本发明专利技术公开了一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备；（2）样品溶液的制备；（3）检测波长；（4）标准曲线的制作；（5）回归模型的建立与分析；（6）实验结果分析与优化。本发明专利技术提取工艺简单，提取效率高，易于推广应用，应用响应面法优化确定最优因素，保证提取科学性、稳定性，为质量标准研究提供依据。
A response surface methodology to optimize the extraction process of total flavonoids from Brassica oleracea
【技术实现步骤摘要】
一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺
本专利技术属于植物提取
，具体涉及一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺。
技术介绍
眼子菜（PotamogetondistinctusA.BennettJ.Bot.）是眼子菜科眼子菜属多年生水生草本植物的全草。俗称水上漂，又称水案板，在全国各稻作区均有分布，为稻田内多年生恶性杂草，主要依靠鸡爪芽（鳞茎）无性繁殖，常年造成危害。在全国第四次中药资源普查中发现眼子菜在贵州分布较广，安顺地区（屯堡人）民族民间用于治疗痔疮和肝炎效果较好。明代兰茂《滇南本草》中记载“牙齿草，又名牙拾草。生田中，味苦、涩，性寒。止赤白痢疾，大肠下血、妇人红崩漏下，恶血”。在《中药大辞典》中记载眼子菜具有清热利水、止血消肿、驱蛔的功效，眼子菜具有利尿、止血、杀虫等药理作用，用于治疗痔疮、蛔虫、水肿等病。前期研究表明眼子菜中含有黄酮类、挥发油类、氨基酸、糖类、鞣质及酚类等成分，其中黄酮类是主要活性物质。目前，国内外没有看到眼子菜提取工艺研究报道。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺，利用响应面法中的等高线和响应曲面进行参数分析，通过多元二次回归方程来拟合响应面值与因素之间函数关系的一种优化统计方法。此方法的优点是可以连续对试验因素的各个水平进行分析。一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备：称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品50.9mg，置于烧杯中，加入乙醇溶液，于水浴锅上45℃-55℃溶解，定容至50mL容量瓶中，摇匀，得到1.018mg/mL的芦丁对照溶液；（2）样品溶液的制备：将眼子菜粉碎，过20-40目筛，称取粗粉1g，置于具有瓶塞的锥形瓶中，加入乙醇溶液超声提取，冷却至室温，过滤，加乙醇溶液补足失去的重量，即得眼子菜总黄酮提取液；（3）检测波长：吸取眼子菜总黄酮提取液5.0mL置于50mL容量瓶中，加入5%NaNO2溶液2.0mL，摇匀，放置5min，加入10%Al(NO３)３溶液2.0mL，摇匀，放置5min，加入4%NaOH溶液10.0mL，再用乙醇溶液稀释至刻度，静置15min，在200-800nm波长处每隔2nm测定一次吸光度，样品溶液在508nm处有最大吸收，即为测定波长；分别吸取芦丁对照品溶液0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL于25mL量瓶中，依次加入5%NaNO2溶液2.0mL，摇匀，静置5min，然后加入10%Al(NO３)３溶液2.0mL，摇匀，静置5min，再加入4%NaOH溶液10.0mL，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15min，以依次加入上述显色剂的乙醇溶液作为空白对照，于200-800nm进行全波长光谱扫描，在508nm处有最大吸收，故选择测定波长为508nm；（4）标准曲线的制作：以吸光度A为纵坐标y，浓度c为横坐标x，绘制标准曲线，进行线性拟合，得吸光度A与浓度c的线性回归方程y=0.0052x+0.0046，以及相关系数R2为0.9985；样品溶液的测定：吸取样品溶液5.0mL，置于50mL容量瓶中，标准曲线法制备待测溶液，根据芦丁标准曲线求算出总黄酮浓度，根据以下公式计算总黄酮得率。其中，Y：总黄酮得率（%）；c：根据标准曲线所得总黄酮浓度（mg/mL）；V1：样品总溶液体积（mL）；V2：样品溶液测定体积（mL）；M：眼子菜质量（g）。（5）回归模型的建立与分析：采用DesignExpert8.0.5.0软件对实验结果进行多项式拟合回归，以提取温度A、乙醇浓度B、提取时间C和料液比D，以眼子菜总黄酮得率为响应值Y，建立回归方程：Y=1.12+0.035A+0.041B+0.028C+0.060D-0.025AB-0.025AC-0.002AD-0.012BC-0.021BD+0.051CD-0.081A2-0.035B2-0.032C2-0.036D2；（6）实验结果分析与优化：利用DesignExpert8.0.5.0软件根据多元二次回归方程进行绘图分析，得到回归方程的响应面及其等高线图。进一步的，所述步骤（1）、（2）、（3）和（4）中所用的乙醇溶液的浓度为50%。进一步的，眼子菜药材总黄酮的最佳提取工艺为：提取温度70℃-80℃、乙醇浓度45%-50%、提取时间60-70min和料液比1：40-50g/mL。进一步的，眼子菜药材总黄酮的最佳提取工艺为：提取温度75.77℃、乙醇浓度48.71%、提取时间65.07min和料液比1：45.77g/mL。为便于操作，眼子菜药材总黄酮的最佳提取工艺为：提取温度76℃、乙醇浓度49%、提取时间65min和料液比1：46g/mL。本专利技术响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺，与现有技术相比，其有益效果在于：本专利技术提取工艺简单，提取效率高，易于推广应用，应用响应面法优化确定最优因素，保证提取科学性、稳定性，为质量标准研究提供依据。附图说明图1是本专利技术乙醇浓度对眼子菜总黄酮得率影响图；图2是本专利技术料液比对眼子菜总黄酮得率影响图；图3是本专利技术提取温度对眼子菜总黄酮得率影响图；图4是本专利技术提取时间对眼子菜总黄酮得率影响图；图5是本专利技术乙醇浓度和提取温度交互作用下眼子菜总黄酮得率的等高线图；图6是本专利技术乙醇浓度和提取温度交互作用下眼子菜总黄酮得率的响应曲面图；图7是本专利技术提取时间和提取温度交互作用下眼子菜总黄酮得率的等高线图；图8是本专利技术提取时间和提取温度交互作用下眼子菜总黄酮得率的响应曲面图；图9是本专利技术料液比和提取温度交互作用下眼子菜总黄酮得率的等高线图；图10是本专利技术料液比和提取温度交互作用下眼子菜总黄酮得率的响应曲面图；图11是本专利技术提取时间和乙醇浓度交互作用下眼子菜总黄酮得率的等高线图；图12是本专利技术提取时间和乙醇浓度交互作用下眼子菜总黄酮得率的响应曲面图；图13是本专利技术料液比和乙醇浓度交互作用下眼子菜总黄酮得率的等高线图；图14是本专利技术料液比和乙醇浓度交互作用下眼子菜总黄酮得率的响应曲面图；图15是本专利技术料液比和提取时间交互作用下眼子菜总黄酮得率的等高线图；图16是本专利技术料液比和提取时间交互作用下眼子菜总黄酮得率的响应曲面图；图17为本专利技术芦丁标准曲线。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备：称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品50.9mg，置于烧杯中，加入乙醇溶液，于水浴锅上45℃-55℃溶解，定容至50mL容量瓶中，摇匀，得到1.018mg/mL的芦丁对照溶液；（2）样品溶液的制备：将眼子菜粉碎，过20-40目筛，称取粗粉1g，置于具有瓶塞的锥形本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺，其特征在于：包括以下步骤：/n（1）对照品溶液的制备：称取 120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品50.9mg，置于烧杯中，加入乙醇溶液，于水浴锅上45℃-55℃溶解，定容至 50 mL 容量瓶中，摇匀，得到1.018 mg/mL的芦丁对照溶液；/n（2）样品溶液的制备：将眼子菜粉碎，过20-40目筛，称取粗粉 1 g，置于具有瓶塞的锥形瓶中，加入乙醇溶液超声提取，冷却至室温，过滤，加乙醇溶液补足失去的重量，即得眼子菜总黄酮提取液；/n（3）检测波长：吸取眼子菜总黄酮提取液5.0 mL 置于 50 mL 容量瓶中，加入 5% NaNO
【技术特征摘要】
1.一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺，其特征在于：包括以下步骤：
（1）对照品溶液的制备：称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品50.9mg，置于烧杯中，加入乙醇溶液，于水浴锅上45℃-55℃溶解，定容至50mL容量瓶中，摇匀，得到1.018mg/mL的芦丁对照溶液；
（2）样品溶液的制备：将眼子菜粉碎，过20-40目筛，称取粗粉1g，置于具有瓶塞的锥形瓶中，加入乙醇溶液超声提取，冷却至室温，过滤，加乙醇溶液补足失去的重量，即得眼子菜总黄酮提取液；
（3）检测波长：吸取眼子菜总黄酮提取液5.0mL置于50mL容量瓶中，加入5%NaNO2溶液2.0mL，摇匀，放置5min，加入10%Al(NO３)３溶液2.0mL，摇匀，放置5min，加入4%NaOH溶液10.0mL，再用乙醇溶液稀释至刻度，静置15min，在200-800nm波长处每隔2nm测定一次吸光度；
分别吸取芦丁对照品溶液0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL于25mL量瓶中，依次加入5%NaNO2溶液2.0mL，摇匀，静置5min，然后加入10%Al(NO３)３溶液2.0mL，摇匀，静置5min，再加入4%NaOH溶液10.0mL，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15min，以依次加入上述显色剂的乙醇溶液作为空白对照，于200-800nm进行全波长光谱扫描；
（4）标准曲线的制作：以吸光度A为纵坐标y，浓度c为横坐标x，绘制标准曲线，进行线性拟合，得吸光度A与浓度c的线性回归方程y=0.0052x+0.0046，以及相关系数R2为0.9985；
（5）回归模型的建立...
【专利技术属性】
技术研发人员：洪开文，宋伦，郑重，
申请(专利权)人：安顺职业技术学院，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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