阴道乳杆菌用于提高体外受精成功率的用途制造技术

本发明专利技术提供了用于提高具有异常阴道微生物群的女性的体外受精成功率的方法。所述方法包括以下步骤：(i)选择疑似具有异常阴道微生物群(AVM)的女性；(ii)向所述女性施用合适的抗生素，所述抗生素以有效减少所述女性具有的异常阴道微生物群的数量的量和持续时间施用；(iii)经由阴道施用向所述女性施用一定量的乳杆菌物种，所述量足以定殖阴道粘膜；以及(iv)将胚胎转移至所述女性。

Application of Lactobacillus vaginalis in improving the success rate of IVF

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】阴道乳杆菌用于提高体外受精成功率的用途相关申请的交叉引用本申请要求于2017年7月7日提交的美国临时专利申请第62/529,733号的优先权，该专利申请的全部内容出于所有目的以其整体并入本文。专利技术背景通常，健康的阴道微生物群以乳杆菌物种为主，所述乳杆菌物种是革兰氏阳性杆菌，其在经由产生乳酸和酸化阴道或通过产生其它抗微生物产物如过氧化氢(H2O2)来抵抗感染中起重要作用。从世界范围内的女性生殖道中最常分离出的乳杆菌种类包括卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)、詹氏乳杆菌(Lactobacillusjensenii)、加氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)和惰性乳杆菌(Lactobacillusiners)。参见，例如，Antonio等人,(1999)J.Infect.Dis.180:1950-1956；Vasquez等人,(2002)J.Clin.Microbiol.40:2746-2749；Vallor,A.C.等人，JInfectDis.2001Dec1,184(11):1431-6；Ravel,J.,等人，ProcNatlAcadSci,USA.2011Mar15,108Suppl1:4680-7。卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌和加氏乳杆菌能够产生H2O2，而惰性乳杆菌菌株通常不产生H2O2。这些物种在系统发育和功能上不同于食物和/或环境乳杆菌物种。这些兼性厌氧菌将葡萄糖代谢成乳酸，有助于维持较低的阴道pH(4.0-4.5)，这是阴道非特异性宿主防御的主要部分。产生H2O2的菌株(例如卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌)比不产生H2O2的那些菌株(惰性乳杆菌)更具保护性。实际上，已经证明具有占优势的阴道乳杆菌微生物群的女性患淋病、衣原体感染、滴虫病和细菌性阴道病的频率降低了50％。因此，与正常阴道微生物群相关的有益乳杆菌被认为是提供了保护性“生物膜”。参见，例如Falagas等人,(2006)Drugs,66:1253-1261。在处于生育年龄的大多数女性中，阴道微生物群表现出低的微生物多样性，并以107-109乳杆菌的菌落形成单位(CFU)/克液体为主，同时阴道是酸性的，并含有低水平的促炎细胞因子。不幸的是，一些处于生育年龄的女性缺乏或具有低水平的阴道乳杆菌，这可能是由于以下事实：阴道微生物生态系统是动态的并且可能受到月经周期、药物、一般健康状况、性和卫生实践和避孕的影响。占优势的阴道乳杆菌物种的损耗导致聚居了兼性和严格的厌氧菌，例如阴道加德纳菌(Gardnerellavaginalis)和阴道奇异菌(Atopobiumvaginae)的更多样的异常微生物群，较高的阴道pH和较高水平的促炎细胞因子(即细菌性阴道病)。通常使用Amsel标准或基于革兰氏染色的阴道涂片的Nugent评分来诊断BV，所述Amsel标准包括症状，例如具有鱼腥味和pH>4.5以及存在线索细胞(覆盖有粘附细菌的鳞状上皮细胞)的均质的白色阴道分泌物(Amsel,R等人,(1983)Am.J.Med.74:14-22和Nugent,R.P.等人,(1991)J.Clin.Microbiol.29:297-301)。然而，并非所有的女性都显示出BV的症状。事实上，一项最近的研究表明，高达50％的BV病例是无症状的(Ravel,J.等人.(2013)Proc.Natl.Acad.Sci.USA108Suppl1:4680–4687)。涉及异常阴道微生物群的存在的下生殖道感染(包括性传播疾病(STD))是处于生育年龄的女性中最常见的一些临床问题。异常阴道微生物群，特别是细菌性阴道病(BV)是妊娠中最常见的生殖器感染之一。妊娠期间异常阴道微生物群的存在与早产、低出生体重和新生儿死亡率有关。妊娠中期诊断为细菌性阴道病的女性比没有细菌性阴道病的女性更可能生出早产低出生体重的婴儿。参见，例如，Hay,P.E.等人.(1994)BMJ.308:295-298；Hillier,S.L.等人.(1995)N.Engl.J.Med.333:1737-1742；Larsson,P.G.等人.(2000)Acta.Obstet.Gynecol.Scand.79:390-396；Svare,J.A.等人.(2006)BJOG113:1419-1425；Thorsen,P.等人(2006)Acta.Obstet.Gynecol.Scand.85:906-911；和Brocklehurst,P.等人.(2013)CochraneDatabaseSyst.Rev.1:CD000262。此外，在大约19％的不孕女性群体中也发现了细菌性阴道病。参见，例如，Haahr,T.等人.Hum.Reprod.2016Apr,31(4):795-803。在不孕女性中进行的BV研究表明AVM的存在影响女性的生育力，并且与IVF患者的临床妊娠率呈负相关(Haahr,T.等人,Hum.Reprod.2016Apr,31(4):795-803；Mangot-Bertrand,J.等人(2013)Microbiol.Infect.Dis.32:535-541；Salah,R.M.等人,(2013)Eur.J.Obstet.Gynecol.Reprod.Biol.167:59-63)。本专利技术在IVF程序的背景下解决了这些和其它需求。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术提供了用于提高具有异常阴道微生物群的女性体外受精成功率的方法。所述方法包括(i)选择疑似具有异常阴道微生物群(AVM)的女性；(ii)在步骤iii之前，向所述女性施用针对细菌性阴道病相关的细菌(例如，阴道加德纳菌和阴道阿托波氏菌(Atopobiumvaginae))具有活性的抗生素，持续至少5天，其中以有效减少所述女性具有的异常阴道微生物群的数量的量和持续时间施用所述抗生素；(iii)经由阴道施用向所述女性施用一定量的乳杆菌物种，其中乳杆菌的量足以在步骤ii的抗生素施用之后定殖阴道粘膜，其中所述乳杆菌物种选自由以下组成的物种：卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌和加氏乳杆菌，其中在有效培养条件下，所述物种具有产生大于0.5ppm的过氧化氢的能力；以及iv)将人受精卵或胚胎转移至所述女性。在一些实施方案中，用于提高具有异常阴道微生物群的女性体外受精成功率的方法包括每日施用108-1010CFU/剂的乳杆菌的量。在一些实施方案中，用于提高具有异常阴道微生物群的女性体外受精成功率的方法包括施用克林霉素作为抗生素或甲硝唑作为抗生素。在另一个实施方案中，患者具有高于限定AVM的可接受阈值的阴道加德纳菌和/或和阴道阿托波氏菌水平。在另一个实施方案中，在胚胎移植(ET)之前，每天向所述患者施用一次108至1010CFU/剂的乳杆菌物种，持续7天，随后以相同的剂量每周两次，持续7周，直到通过超声和/或检测胎儿心跳确定了临床妊娠。在一些实施方案中，用于提高具有异常阴道微生物群的女性体外受精成功率的方法包括施用干燥组合物形式的乳杆菌。在一些实施方案中，在干燥之前，将乳杆菌悬浮在水性保存介质中。在一些实施方案中，水性保存介质可以包本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于提高具有异常阴道微生物群的女性的体外受精成功率的方法，其包括以下步骤：/ni)选择疑似具有异常阴道微生物群(AVM)的女性；/nii)在步骤iii之前，向所述女性施用针对细菌性阴道病相关的细菌具有活性的抗生素，持续至少5天，所述细菌性阴道病相关的细菌包括阴道加德纳菌(Gardnerellavaginalis)和阴道阿托波氏菌(Atopobium vaginae)，其中以有效减少所述女性具有的异常阴道微生物群的数量的量和持续时间施用所述抗生素；/niii)经由阴道施用向所述女性施用一定量的乳杆菌物种，其中乳杆菌的量足以在步骤ii的抗生素施用之后定殖阴道粘膜，其中所述乳杆菌物种选自由以下组成的物种：卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、詹氏乳杆菌(Lactobacillus jensenii)和加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)，其中在有效培养条件下，所述物种具有产生大于0.5ppm的过氧化氢的能力；以及/niv)将人受精卵或胚胎转移至所述女性。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170707 US 62/529,7331.用于提高具有异常阴道微生物群的女性的体外受精成功率的方法，其包括以下步骤：
i)选择疑似具有异常阴道微生物群(AVM)的女性；
ii)在步骤iii之前，向所述女性施用针对细菌性阴道病相关的细菌具有活性的抗生素，持续至少5天，所述细菌性阴道病相关的细菌包括阴道加德纳菌(Gardnerellavaginalis)和阴道阿托波氏菌(Atopobiumvaginae)，其中以有效减少所述女性具有的异常阴道微生物群的数量的量和持续时间施用所述抗生素；
iii)经由阴道施用向所述女性施用一定量的乳杆菌物种，其中乳杆菌的量足以在步骤ii的抗生素施用之后定殖阴道粘膜，其中所述乳杆菌物种选自由以下组成的物种：卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)、詹氏乳杆菌(Lactobacillusjensenii)和加氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)，其中在有效培养条件下，所述物种具有产生大于0.5ppm的过氧化氢的能力；以及
iv)将人受精卵或胚胎转移至所述女性。


2.如权利要求1所述的方法，其中向所述患者施用的乳杆菌的量是每日的量，并且为108至1010CFU/剂。


3.如权利要求1所述的方法，其中所述抗生素选自克林霉素和甲硝唑。


4.如权利要求1所述的方法，其中所述患者具有高于限定AVM的可接受阈值的阴道加德纳菌和/或和阴道阿托波氏菌水平。


5.如权利要求1所述的方法，其中在胚胎移植(ET)之前向所述患者施用的乳杆菌物种的量为每天一次，持续7天并且为108至1010CFU/剂，随后以相同...

【专利技术属性】
技术研发人员：托马斯·P·帕克斯，彼得·乌迈丹，乔根·斯科夫·詹森，托尔·哈尔，尼尔斯·奥尔德伯格，
申请(专利权)人：奥赛尔股份有限公司，国立血清研究所，奥尔胡斯大学，中日德兰大区，
类型：发明
国别省市：美国;US