一种基于蛋白质巯基耦连金属的抗体标记方法技术

本申请涉及蛋白标记技术领域，具体涉及一种基于蛋白巯基耦连的抗体标记方法，所述方法包括如下步骤：(1)，在polymer管中，加入39‑195μl L‑缓冲液，以溶解聚合物polymer；然后加入1‑5μl 100mM金属盐离子溶液，混匀后孵育；(2)，将孵育结束后的溶液转移至3KDa超滤管，离心，去上清，得到中间体试剂；(3)，在抗体对应的超滤管中，将所述中间体试剂和巯基已被还原的抗体混合，以进行耦连反应，得到金属标记的抗体；其中，所述L‑缓冲液和所述polymer为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。

An antibody labeling method based on protein sulfhydryl coupled metal

【技术实现步骤摘要】
一种基于蛋白质巯基耦连金属的抗体标记方法
本申请涉及蛋白标记
，具体涉及一种基于蛋白质巯基耦连金属的抗体标记方法。
技术介绍
在监测生物过程、辅助检测(例如化合物的可靠定量、蛋白质修饰的特异性检测)或者纯化标记后的蛋白及其结合对象等都需要应用到蛋白质标记技术。高效的蛋白质标记技术能够提高检测灵敏度以及简化检测工作流程。目前有多种蛋白质标记技术，如同位素标记、荧光标记、量子点标记、生物素标记、酶联标记等来帮助我们研究感兴趣的蛋白质的丰度、位置、相互作用、翻译后修饰、功能，乃至监测活细胞中的蛋白质运输等问题。使用金属对蛋白质进行标记，能够避免样本的自发荧光背景的干扰、无生物危害、极高的灵敏度、高通零等优势，具备极大的应用情景。随着质谱仪及质谱流式细胞技术的发展越来越迅速，发展越来越迅速，国内外对应用于该技术的金属蛋白试剂需求也越来越大，以满足高维度细胞检测的需求。
技术实现思路
本申请提供一种基于蛋白质巯基耦连金属的抗体标记方法，可以将不同的蛋白质和不同的金属耦连，通过检测金属，可实现多个蛋白的同步检测，方法简便、成本较低、实用性强、效率和可靠性较高。本申请提供了一种基于蛋白巯基耦连的抗体标记方法，所述方法包括如下步骤：(1)，在polymer管中，加入39-195μlL-缓冲液，以溶解聚合物polymer；然后加入1-5μl100mM金属盐离子溶液，混匀后孵育；(2)，将孵育结束后的溶液转移至3KDa超滤管，离心，去上清，得到中间体试剂；(3)，在抗体对应的超滤管中，将所述中间体试剂和巯基已被还原的抗体混合，以进行耦连反应，得到金属标记的抗体；其中，所述L-缓冲液和所述polymer为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。在一些实施例中，所述巯基已被还原的抗体通过以下步骤制备得到：(a)，在抗体对应的超滤管中，使用R-缓冲液混合抗体；(b)，在步骤(a)抗体对应的超滤管中加入用R-缓冲液混合后巯基还原剂，以还原抗体的巯基；其中，所述R-缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。在一些实施例中，所述巯基还原剂为TCEP。在一些实施例中，所述抗体为免疫球蛋白、配体、短肽中的任一种。在一些实施例中，所述免疫球蛋白为lgG免疫球蛋白。在一些实施例中，所述金属为以下任一种：镧La、钇Y、镨Pr、钕Nd、钐Sm、铕Eu、钆Gd、铽Tb、镝Dy、钬Ho、铒Er、铥Tm、镱Yb、镥Lu、铟In、金Au、铂Pt、铋Bi。在一些实施例中，在步骤(1)之前，所述方法还包括：在室温下，使所述polymer复温15min。在一些实施例中，在步骤(3)中，所述巯基已被还原的抗体为将100μg抗体的巯基还原后得到。在一些实施例中，在步骤(3)中，将所述中间体试剂和巯基已被还原的抗体混合后，在37℃孵育1-2小时，以进行耦连反应。在一些实施例中，在步骤(3)之后，所述方法还包括：(4)，使用w-缓冲液洗脱被金属标记后的抗体，所述w-缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。本申请提供的抗体标记方法可以对细胞或者药物进行标记，从而加大筛选工作的通量，扩展了适用于质谱流式细胞技术的金属耦连蛋白质的金属通道。具体实施方式下列实施例仅用于说明本申请，而不应视为限制本申请的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。在进一步描述本申请具体实施方式之前，应理解，本申请的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本申请实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本申请的保护范围；在本申请说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本申请另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本申请中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本申请的记载，还可以使用与本申请实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本申请。除非另外说明，本申请中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULARCLONING：ALABORATORYMANUAL，Secondedition，ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989andThirdedition，2001；Ausubel等，CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY，JohnWiley&Sons，NewYork，1987andperiodicupdates；theseriesMETHODSINENZYMOLOGY，AcademicPress，SanDiego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTUREANDFUNCTION，Thirdedition，AcademicPress，SanDiego，1998；METHODSINENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.WassarmanandA.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，SanDiego，1999；和METHODSINMOLECULARBIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)HumanaPress，Totowa，1999等。本申请实施例提供的基于蛋白质巯基耦连金属的抗体标记方法可以对anti-CD3(UCHT1),anti-CD4(RPA-T4),anti-CD8a(RPA-T8),anti-CD16(3G8),anti-CD19(HIB19),anti-CD45(HI30),anti-CD56(NCAM16.2)等七种抗体进行标记。然后可使用质谱流式平台对样本中的淋巴细胞亚群进行分析，检测结果与流式细胞技术平台检测进行比较后无显著差异。接下来，在具体实施例中，对本申请实施例提供的抗体标记方法进行举例介绍。其中，实验对象包括：淋巴细胞亚群抗体的标记；实验试剂包括：MaxparmultimetallabelingKit-40Rnx；实验设备包括：质谱流式细胞仪Helios，流式细胞仪BDCantoII。实施例1本实施例提供了带巯基蛋白质的标记方法包括如下步骤。步骤一、一管X8polymer中加入39～195ulLbuffer，吹打均匀使X8polymer充分溶解，后加入1～5μl100mM金属盐离子溶液，混匀后孵育；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于蛋白巯基耦连的抗体标记方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n(1)，在polymer管中，加入39-195μl L-缓冲液，以溶解聚合物polymer；然后加入1-5μl100mM金属盐离子溶液，混匀后孵育；/n(2)，将孵育结束后的溶液转移至3KDa超滤管，离心，去上清，得到中间体试剂；/n(3)，在抗体对应的超滤管中，将所述中间体试剂和巯基已被还原的抗体混合，以进行耦连反应，得到金属标记的抗体；其中，/n所述L-缓冲液和所述polymer为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于蛋白巯基耦连的抗体标记方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)，在polymer管中，加入39-195μlL-缓冲液，以溶解聚合物polymer；然后加入1-5μl100mM金属盐离子溶液，混匀后孵育；
(2)，将孵育结束后的溶液转移至3KDa超滤管，离心，去上清，得到中间体试剂；
(3)，在抗体对应的超滤管中，将所述中间体试剂和巯基已被还原的抗体混合，以进行耦连反应，得到金属标记的抗体；其中，
所述L-缓冲液和所述polymer为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述巯基已被还原的抗体通过以下步骤制备得到：
(a)，在抗体对应的超滤管中，使用R-缓冲液混合抗体；
(b)，在步骤(a)抗体对应的超滤管中加入用R-缓冲液混合后的巯基还原剂，以还原抗体的巯基；其中，
所述R-缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述巯基还原剂为TCEP。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体为免疫球...

【专利技术属性】
技术研发人员：林铖，童年，王甜，
申请(专利权)人：浙江普罗亭健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33