一种马来酸匹杉琼有关物质的检测方法技术

本发明专利技术提供一种马来酸匹杉琼有关物质的高效液相色谱分析检测方法，包括如下步骤：a.取马来酸匹杉琼供试品，用混合溶剂或者流动相配制供试品溶液；b.取供试品溶液，加混合溶剂或流动相稀释，作为自身对照溶液；c.取自身对照溶液及供试品溶液，用流动相冲洗，检测并记录色谱图；d.根据步骤c获得的自身对照溶液及供试品溶液色谱图，计算出杂质含量；e.再取自身对照溶液及供试品溶液，用流动相冲洗，检测并记录色谱图；f.根据步骤e获得的色谱图计算出杂质含量。本发明专利技术采用两种不同的流动相体系对马来酸匹杉琼供试品溶液进行洗脱，使匹杉琼主峰与杂质峰、杂质峰与杂质峰之间的分离度达到2.0以上，从而准确地检测出马来酸匹杉琼样品中有关物质的含量，为马来酸匹杉琼原料药与其制剂的质量控制提供了一套操作简单、方便快捷的有关物质检测方法。

A method for the determination of related substances in picaceron maleate

【技术实现步骤摘要】
一种马来酸匹杉琼有关物质的检测方法
本专利技术属于医药
，涉及一种化学药品高效液相的分析检测方法，具体地，涉及一种马来酸匹杉琼及其制剂有关物质的高效液相分析方法。
技术介绍
有关物质与药品质量、安全性及疗效密切相关，有关物质的存在可能会降低药物的稳定性和疗效等，甚至可能引起毒副作用，因此，必须通过适当的检测分析方法来控制药物中有关物质的种类和含量，确保药品的质量符合法律、法规的相关要求。马来酸匹杉琼(Pixantronemaleate)，化学名称为6,9-二[(2-氨乙基)氨基]苯并[G]异喹啉-5,10-二酮双马来酸盐，化学结构式如下所示：匹杉琼是一种新型的细胞毒氮杂蒽二酮类药物，可直接使DNA发生烷基化，形成稳定的DNA加合物，导致DNA的交联或使其双链断裂，同时匹杉琼为拓扑异构酶II的抑制剂，可使基因组DNA崩解，从而最终阻断B淋巴细胞的增殖导致细胞死亡。因此，被欧盟批准作为迄今为止世界范围内首个用于多复发性和难治性侵袭性非霍奇金B细胞淋巴瘤治疗的单一疗法药物。专利CN105699548公开了一种马来酸匹杉琼的高效液相色谱分析检测方法，用于检测马来酸匹杉琼的纯度。该方法涉及的杂质有5个，即6-氟-9-氨基乙胺苯并[g]异喹啉-5,10-二酮、9-氟-6-氨基乙胺苯并[g]异喹啉-5,10-二酮、6-氨基乙胺-8,9-哌嗪苯并[g]异喹啉-5,10-二酮、9-氨基乙胺-6,7-哌嗪苯并[g]异喹啉-5,10-二酮和6,9-二氟苯并[g]异喹啉-5,10-二酮。采用该方法对匹杉琼有关物质进行定量分析，各杂质间的分离度无法满足现行中国药典的要求。为了用药安全，需要对马来酸匹杉琼原料药及其制剂进行更充分地杂质研究，并建立一种灵敏度高、各杂质峰分离度良好的马来酸匹杉琼原料及其制剂的有关物质高效液相分析检测方法。
技术实现思路
本专利技术涉及一种灵敏度高、专属性好、耐用性优、各杂质峰分离度大于2.0的马来酸匹杉琼原料及其制剂的有关物质高效液相分析检测方法。该方法的理论塔板数、分离度、拖尾因子等均能满足现行中国药典及药品注册法律法规对药物高效液相分析检测方法的要求。本专利技术根据专利CN104557704提供的路线(如图1所示)来合成得到所要检测的马来酸匹杉琼。经杂质研究，按图1路线制备得到的马来酸匹杉琼中可能含有的已知杂质包括杂质A(6-[(2-氨乙基)氨基]-9-氟-苯并[G]异喹啉-5,10-二酮及9-[(2-氨乙基)氨基]-6-氟-苯并[G]异喹啉-5,10-二酮混合物)、杂质B(6,7-二[(2-氨乙基)氨基]-苯并[G]异喹啉-5,10-二酮、7,8-二[(2-氨乙基)氨基]-苯并[G]异喹啉-5,10-二酮及8,9-二[(2-氨乙基)氨基]-苯并[G]异喹啉-5,10-二酮混合物)、杂质C((Z)-4-((2-((9-((2-氨基乙基)氨基)-5,10-二氧-5,10-二氢-苯并[G]异喹啉-6-基)氨基)乙基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸及(Z)-4-((2-((6-((2-氨基乙基)氨基)-5,10-二氧-5,10-二氢-苯并[G]异喹啉-9-基)氨基)乙基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸混合物)、杂质D(6-氨基-9-[(2-氨乙基)氨基]-苯并[G]异喹啉-5,10-二酮和9-氨基-6-[(2-氨乙基)氨基]-苯并[G]异喹啉-5,10-二酮混合物)和杂质E(6-[(2-氨基乙基)氨基]-1,2,3,4-四氢-异喹啉并[6,7-f]喹喔啉-7,12-二酮及6-[(2-氨基乙基)氨基]-1,2,3,4-四氢-异喹啉并[6,7-h]喹喔啉-7,12-二酮混合物)。结构式如下表所示：由上表可知，杂质A、C、D和E均为两种异构体的混合物，而杂质B为三种异构体的混合物。这些杂质的极性与马来酸匹杉琼的极性非常接近，采用一种高效液相方法同时检测每一种杂质变得异常困难。经文献检索，尚无文献报道上述杂质含量的高效液相检测方法。针对现有技术中存在的不足，本专利技术所要解决的技术问题是如何采用高效液相方法准确、快捷地检测出马来酸匹杉琼中各杂质的含量。本专利技术为解决上述技术问题，创造性地采用两种不同的流动相体系对马来酸匹杉琼供试品溶液进行洗脱，使匹杉琼主峰与杂质峰、杂质峰与杂质峰之间有效分离，从而准确地检测出马来酸匹杉琼样品中各有关物质的含量。该方法彻底解决了匹杉琼主峰与杂质峰以及各杂质峰之间分离困难的问题，为马来酸匹杉琼有关物质的高效液相检测提供了一个切实可行的技术方案。该方法操作简单、灵敏度高、专属性及准确性好。本专利技术提供了一种用于检测马来酸匹杉琼供试品有关物质的流动相；所述流动相选自流动相(1)或流动相(2)；所述流动相(1)由盐水溶液、甲醇和乙腈按(30～95)：(2.5～35)：(2.5～35)的体积比混合而成；所述流动相(2)由盐水溶液和乙腈按(30～95)：(5～70)的体积比混合而成；所述盐水溶液为含有磷酸二氢钠和庚烷磺酸钠的水溶液，用磷酸调节pH至2～4；所述盐水溶液中磷酸二氢钠的摩尔浓度为5～60mmol/L；优选地，磷酸二氢钠的摩尔浓度为10～40mmol/L；更优选地，磷酸二氢钠的摩尔浓度为15～30mmol/L；所述盐水溶液中庚烷磺酸钠与水的质量百分比为0.01～2％；优选地，庚烷磺酸钠与水的质量百分比为0.05～1.5％；更优选地，庚烷磺酸钠与水的质量百分比为0.1～1％。本专利技术还提供了一种马来酸匹杉琼有关物质的高效液相色谱分析检测方法，包括如下步骤：a.称取马来酸匹杉琼适量，加入混合溶剂或者流动相配制成马来酸匹杉琼的溶液，作为供试品溶液；所配制的溶液含马来酸匹杉琼0.5～2mg/mL；优选地，所配制的溶液含马来酸匹杉琼0.5～1.5mg/mL；更优选地，所配制的溶液含马来酸匹杉琼0.8～1.2mg/mL；所述混合溶剂为乙腈与氯化钠水溶液按一定的体积比混合而成；所述氯化钠水溶液中氯化钠与水的质量百分比为0.01～2％；优选地，氯化钠与水的质量百分为0.5～1.5％；更优选地，氯化钠与水的质量百分比为0.8～1.2％；所述乙腈与氯化钠水溶液的体积比为(15～65)：(35～85)；优选地，乙腈与氯化钠水溶液的体积比为(15～45)：(55～85)；更优选地，乙腈与氯化钠水溶液的体积比为(20～30)：(70～80)；所述流动相选自流动相(1)或流动相(2)；所述流动相(1)由盐水溶液、甲醇和乙腈按(30～95)：(2.5～35)：(2.5～35)的体积比混合而成；所述流动相(2)由盐水溶液和乙腈按(30～95)：(5～70)的体积比混合而成；所述盐水溶液为含有磷酸二氢钠和庚烷磺酸钠的水溶液，用磷酸调节pH至2～4；所述盐水溶液中磷酸二氢钠的摩尔浓度为5～60mmol/L；优选地，磷酸二氢钠的摩尔浓度为10～40m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种马来酸匹杉琼有关物质的高效液相色谱分析检测方法，包括如下步骤：/na. 取马来酸匹杉琼供试品，用混合溶剂或者流动相配制成含马来酸匹杉琼溶液，作为供试品溶液；所述混合溶剂由乙腈与氯化钠水溶液混合而成；所述流动相选自流动相（1）或流动相（2）；所述流动相（1）由盐水溶液、甲醇和乙腈混合而成；所述流动相（2）由盐水溶液和乙腈混合而成；/nb. 取供试品溶液，加混合溶剂或流动相稀释，作为自身对照溶液；/nc. 取自身对照溶液及供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，色谱柱为苯基柱，用流动相（1）进行冲洗，用紫外光进行检测，并记录色谱图；/nd. 根据步骤c获得的自身对照溶液及供试品溶液色谱图，采用自身对照法计算出未知杂质、已知杂质B、D、E的含量；/ne. 再取自身对照溶液及供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，色谱柱为苯基柱，用流动相（2）进行冲洗，用紫外光进行检测，并记录色谱图；/nf. 根据步骤e获得的自身对照溶液及供试品溶液色谱图，采用自身对照法计算出已知杂质A、C的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种马来酸匹杉琼有关物质的高效液相色谱分析检测方法，包括如下步骤：
a.取马来酸匹杉琼供试品，用混合溶剂或者流动相配制成含马来酸匹杉琼溶液，作为供试品溶液；所述混合溶剂由乙腈与氯化钠水溶液混合而成；所述流动相选自流动相（1）或流动相（2）；所述流动相（1）由盐水溶液、甲醇和乙腈混合而成；所述流动相（2）由盐水溶液和乙腈混合而成；
b.取供试品溶液，加混合溶剂或流动相稀释，作为自身对照溶液；
c.取自身对照溶液及供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，色谱柱为苯基柱，用流动相（1）进行冲洗，用紫外光进行检测，并记录色谱图；
d.根据步骤c获得的自身对照溶液及供试品溶液色谱图，采用自身对照法计算出未知杂质、已知杂质B、D、E的含量；
e.再取自身对照溶液及供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，色谱柱为苯基柱，用流动相（2）进行冲洗，用紫外光进行检测，并记录色谱图；
f.根据步骤e获得的自身对照溶液及供试品溶液色谱图，采用自身对照法计算出已知杂质A、C的含量。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中所述盐水溶液为用水溶解磷酸二氢钠和庚烷磺酸钠后，用磷酸调节pH至2~4所得到的溶液。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述盐水溶液中磷...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘素云，陈胜飞，
申请(专利权)人：北京凯莱天成医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11