甚至死亡，但关于Cr(VI)诱导DF-1细胞凋亡的结论还较少报道。活化转录因子6(activatingtranscriptionfactor6，ATF-6)是内质网上的一种感受蛋白，是启动细胞UPR的三种内质网跨膜蛋白之一，另外两种是IRE1/ERN1(inositolrequring1)、RERK/PEK(PEKlikeERkinase)。同时ATF-6也是内质网应激引起的细胞凋亡途径中的一个重要的调节因子，作为ER应激的近端传感器，ATF-6的管腔结构域被ER伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)占据。在正常状态下ATF-6位于内质网腔面与Grp78结合处于无活性的状态(p90ATF6)，当发生内质网应激时，ATF-6从Grp78/Bip解离下来并转运至高尔基体，在高尔基体内无活性的p90ATF6被S1P和S2P蛋白酶水解从而释放出具有转录活性的p50ATF6，随后，p50ATF6被转移至细胞核内，进一步激活多种内质网应激和凋亡相关蛋白的转录与表达。白术(AtractylodesmacrocephalaKoidz)是一种菊科苍术属多年生草本植物，性味苦温辛烈，有燥湿、化浊、止痛之效。白术多糖(RAMPS)是由白术中提取出来的一种多糖。研究表明白术多糖具有抗氧化及抗衰老、降血糖、抗肿瘤等功能。但尚未见有白术多糖多糖通过调控ATF-6在保护Cr(VI)诱导的细胞凋亡方面的报道。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供白术多糖通过调控ATF-6在保护Cr(VI)诱导的细胞凋亡中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供白术多糖在制备拮抗ATF-6表达上调的药物中的应用。上述应用中，所述ATF-6表达上调是由Cr(VI)诱导的。上述应用中，所述白术多糖由如下方法制备而成：将白术加水煎煮2-4次，每次煎煮时白术与水加入的重量比为1：(8-10)，合并煎煮液，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.05-1.15(50℃测)，得到水提液；向水提液中加入体积浓度为95％的乙醇，边加边搅拌，使乙醇的终浓度(体积浓度)为80％，静置，分离沉淀，得到白术粗多糖；对白术粗多糖进行纯化，制备得到白术多糖。更优选的，静置的时间为24h。优选的，所述白术多糖的数均分子量为1.29×105Da，重均分子量为1.09×105Da。优选的，所述白术多糖的浓度为100μg/ml。本专利技术的第二方面，提供白术多糖通过下调ATF-6表达在制备治疗由Cr(VI)引起的细胞过度凋亡的药物中的应用。本专利技术的第三方面，提供一种治疗由Cr(VI)引起的细胞过度凋亡的药物，所述药物以浓度为100μg/ml的白术多糖作为活性成分。本专利技术的有益效果：本专利技术首次发现，转录因子ATF-6对Cr(VI)诱导的鸡胚成纤维细胞(DF-1细胞)凋亡具有调控作用；白术多糖对Cr(VI)诱导的ATF-6表达上调具有拮抗作用。进一步的，白术多糖能够通过拮抗Cr(VI)诱导的ATF-6表达上调从而对Cr(VI)引起的细胞过度凋亡具有保护作用。本专利技术拓展了白术多糖的医药用途，有利于以白术多糖为有效成分的具有新适应症药物的开发。附图说明图1：Cr(VI)诱导对DF-1细胞的损伤作用。使用0(即图中的Con)、90、120、150、180μM的Cr(VI)分别处理细胞0、8、16、24小时。数据表示为平均值±S.D，进行三次独立实验。不同字母表示P<0.05。图2：Hoechst33342核染色结果。图中，A为倒置光学显微镜下的照片；B为使用Hoechst33342染色的荧光显微照片。图3：Westernblot检测结果。图中，A为白术多糖对DF-1细胞中内质网应激蛋白水平的影响；B为白术多糖对DF-1细胞中内质网凋亡蛋白水平的影响。图4：Cr的作用和RAMPS对线粒体膜电位的保护作用。(A)通过流式细胞术，对DF-1细胞进行JC-1染色，对照组、RAMPS+150μMCr共处理组、150μMCr处理组，15μMCCCP处理组。(B)JC-1单体阳性比率的定量表示，其为处理细胞与未处理对照的百分比。数据表示为平均值±S.D。(N＝3)。**，P<0.01。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。正如背景部分所介绍的，白术多糖作为白术的活性成分之一，具有抗氧化及抗衰老、降血糖、抗肿瘤等功能。但尚未见有白术多糖多糖通过调控ATF-6在保护Cr(VI)诱导的细胞凋亡方面的报道。多糖是由多个单糖分子链接而成的大分子化合物，多糖的分子量不同、多糖分子中单糖间的排列方式不同等，都会导致多糖的药理活性不同。目前对于白术多糖的空间结构和构效关系的研究较少，由于多糖的结构复杂，对白术多糖化学结构的确定以及体内作用机制尚不完全清楚。本专利技术首先采用水提醇沉法制备得到白术粗多糖，并对白术粗多糖进行纯化，得到白术多糖；然后对白术多糖分子进行表征分析，得到本专利技术制备的白术多糖分子结构。ATF-6是内质网上的一种转录因子，当内质网应激发生时，ATF6解离至高尔基体，无活性的p90ATF6经蛋白酶水解为有活性的p50ATF6，进入细胞核中激活多种内质网应激蛋白和凋亡蛋白，从而引起细胞凋亡的发生。本专利技术研究发现，采用Cr(VI)对DF-1细胞进行处理，ATF-6的表达显著增加；而ATF-6表达的增加会引起细胞凋亡的发生。而在加入本专利技术所制备的白术多糖后，由Cr(VI)引起的ATF-6表达增加受到显著的抑制，因此，本专利技术所制备的白术多糖可以作为拮抗由Cr(VI)诱导的ATF-6表达上调的药物。进一步的，白术多糖可以在一定程度上缓解Cr(VI)诱导的细胞核损伤并保护凋亡细胞；可以通过下调ATF-6表达来治疗由Cr(VI)引起的细胞过度凋亡。为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。本专利技术实施例中所用的未进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.白术多糖在制备拮抗ATF-6表达上调的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.白术多糖在制备拮抗ATF-6表达上调的药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ATF-6表达上调是由Cr(VI)诱导的。


3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述白术多糖由如下方法制备而成：
将白术加水煎煮2-4次，每次煎煮时白术与水加入的重量比为1：(8-10)，合并煎煮液，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.05-1.15(50℃测)，得到水提液；
向水提液中加入体积浓度为95％的乙醇，边加边搅拌，使乙醇的终浓度为80％，静置，分离沉淀，得到白术粗多糖；
对白术粗多糖进行纯化，制备得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建柱，张硕，刘永夏，邓干臻，张红超，李克鑫，李克钦，韩明远，李国保，王振峰，
申请(专利权)人：山东鑫谷健康产业有限公司，山东德信生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37