用于递送Na/K ATP酶/Src受体复合物拮抗剂的表达载体和相关方法技术

本发明专利技术提供了包含编码Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂的核酸序列的表达载体。所述编码多肽拮抗剂的核酸被可操作连接到用于在特定细胞或组织中表达所述多肽拮抗剂的启动子。本发明专利技术还提供了病毒粒子、靶细胞和药物组合物，并且它们包含所述表达载体。本发明专利技术还提供了治疗Src相关疾病的方法，所述方法包括向需要的对象给药所述编码Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂的表达载体。

Expression vector and related methods for delivery of Na / K ATPase / SRC receptor complex antagonists

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于递送Na/KATP酶/Src受体复合物拮抗剂的表达载体和相关方法相关申请本申请要求2017年5月26日提交的美国临时申请系列号62/511,541的优先权，所述美国临时申请的全部公开内容通过引用并入本文。
本公开的主题内容涉及用于递送Na/KATP酶/Src受体复合物拮抗剂的表达载体和方法。具体来说，本专利技术的某些实施方式涉及用于将Na/KATP酶/Src受体复合物拮抗剂递送到特定细胞和组织的表达载体和相关方法，以及使用这些载体治疗Src相关疾病的方法。
技术介绍
Na/K-ATP酶在大多数真核细胞中遍在表达，并通过将Na+泵出细胞并将K+泵入细胞来帮助维持跨膜离子梯度。Na/K-ATP酶通过至少两个结合基序与Src直接相互作用：一个在α1亚基的CD2与SrcSH2之间，另一个涉及第三胞质结构域(CD3)和Src激酶结构域。这种Na/K-ATP酶与Src的复合物的形成充当乌本苷的受体，以唤起蛋白激酶级联。具体来说，乌本苷与Na/K-ATP酶的结合破坏后者的相互作用，然后引起不同途径包括ERK级联、PLC/PKC途径和ROS生产的组装和激活。此外，这种相互作用将Src保持在无活性状态。因此，Na/K-ATP酶起到内源Src负调控物的作用。还参见国际专利申请号WO2008/054792和WO2010/071767，两者都通过引用并入本文。这些信号传导途径的激活最终导致心和肾功能的改变，刺激细胞增殖和组织纤维化，保护组织免于缺血/再灌注损伤，抑制癌细胞生长等。Src和ROS也与VEGF表达的诱导有关。尽管开发的许多已知Src和Src家族激酶的抑制剂是与ATP竞争与这些激酶的结合的ATP类似物，但这类Src抑制剂缺少途径特异性。因此，用于靶向细胞和组织以用于与Na/K-ATP酶-Src相互作用相关的广泛种类病症的改进治疗的组合物和方法，将是非常需要和有益的。
技术实现思路
正如对本领域普通技术人员来说在研究了本文件中提供的信息后将变得显而易见的，本公开的主题内容满足了一些或所有上述需求。本概述描述了本公开主题内容的几种实施方式，并且在许多情况下列出了这些实施方式的变化和排列。本概述仅仅是众多且变化的实施方式的示例。提到的给定实施方式的一个或多个代表性特征同样是示例性的。这样的实施方式通常可以在具有或没有所述提到的特征的情况下存在；同样地，那些特征可以应用于本公开主题内容的其他实施方式，而不管是否在本概述中列出。为了避免过多重复，本概述没有列出或建议这些特征的所有可能组合。本公开的主题内容包括用于递送Na/KATP酶/Src受体复合物拮抗剂的表达载体和方法。具体来说，本专利技术的某些实施方式涉及用于将Na/KATP酶/Src受体复合物拮抗剂递送到特定细胞和组织的表达载体和相关方法，以及使用这些载体治疗Src相关疾病的方法。在某些实施方式中，提供了一种表达载体，其包含编码Na/KATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂的核酸序列。在某些实施方式中，所述编码多肽拮抗剂的核酸被可操作连接到用于在特定细胞或组织中表达所述多肽拮抗剂的启动子。在某些实施方式中，所述多肽拮抗剂包含SEQIDNO：1的序列或其片段和/或变体。在某些实施方式中，所述编码多肽拮抗剂的核酸包含SEQIDNO：5的序列或其片段和/或变体。在某些实施方式中，所述启动子选自脂联素启动子、白蛋白启动子、黑色素启动子、血管假性血友病因子启动子(vonWillebrandfactorpromoter)、α肌球蛋白重链启动子、SGLT2启动子、MyoD启动子、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子和突触蛋白1(SYN1)启动子。在某些实施方式中，所述启动子是肝特异性、内皮细胞特异性或脂肪细胞特异性的。在本公开主题内容的某些实施方式中，所述表达载体采取病毒载体的形式，例如在某些实施方式中采取慢病毒载体的形式。就此而言，在某些实施方式中，还提供了包含本文中描述的表达载体的病毒粒子以及包含本公开主题内容的表达载体的靶细胞。在某些实施方式中，所述靶细胞是哺乳动物细胞，例如小鼠细胞或人类细胞。在某些实施方式中，所述靶细胞是脂肪细胞、肝细胞或内皮细胞。在某些实施方式中，还提供了药物组合物。在某些实施方式中，提供了一种药物组合物，其包含本公开主题内容的表达载体和可药用媒剂、载剂或赋形剂。在某些实施方式中，还提供了治疗Src相关疾病的方法。在某些实施方式中，提供了一种治疗Src相关疾病的方法，所述方法包括向需要的对象给药本公开主题内容的表达载体。在某些实施方式中，所述Src相关疾病选自血管疾病、心血管疾病、心脏病、前列腺癌、乳腺癌、成神经细胞瘤、心脏肥大、组织纤维化、充血性心力衰竭、缺血/再灌注损伤、骨质疏松症、视网膜病和肥胖症。在某些实施方式中，所述Src相关疾病是心血管疾病，并且所述心血管疾病是尿毒症心肌病。在某些实施方式中，所述Src相关疾病是肥胖症。对于本领域普通技术人员来说，在研究了本文件中的描述、附图和非限制性实例后，本公开主题内容的其他特征和优点将变得显而易见。附图说明图1是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在脂联素启动子控制之下的Na/KATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(NaKtide；SEQIDNO：1)的慢病毒表达载体的示意图。图2是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在脂联素启动子控制之下的增强绿色荧光蛋白(eGFP)的另一种慢病毒表达载体的示意图。图3包括了用图1和2中示出的表达载体以逐渐增加的感染复数(MOI)转导的3T3-L1细胞的荧光显微术图像。图4包括的图像和图表显示了用图1和2中示出的表达载体以逐渐增加的感染复数(MOI)转导的3T3-L1细胞中的油红O染色。图5A-5D包括用图1和2中示出的表达载体给药的C57Bl6小鼠中脂肪组织(图5A)、肝组织(图5B)、心脏组织(图5C)和肾组织(图5D)的免疫荧光染色。图6是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在白蛋白启动子控制之下的Na/KATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(NaKtide；SEQIDNO：1)的慢病毒表达载体的示意图。图7是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在脂联素启动子控制之下的增强绿色荧光蛋白(eGFP)的另一种慢病毒表达载体的示意图。图8A-8B包括的图像显示了用图6和7中示出的表达载体给药的C57Bl6小鼠的肝组织(图8A)和脂肪组织(图8B)的免疫组织化学染色。图9包括的图像和图表示出了慢病毒转染的NaKtide(SEQIDNO：1和6)对喂食高脂肪饮食的小鼠的体重的影响，其中通过慢病毒给药的NaKtide引起喂食高脂肪饮食的C57Bl6小鼠与它们的对照鼠粮对应者相比体重增加量的显著减少，其中在喂食西式饮食12周的小鼠中在第0周和第2周进行注射，并且其中在各组之间没有食物摄取量的显著变化(结果是平均值±SE，每组n＝12至14只；*相比于对照P<0.05，#相比于对照+GFP+NaKtideP<0.05本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达载体，其包含编码Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂的核酸序列，所述编码多肽拮抗剂的核酸可操作连接到用于在特定细胞或组织中表达所述多肽拮抗剂的启动子。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170526 US 62/511,5411.一种表达载体，其包含编码Na/KATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂的核酸序列，所述编码多肽拮抗剂的核酸可操作连接到用于在特定细胞或组织中表达所述多肽拮抗剂的启动子。


2.权利要求1的表达载体，其中所述多肽拮抗剂包含SEQIDNO：1的序列或其片段和/或变体。


3.权利要求1的表达载体，其中所述编码多肽拮抗剂的核酸包含SEQIDNO：5的序列或其片段和/或变体。


4.权利要求1的表达载体，其中所述启动子选自脂联素启动子、白蛋白启动子、黑色素启动子、血管假性血友病因子启动子、α肌球蛋白重链启动子、SGLT2启动子、MyoD启动子、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子和突触蛋白I(SYN1)启动子。


5.权利要求1的表达载体，其中所述启动子是肝特异性、内皮细胞特异性或脂肪细胞特异性的。


6.权利要求1的表达载体，其中所述表达载体是慢病毒载体。


7.一种病毒粒子，其包含权利要求1的表达载体。


8.一种靶细胞，其包含权利要求1的表达载体。


9.权利要求8的靶细胞，其中所述靶细胞是哺乳动物细胞。


10.权利要求8的靶细胞，其中所述细胞是小鼠细胞或人类细胞。

【专利技术属性】
技术研发人员：谢子建，科玛尔·索德希，纳德·亚伯拉罕，丽贝卡·马丁，约瑟夫·夏皮罗，
申请(专利权)人：马歇尔大学科研协会，
类型：发明
国别省市：美国;US