一种利用柱层析从牡丹籽油中分离高纯度α-亚麻酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用柱层析从牡丹籽油中分离高纯度α‑亚麻酸的方法，包括如下步骤：(1)将牡丹籽油初提得到纯度在60±2％的初提α‑亚麻酸；(2)固定相负载银离子的氧化铝的制备；(3)装柱；(4)洗脱；(5)分别收集洗脱液，每个梯度分别收集一份，依次命名为F0，F1，F2，F3，F4，F5，将F5减压蒸馏，用石油醚溶解，加入饱和NaCl水溶液去除Ag

A method for separation of high purity \u03b1 - linolenic acid from peony seed oil by column chromatography

【技术实现步骤摘要】
一种利用柱层析从牡丹籽油中分离高纯度α-亚麻酸的方法
本专利技术涉及亚麻酸的制备方法，特别的涉及一种利用柱层析从牡丹籽油中分离高纯度α-亚麻酸的方法。
技术介绍
牡丹，芍药科、芍药属植物，油用牡丹是一种重要的油料资源，由牡丹籽提取出的植物油—牡丹籽油是我国特有的木本坚果油，它营养丰富而独特，且具有良好的医疗保健功效，因而被有关专家称为“世界上最好的油”。牡丹籽油是植物油中的珍品，其于2011年3月22日正式获批成为我国新资源食品。已有研究表明，牡丹籽油具有体内外抗氧化作用，降血脂、降血糖和防晒等生理活性，其开发和应用引起了广泛关注。经检测分析，牡丹籽油中不饱和脂肪酸含量高达91.73％，其中油酸含量为22.83％左右，亚油酸含量为26.69％左右，α-亚麻酸含量占油脂总含量的40％左右，是橄榄油的数倍。随着医学、生物、食品等领域快速发展，亚麻酸受到了愈来愈广泛的关注。α-亚麻酸与动物的生长、发育紧密相关，是生物活性物质前列腺素和白三烯的前体,是生物膜尤其是视网膜、大脑的重要脂质成分。动物试验和临床观察结果表明:α-亚麻酸具有很强的增长智力，保护视力，降低血脂，胆固醇，抗血栓，延缓衰老，抗过敏，抑制癌症的发生和转移等功效。然而α-亚麻酸是人和哺乳动物体内不能合成的不饱和脂肪酸，因此从植物油脂中提取分离α-亚麻酸具有潜在的应用价值。目前分离不饱和脂肪酸的方法主要有：尿素包合法、超临界流体萃取法、分子蒸馏法、银离子配位法、吸附分离法等，其中低温结晶法、尿素包合法等传统分离方法，具有投资少、工艺简单等优点，但存在产品纯度低等问题，达不到高纯度α亚麻酸的应用要求，极大限制其在保健品及医药品中的应用及附加值的提升。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种利用柱层析从牡丹籽油中分离高纯度α-亚麻酸的方法。本专利技术的技术方案概述如下：一种利用柱层析从牡丹籽油中分离高纯度α-亚麻酸的方法，包括如下步骤：(1)将牡丹籽油初提得到纯度在60±2％的初提α-亚麻酸；(2)固定相负载银离子的氧化铝的制备；(3)按比例，将30-50克固定相加入90-150mL乙醚和石油醚的混合溶液中，所述乙醚和石油醚的体积比为1-3：1，搅拌排除气泡，静置1-2h，置于避光(黑纸包裹)的层析柱内，静置1-2h，得到负载银离子的氧化铝层析柱；(4)称取步骤(1)获得的初提α-亚麻酸，滴入到负载银离子的氧化铝层析柱上，使用梯度流动相进行洗脱，流速为1-2.5mL/min；所述梯度流动相为混合液二与混合液一的体积比依次为0％、1％、2％、3％、4％、5％的溶液；所述混合液一由体积比为1-3：1的乙醚与石油醚组成；所述混合液二为体积比为2～4：8～6的乙酸乙酯与丙酮组成；(5)分别收集洗脱液，每个梯度分别收集一份，依次命名为F0，F1，F2，F3，F4，F5，将F5在真空度为-0.05MPa～-0.1MPa，温度为45℃～55℃条件下减压蒸馏10min～30min除去流动相有机溶剂，用石油醚溶解，加入饱和NaCl水溶液去除Ag+，在有机相中加入无水硫酸钠，抽滤后减压蒸馏石油醚，即得高纯度α-亚麻酸。步骤(4)初提α-亚麻酸与层析柱内的负载银离子的氧化铝的质量比为1：12。层析柱内的负载银离子的氧化铝质量与每个梯度流动相体积的比例(3-5)g：(20-32)mL。本专利技术的优点：本专利技术根据柱层析法的分离原理即物质在固定相上吸附力不同而使物质得到分离，同时利用银化氧化铝柱层析中银离子能与不饱和脂肪酸的碳-碳双键形成络合物来分离提取α-亚麻酸，本方法提取到的α-亚麻酸纯度较高，为98％以上。满足分析、医药、保健品等行业的需要。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例1将牡丹籽油初提得到纯度在60±2％的初提α-亚麻酸：将牡丹籽油样品与质量浓度为3％的NaOH溶液混合，NaOH溶液的溶剂为体积浓度为90％乙醇水溶液，皂化。减压蒸馏除去乙醇，再加入10％的H2SO4水溶液，搅拌均匀，分离油相，水洗3次至中性，用无水硫酸钠干燥后得到混合脂肪酸。将混合脂肪酸加入丙酮溶解，用冷冻结晶法-10℃下结晶离心除去饱和度较低脂肪酸后制得纯度在60％左右(60±2％)的α-亚麻酸。实施例2固定相负载银离子的氧化铝的制备；避光条件下，将5gAgNO3溶于25mL体积浓度70％的乙醇水溶液，加入100g中性氧化铝(商品)，搅拌10min，减压蒸馏除去乙醇，将固体避光、在120±2℃放置10小时，冷却至室温，得到负载银离子的氧化铝，为固体相；储存在棕色干燥器备用。实施例3一种利用柱层析从牡丹籽油中分离高纯度α-亚麻酸的方法，步骤如下：(1)将牡丹籽油初提得到纯度在62％的初提α-亚麻酸(实施例1方法制备)；(2)固定相负载银离子的氧化铝的制备(实施例2)；(3)装柱：将30g固定相加入到90mL体积比为1：1乙醚和石油醚混合液中，搅拌排除气泡，静置1h使其充分溶胀，将其置于黑纸包裹的避光的层析柱内，静置1h溶胀沉淀，得到负载银离子的氧化铝层析柱；(4)洗脱：将层析柱中溶剂从柱底排出，直到距固定相面0.5cm，称取2.5g步骤(1)获得的初提α-亚麻酸，滴入到负载银离子的氧化铝层析柱上，使用梯度流动相进行洗脱，流速为1mL/min；所述梯度流动相为混合液二与混合液一的体积比依次为0％、1％、2％、3％、4％、5％的溶液；所述混合液一由体积比为1：1的乙醚与石油醚组成；所述混合液二为体积比为2：8的乙酸乙酯与丙酮组成；每一梯度梯度流动相为200mL；(5)分别收集洗脱液，每个梯度分别收集一份，依次命名为F0，F1，F2，F3，F4，F5，将F5在真空度为-0.05MPa，温度为45℃条件下减压蒸馏30min除去流动相有机溶剂，用石油醚溶解，加入饱和NaCl水溶液去除Ag+，在有机相中加入无水硫酸钠，抽滤后减压蒸馏石油醚，即得高纯度α-亚麻酸。(6)α-亚麻酸含量测定：利用气相色谱-质谱(gaschromatographymassspectrometry，GC-MS)对产物α-亚麻酸含量进行测定，所得α-亚麻酸纯度为98％。α-亚麻酸含量测定具体步骤如下：脂肪酸的甲酯化：1)试管中加入1.0mL硫酸甲醇溶液(5％硫酸+95％甲醇)，充满氮气后密封。90℃水浴1h。2)置于室温下冷却后，在试管中加入1.5mL正戊烷和1.0mL水，振荡混匀，终止甲基化反应。3)振荡后2500rpm，离心10min，收集上清液1.0mL，氮气浓缩后加入5.0mL重蒸的正己烷。4)取980μL提取液样品，加入20μL内标(十七烷酸)迅速混匀，用0.22um有机相微孔滤器过滤到样品瓶中，用于GC-MS分析。标准品的制备：标准品包括混合脂肪酸中5个主要成分棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和α-亚麻酸(均本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用柱层析从牡丹籽油中分离高纯度α-亚麻酸的方法，其特征在于包括如下步骤：/n(1)将牡丹籽油初提得到纯度在60±2％的初提α-亚麻酸；/n(2)固定相负载银离子的氧化铝的制备；/n(3)按比例，将30-50克固定相加入90-150mL乙醚和石油醚的混合溶液中，搅拌排除气泡，静置1-2h，置于避光的层析柱内，静置1-2h，得到负载银离子的氧化铝层析柱；/n(4)称取步骤(1)获得的初提α-亚麻酸，滴入到负载银离子的氧化铝层析柱上，使用梯度流动相进行洗脱，流速为1-2.5mL/min；所述梯度流动相为混合液二与混合液一的体积比依次为0％、1％、2％、3％、4％、5％的溶液；所述混合液一由体积比为1-3：1的乙醚与石油醚组成；所述混合液二为体积比为2～4：8～6的乙酸乙酯与丙酮组成；/n(5)分别收集洗脱液，每个梯度分别收集一份，依次命名为F0，F1，F2，F3，F4，F5，将F5减压蒸馏除去流动相有机溶剂，用石油醚溶解，加入饱和NaCl水溶液去除Ag

【技术特征摘要】
1.一种利用柱层析从牡丹籽油中分离高纯度α-亚麻酸的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将牡丹籽油初提得到纯度在60±2％的初提α-亚麻酸；
(2)固定相负载银离子的氧化铝的制备；
(3)按比例，将30-50克固定相加入90-150mL乙醚和石油醚的混合溶液中，搅拌排除气泡，静置1-2h，置于避光的层析柱内，静置1-2h，得到负载银离子的氧化铝层析柱；
(4)称取步骤(1)获得的初提α-亚麻酸，滴入到负载银离子的氧化铝层析柱上，使用梯度流动相进行洗脱，流速为1-2.5mL/min；所述梯度流动相为混合液二与混合液一的体积比依次为0％、1％、2％、3％、4％、5％的溶液；所述混合液一由体积比为1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘政安，王占忠，舒庆艳，
申请(专利权)人：中国科学院植物研究所，天津大学，
类型：发明
国别省市：北京;11