一种用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA，还提供了应用，所述长链非编码RNA FOXD1‑AS1基因用于制备诊断检测胶质瘤表达的试剂产品。本发明专利技术提供了一种用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA，通过检测长链非编码RNA对应的cDNA的表达水平即可对早期胶质瘤进行判断，从而进行早期干预，提高患者的生存率。

A long-chain noncoding RNA for glioma diagnosis and its application

【技术实现步骤摘要】
一种用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA及其应用
本专利技术属于肿瘤分子生物学
，具体涉及一种用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA及其应用。
技术介绍
脑胶质瘤是人类中枢脑神经系统(颅内)中较为容易爆发的原发性恶性肿瘤之一。每年超过1100万人被诊断为神经胶质瘤，据世界卫生组织(WHO)不完全估计，到2020年，这个数字将上升到1600万，其在中枢神经系统恶性肿瘤中拥有较高的死亡率。其在颅脑疾病的死亡率中，位于脑卒中之后，居第二位。WHO按着脑胶质瘤的轻重水平，把神经胶质瘤一共分为四个级别(I-IV级)。一般来说，I和II级脑胶质瘤通常被认为是低级别脑胶质瘤(low-gradeglioma,LGG)，而III和IV级脑胶质瘤被认为是高级别脑胶质瘤(high-gradeglioma,HGG)。治疗胶质瘤有手术、放射治疗及化学药物治疗等多种治疗手段。其中，化学药物治疗是个辅助手段,但由于受种种条件限制，治疗胶质瘤的较为有效的化疗药物少之又少。最近人们发现，在人类基因组中除了有microRNA这一具有强大调控和表观遗传修饰功能的微小非编码RNA的存在，还存在着数以万计的另一种非编码RNA即长链非编码RNA(longnon-codingRNA，lncRNA)长链非编码是一类转录本长度超过200nt的RNA分子，它们不具有编码蛋白的功能。lncRNA起初被认为是RNA聚合酶II转录的副产物，是基因组转录的“噪音、垃圾”，不具有生物学功能。现研究证实，lncRNA在表观遗传调控、剂量补偿效应、细胞周期和细胞分化、增殖等众多生命活动中发挥重要作用。近年来我们对lncRNA的了解也越来越深入，发现其具有丰富多彩的生物学功能。而关于胶质瘤与lncRNA之间的关系,目前已被证实了的仅有：lncRNAHOTAIR、H19、MEG3、CRNDE、RMST、ASLNC22381、ADAMTS9-AS2、TSLC1-AS1等。当前，在患病组织中发现的异常表达的lncRNA可涉及全身各个系统，分布较为广泛，但是由于lncRNA数量庞大，目前针对lncRNA在胶质瘤领域中的研究仍处在起步阶段，因此探寻LncRNA胶质瘤的分子基础具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA及其应用，该长链非编码RNA通过检测长链非编码RNA对应的cDNA的表达水平即可对早期胶质瘤进行判断，从而进行早期干预，提高患者的生存率。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA，所述长链非编码RNA为长链非编码RNAFOXD1-AS1基因，所述长链非编码RNAFOXD1-AS1基因对应的cDNA的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了一种上述的长链非编码RNA的应用，所述长链非编码RNAFOXD1-AS1基因用于制备诊断检测胶质瘤表达的试剂产品。优选地，所述试剂产品包括实时荧光定量检测试剂。优选地，所述实时荧光定量检测试剂包括针对长链非编码RNAFOXD1-AS1基因的特异性引物。优选地，所述特异性引物为编码目的基因的长链非编码RNAFOXD1-AS1基因的引物对和检测时用作内参基因的管家基因U6的引物对；所述长链非编码RNAFOXD1-AS1基因的引物对的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述长链非编码RNAFOXD1-AS1基因的引物对的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述管家基因U6的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；所述管家基因U6的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。本专利技术与现有技术相比具有以下优点：本专利技术提供了一种用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA，通过检测长链非编码RNA对应的cDNA的表达水平即可对早期胶质瘤进行判断，从而进行早期干预，提高患者的生存率。下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细说明。附图说明图1是实时定量基因扩增荧光检测系统(QPCR)检测本专利技术长链非编码RNA对应的cDNA在胶质瘤患者中的表达情况。具体实施方式实施例1本实施例的用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA，所述长链非编码RNA为长链非编码RNAFOXD1-AS1基因，所述长链非编码RNAFOXD1-AS1基因对应的cDNA的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本实施例还提供了上述的长链非编码RNA的应用，所述长链非编码RNAFOXD1-AS1基因用于制备诊断检测胶质瘤表达的试剂产品；所述试剂产品包括实时荧光定量检测试剂；所述实时荧光定量检测试剂包括针对长链非编码RNAFOXD1-AS1基因的特异性引物；所述特异性引物为编码目的基因的长链非编码RNAFOXD1-AS1基因的引物对和检测时用作内参基因的管家基因U6的引物对；所述长链非编码RNAFOXD1-AS1基因的引物对的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述长链非编码RNAFOXD1-AS1基因的引物对的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述管家基因U6的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；所述管家基因U6的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。利用QPCR检测长链非编码RNA在胶质瘤患者中的表达情况，该方法为：S1、样品收集：各收集75例脑外伤的正常人(对照组)和75例胶质瘤患者(试验组)的相应的脑部组织，患者均知情同意，上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意。S2、采用trizol法提取RNA。S3、去除基因组gDNA：提取好的各RNA，分别按如下体系加样：RNA1～2μg、10×反应缓冲液2.0μL、gDNA清除酶Ⅰ1.0μL，不含RNA酶的H2O补足至10μL，然后在室温下静置5min，得到反应液。S4、逆转录：将S3中得到的反应液分别进行逆转录，分别按如下体系加样：S3中得到的反应液10μL、5×缓冲液4.0μL、逆转录酶Ⅰ1.0μL、逆转录通用引物1.0μL，不含RNA酶的H2O补足至20μL。然后在转速为1000rpm的条件下离心5s后，进行逆转录反应，逆转录的反应程序为：37℃15min，85℃5s，得到cDNA。S5、QPCR扩增(实时荧光定量核酸扩增检测系统)检验：(1)目的基因(长链非编码RNAFOXD1-AS1基因)的QPCR扩增：以S4中得到的cDNA为模板，对目的基因进行QPCR扩增，每个cDNA模板重复三次，分别按如下体系加样：S4中得到的cDNA2.0μL、实时荧光定量PCRTaq酶10.0μL、长链非编码RNAFOXD1-AS1基因的引物对的正向引物1.0μL、长链非编码RNAFOXD1-AS1基因的引物对的反向引物1.0μL，重蒸水补足至20μL；(2)内参基因(管家基因U6)的QPCR扩增：以S4中得到的cDNA为模板，对内参本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA，其特征在于，所述长链非编码RNA为长链非编码RNA FOXD1-AS1基因，所述长链非编码RNA FOXD1-AS1基因对应的cDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于胶质瘤诊断的长链非编码RNA，其特征在于，所述长链非编码RNA为长链非编码RNAFOXD1-AS1基因，所述长链非编码RNAFOXD1-AS1基因对应的cDNA的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种如权利要求1所述的长链非编码RNA的应用，其特征在于，所述长链非编码RNAFOXD1-AS1基因用于制备诊断检测胶质瘤表达的试剂产品。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂产品包括实时荧光定量检测试剂。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述实时荧光定量检测试剂包括针对...

【专利技术属性】
技术研发人员：高元峰，廖建萍，戴冰，欧阳林旗，郭宇鸽，肖望重，王瑞颖，何怡然，曹艺，黎旭，
申请(专利权)人：湖南中医药大学第一附属医院中医临床研究所，
类型：发明
国别省市：湖南;43