一种利伐沙班中甲胺的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种利伐沙班中甲胺的检测方法。所述检测方法采用衍生化试剂，从而确定了利伐沙班基因毒性杂质甲胺的限度，并根据该限度建立了专属性较好，可定量检测的分析方法，有利于利伐沙班成品检测中加强对该基因毒性杂质的质量控制，从而提高对利伐沙班原料药的质量控制。且该检测方法仅需采用高效液相色谱仪即可进行，无需采用更高精度分析仪器,降低分析成本。

A method for the determination of methylamine in rivaroxaban

【技术实现步骤摘要】
一种利伐沙班中甲胺的检测方法
本专利技术属于分析化学
，具体涉及利伐沙班基因毒性杂质的检测方法。
技术介绍
基因毒性杂质(或遗传毒性杂质，GenotoxicImpurity，GTI)是指化合物本身直接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向。潜在基因毒性的杂质(PotentialGenotoxicImpurity，PGI)结构中含有与基因毒性杂质反应活性相似的基团(如肼类、环氧化合物、N-亚硝胺类等)，通常也作为基因毒性杂质来评估。基因毒性物质特点是在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，进而导致基因突变并可能促使肿瘤发生。因其毒性较强，对用药的安全性产生了强烈的威胁，近年来也越来越多的出现因为在已上市药品中发现痕量的基因毒性杂质残留而发生大范围的医疗事故，被FDA强行召回的案例，给药厂造成了巨大的经济损失。近年来各国的法规机构如FDA、EMA等都对基因毒性杂质有了更明确的要求，越来越多的药企在新药研发过程中着重关注基因毒性杂质的控制和检测。利伐沙班是由拜耳医药保健有限公司和强生公司联合研制的全球第一个口服直接Xa因子抑制剂，利伐沙班于2008年9月15日和10月1日分别在加拿大和欧盟获得上市批准，商品名为Xarelto。已被批准用于治疗深静脉血栓（DVT）、肺栓塞（PE）、急性冠状动脉综合征（ACS）、降低非瓣膜性房颤患者卒中和全身性栓塞的风险（NVAF/TIF）、预防膝关节或髋关节置换手术患者静脉血检形成（VTE）等，该产品适应症范围广、所属治疗领域市场容量巨大。且利伐沙班每日给药1次，口服，固定剂量，治疗窗宽，疗效可预测，无需监测，与食物和药物相互作用小，临床使用相当方便。根据利伐沙班工艺路线分析，有甲胺残留的可能，甲胺为基因毒性杂质，其含量的多少将严重影响药品的质量与安全性，为不断提高利伐沙班的安全性和有效性，经检索目前可采用气相色谱法、离子色谱法对甲胺进行检测。甲胺在气相色谱中出峰较早，拖尾严重，响应低，所以在气相色谱中不能完全准确定量样品中甲胺的含量，且甲胺在本品种中限度较低（75ppm）,气相色谱法不能满足利伐沙班中甲胺的检测要求。离子色谱法需要专用仪器与色谱柱，成本高，一般实验室未配置。虽然胺类物质可以采用酰氯进行衍生，但甲胺中含大量水，所以与酰氯反应产率较低且副反应多，不适于甲胺的检测。
技术实现思路
本专利技术建立了一种能在常规实验室内，有效检测利伐沙班中可能存在的甲胺方法，成功地解决上述技术问题。本专利技术提供了一种利伐沙班中甲胺的检测方法，所述的检测方法包括：1）使用高效液相色谱仪，具体色谱条件设置如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；优选地，为安捷伦ZORBAXEclipseXDB-C184.6mm×250mm，5μm；检测器：紫外检测器VWD；柱温：柱温25-35℃，优选地，为30℃；流速：0.7ml/min～0.8ml/min，优选地，为0.7ml/min；进样体积：10μl；流动相：由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为0.08体积%-0.12体积%甲酸水溶液，所述流动相B为乙腈，并进行梯度或等度洗脱；2)溶液配制：包括衍生剂溶液配制、空白溶剂的配制、杂质对照品溶剂配制和供试品溶剂的配制；其中，衍生剂溶液的配制为：精密量取2,4-二硝基氟苯置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得衍生剂溶液；空白溶剂的配制为：精密量取乙腈、三乙胺及所述衍生剂溶液置同一量瓶中，密封摇匀，置水浴，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得空白溶剂；杂质对照品溶液的配制为：精密称取甲胺，置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，再精密量取置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，密封摇匀，即得，作为甲胺贮备液，再精密量取该甲胺贮备液置量瓶中，再精密量取乙腈、三乙胺及所述衍生剂溶液置同一量瓶中，密封摇匀，置水浴，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；供试品溶液：精密称取作为供试品的利伐沙班，置量瓶中，再精密量取乙腈、三乙胺及所述衍生剂溶液置同一量瓶中，密封后振摇，置水浴，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀静置，过滤，取续滤液即得供试品溶液；3）操作精密量取步骤2）得到的空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液各10μl注入色谱仪，记录色谱图；计算供试品中甲胺的百分量。在本专利技术的实施方案中，优选地，所述步骤1)检测器的波长为380nm。在本专利技术的实施方案中，优选地，所述步骤1)甲酸含量0.1体积%。在本专利技术的实施方案中，更优选地，所述步骤1)流动相：以0.1体积%甲酸与乙腈进行梯度洗脱；其梯度洗脱方式如下：在上述实施方案中，优选地，步骤1）中所述色谱条件设置如下：色谱柱：安捷伦ZORBAXEclipseXDB-C184.6mm×250mm，5μm；检测器：紫外检测器VWD；柱温：30℃；流速：0.7ml/min；进样体积：10μl；流动相：由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为0.1体积%甲酸水溶液，所述流动相B为乙腈，并进行梯度洗脱；梯度洗脱方式如下：在上述实施方案中，优选地，所述供试溶液的浓度为5mg/ml；所述对照品溶液的浓度为0.375μg/ml。在上述实施方案中，优选地，所述步骤2)溶液的配制中衍生剂溶液的配制为：精密量取2,4-二硝基氟苯0.25mL置50mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得衍生剂溶液。在上述实施方案中，优选地，所述步骤2)溶液的配制中空白溶剂的配制为：精密量取5mL乙腈、100μl三乙胺及1mL所述衍生剂溶液置同一10mL量瓶中，密封摇匀，置50℃水浴30分钟，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得空白溶剂。在上述实施方案中，优选地，所述步骤2)溶液的配制中供试品溶液的配制为：取作为供试品的利伐沙班50mg，精密称定，置10mL量瓶中，再精密量取5mL乙腈、100μl三乙胺及1mL所述衍生剂溶液置同一10mL量瓶中，密封后振摇1min，置50℃水浴30分钟，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀静置5min，过滤，取续滤液即得供试品溶液。在上述实施方案中，优选地，所述步骤2)溶液的配制中杂质对照品溶液的配制为：取188mg甲胺，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL置100mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，再精密量取10mL置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，密封摇匀，即得，作为甲胺贮备溶液；精密量取所述甲胺贮备液1mL置10mL量瓶中，再精密量取5mL乙腈、100μl三乙胺及1mL所述衍生剂溶液置同一10mL量瓶中，密封摇匀，置50℃水浴30分钟，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得杂质对照品溶液。在上述实施方案中，优选地，所述步骤2)溶液的配制中还包括供试品加标溶液的配制，所述供试品本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利伐沙班中甲胺的检测方法，其特征在于：所述的检测方法包括/n1）使用高效液相色谱仪，具体色谱条件设置如下：/n色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；优选地，为安捷伦ZORBAX Eclipse XDB-C18 4.6mm×250mm，5μm；/n检测器：紫外检测器VWD；/n柱温：柱温25-35℃，优选地，为30℃；/n流速：0.7 ml/min～0.8ml/min，优选地，为0.7ml/min；/n进样体积：10μl；/n流动相：由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为0.08体积%-0.12体积%甲酸水溶液，所述流动相B为乙腈，并进行梯度或等度洗脱；/n2)溶液配制：/n包括衍生剂溶液配制、空白溶剂的配制、杂质对照品溶剂配制和供试品溶剂的配制；其中，衍生剂溶液的配制为：精密量取2,4-二硝基氟苯置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得衍生剂溶液；/n空白溶剂的配制为：精密量取乙腈、三乙胺及所述衍生剂溶液置同一量瓶中，密封摇匀，置水浴，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得空白溶剂；/n杂质对照品溶液的配制为：精密称取甲胺，置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，再精密量取置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，密封摇匀，即得，作为甲胺贮备液，再精密量取该甲胺贮备液置量瓶中，再精密量取乙腈、三乙胺及所述衍生剂溶液置同一量瓶中，密封摇匀，置水浴，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；/n供试品溶液：精密称取作为供试品的利伐沙班，置量瓶中，再精密量取乙腈、三乙胺及所述衍生剂溶液置同一量瓶中，密封后振摇，置水浴，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀静置，过滤，取续滤液即得供试品溶液；/n3）操作/n精密量取步骤2）得到的空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液各10μl注入色谱仪，记录色谱图；计算供试品中甲胺的百分量。/n...

【技术特征摘要】
1.一种利伐沙班中甲胺的检测方法，其特征在于：所述的检测方法包括
1）使用高效液相色谱仪，具体色谱条件设置如下：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；优选地，为安捷伦ZORBAXEclipseXDB-C184.6mm×250mm，5μm；
检测器：紫外检测器VWD；
柱温：柱温25-35℃，优选地，为30℃；
流速：0.7ml/min～0.8ml/min，优选地，为0.7ml/min；
进样体积：10μl；
流动相：由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为0.08体积%-0.12体积%甲酸水溶液，所述流动相B为乙腈，并进行梯度或等度洗脱；
2)溶液配制：
包括衍生剂溶液配制、空白溶剂的配制、杂质对照品溶剂配制和供试品溶剂的配制；其中，衍生剂溶液的配制为：精密量取2,4-二硝基氟苯置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得衍生剂溶液；
空白溶剂的配制为：精密量取乙腈、三乙胺及所述衍生剂溶液置同一量瓶中，密封摇匀，置水浴，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得空白溶剂；
杂质对照品溶液的配制为：精密称取甲胺，置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，再精密量取置量瓶中，加乙腈稀释至刻度，密封摇匀，即得，作为甲胺贮备液，再精密量取该甲胺贮备液置量瓶中，再精密量取乙腈、三乙胺及所述衍生剂溶液置同一量瓶中，密封摇匀，置水浴，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；
供试品溶液：精密称取作为供试品的利伐沙班，置量瓶中，再精密量取乙腈、三乙胺及所述衍生剂溶液置同一量瓶中，密封后振摇，置水浴，取出，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀静置，过滤，取续滤液即得供试品溶液；
3）操作
精密量取步骤2）得到的空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液各10μl注入色谱仪，记录色谱图；计算供试品中甲胺的百分量。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤1)色谱柱为安捷伦ZORBAXEclipseXDB-C184.6×250mm5μm。


3.根据权利要求1所述的检测方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵伟淑，杨茂，屈晓霞，傅启昌，向勇，
申请(专利权)人：重庆柳江医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50