一种从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法，该方法包括以下步骤：通过将灭活红球藻滴加在Wax固体培养基上，在灭活红球藻周围加入经预处理的淤泥进行培养，形成子实体；对子实体进行纯化培养，得到裂解红球藻的粘细菌。本发明专利技术从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法具有工艺简单、操作方便、成本低廉等优点，筛选得到的粘细菌能够裂解红球藻，为研究裂解红球藻的方法提供新的思路，为优化裂解红球藻、从中提虾青素的方法奠定基础，拓宽了粘细菌的应用范围；同时，本发明专利技术中采用淤泥来源分布广泛，从淤泥中筛选粘细菌，有利于丰富粘细菌资源。

A method of screening slime bacteria from sludge

【技术实现步骤摘要】
一种从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法
本专利技术涉及一种微生物的筛选方法，尤其涉及一种从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法。
技术介绍
粘细菌(Myxobacteria)是于一种革兰氏阴性菌，主要存在于各种土壤、腐烂的树木、树木的表皮和动物的食物残渣排泄物中。粘细菌被分类归属于变形细菌纲中的δ分枝，现今被已发现的粘细菌被分门别类为3个亚目，并且有21个属，其中还包括大约50个种，粘细菌可以产生组成结构各有不同、类别丰富的代谢产物，具有很高的研究价值，是一种重要的微生物资源。粘细菌生长发育过程一般包括营养细胞生长期和细胞发育期。在营养贫瘠条件下，粘细菌细胞会发生聚集运动，大部分细胞会发生自溶，而存活下来的细胞有序堆积形成多细胞结构，最后形成肉眼可见的子实体，进入休眠状态。而当营养状况良好时，粘孢子又可以重新萌发，呈营养阶段生长，重新开始一轮新的发育。但粘细菌的孕育需要的时间比较长，同时还因为它对生长的密度有依赖性，所以在子实体还没有形成前就很容易被生长比它迅速的杂菌污染，如：霉菌及阿米巴、线虫污染，不仅如此，它的胞外基质较复杂也很容易被染上杂菌。因此，由于这种生长特性，粘细菌的分离和纯化一直是粘细菌资源利用过程中的重点和难点。现有技术中有多种关于分离粘细菌的研究，通过多种不同的筛选方法得到不同的粘细菌，例如有研究利用微包埋的方法分离了纤维堆囊菌，有研究利用分子法和HPLC结合的方法分离出能够产生埃博霉素的粘细菌菌株，有研究利用溶纤维素粘细菌经低能氮离子诱变得到埃博霉素高产菌株，有研究利用分子生物学技术来分析海底粘细菌的多样性，建立基因库等等。可见，探究不同的分离筛选粘细菌的方法，能够扩大研究粘细菌的分布多样性，丰富的粘细菌资源，拓宽粘细菌的应用范围，具有十分重大的意义。雨生红球藻可以在体内合成和累积虾青素，是生产虾青素的重要来源。破坏雨生红球藻的细胞将虾青素释放出来从而被提取是现有技术中生产虾青素的主要方法，但是雨生红球藻的细胞壁厚且还存在胶质，因此裂解雨生红球藻的方法是利用雨生红球藻生产虾青素的难点和关键所在。为了使雨生红球藻裂解，现有技术中所采用的方法有匀浆法、冻融温差法、超声波法、直接研磨法及低温研磨法等方法。但匀浆法和超声波法破壁过程中使用的溶剂或介质，对后续的虾青素提取及分离有影响。而直接研磨法因为产生高温，使虾青素的活性有所下降。加液氮低温研磨法虽然没有运用化学试剂，但不适于工厂大规模生产。因此，寻求新的雨生红球藻的裂解方法，对于从红球藻中提取虾青素的工艺具有十分重要的影响，有很大的发展前景。目前，尚未有关于筛选裂解红球藻的粘细菌的方法的相关报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法，筛选得到的粘细菌能够裂解红球藻，本专利技术提供了一种新的筛选粘细菌的方法，也为研究裂解红球藻的方法提供新的思路。为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：一种从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法，包括以下步骤：S1、将灭活红球藻滴加在Wax固体培养基上，在灭活红球藻周围加入经预处理的淤泥进行培养，形成子实体；S2、对步骤S1中得到的子实体进行纯化培养，得到裂解红球藻的粘细菌。上述的从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法中，进一步的，所述步骤S1中，所述灭活红球藻由以下方法获得：(1)将红球藻藻种接种于BBM培养基中，得到原藻液；(2)将步骤(1)得到的原藻液接入到BBM培养基中进行培养，直至达到对数生长期；(3)采用200μmol/m2·s的强光对步骤(2)中培养得到的红球藻进行诱导，使红球藻由绿变红，去除培养基，所得红球藻用121℃高压蒸汽灭菌，得到灭活红球藻。上述的从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法中，进一步的，所述步骤(1)中，所述红球藻藻种的接种量为1％；所述步骤(2)中，所述原藻液与BBM培养基的体积比为1∶2；所述培养的条件为：温度23±0.5℃，光照强度40μmol/m2·s，光周期12∶12，培养时间为6天；所述步骤(3)中，所述诱导的时间为6天；所述灭菌的时间为30min。上述的从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法中，进一步的，所述步骤S1中，所述淤泥的预处理方法为：将淤泥与抗生素混合液、放线菌酮溶液混合，所得混合物于55℃水浴下静置10min，在常温下放置12小时，完成对淤泥的预处理。上述的从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法中，进一步的，所述淤泥与抗生素混合液、放线菌酮溶液的比例为1g∶3mL∶1mL；所述抗生素混合液是由卡那霉素和氨苄青霉素溶于水制得；所述抗生素混合液中，卡那霉素的浓度为8mg/mL，氨苄青霉素的浓度为30mg/mL；所述放线菌酮溶液由放线菌酮溶解于二甲基亚砜中制得；所述放线菌酮溶液中放线菌酮的浓度为15mg/mL。上述的从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法中，进一步的，所述步骤S1中，所述培养在温度为30℃下进行；所述培养的时间为10天；所述Wax固体培养基中还含有放线菌酮，浓度为20μg/mL。上述的从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法中，进一步的，所述步骤S2具体为：S2-1、将子实体接入Wax固体培养基上进行培养；S2-2、将经步骤S2-1中经Wax固体培养基培养后得到的细菌转接入Rich液体培养基中进行培养，得到裂解红球藻的粘细菌。上述的从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法中，进一步的，所述步骤S2-1中，所述培养至少进行转接培养两次；所述培养在温度为30℃下进行，单次培养的时间为5天；所述Wax固体培养基中还含有放线菌酮，浓度为20μg/mL.上述的从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法中，进一步的，所述步骤S2-2中，所述Rich液体培养基置于恒温摇床上，恒温摇床的温度为30℃，恒温摇床的转速为150r/min；所述培养的时间为7天。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：(1)本专利技术提供了一种从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法，通过将灭活红球藻滴加在Wax固体培养基上，在灭活红球藻周围加入经预处理的淤泥进行培养，形成子实体；对子实体进行纯化培养，得到裂解红球藻的粘细菌。本专利技术中，以灭活红球藻诱导淤泥产生子实体分离菌株，采用灭活红球藻可以避免可能存在的红球藻对抗粘细菌的裂解；进一步对子实体进行纯化培养，有利于获得单克隆菌株。本专利技术从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法具有工艺简单、操作方便、成本低廉等优点，筛选得到的粘细菌能够裂解红球藻，为研究裂解红球藻的方法提供新的思路，为优化裂解红球藻、从中提虾青素的方法奠定基础，拓宽了粘细菌的应用范围；同时，本专利技术中采用淤泥来源分布广泛，从淤泥中筛选粘细菌，有利于丰富粘细菌资源。(2)本专利技术中，对淤泥进行预处理，具体为将淤泥与抗生素混合液、放线菌酮溶液混合，所得混合物于55℃水浴下10min，再于常温下放置12小时，可以有效杀灭对以上抗生素敏感的菌株，去除淤泥中的其他杂菌，有利于后续目本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、将灭活红球藻滴加在Wax固体培养基上，在灭活红球藻周围加入经预处理的淤泥进行培养，形成子实体；/nS2、对步骤S1中得到的子实体进行纯化培养，得到裂解红球藻的粘细菌。/n

【技术特征摘要】
1.一种从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将灭活红球藻滴加在Wax固体培养基上，在灭活红球藻周围加入经预处理的淤泥进行培养，形成子实体；
S2、对步骤S1中得到的子实体进行纯化培养，得到裂解红球藻的粘细菌。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述灭活红球藻由以下方法获得：
(1)将红球藻藻种接种于BBM培养基中，得到原藻液；
(2)将步骤(1)得到的原藻液接入到BBM培养基中进行培养，直至达到对数生长期；
(3)采用200μmol/m2·s的强光对步骤(2)中培养得到的红球藻进行诱导，使红球藻由绿变红，去除培养基，所得红球藻用121℃的高压蒸汽灭菌，得到灭活红球藻。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述红球藻藻种的接种量为1％；
所述步骤(2)中，所述原藻液与BBM培养基的体积比为1∶2；所述培养的条件为：温度23±0.5℃，光照强度40μmol/m2·s，光周期12∶12，培养时间为6天；
所述步骤(3)中，所述诱导的时间为6天；所述灭菌的时间为30min。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述淤泥的预处理方法为：将淤泥与抗生素混合液、放线菌酮溶液混合，所得混合物于55℃水浴下静置10min，在常温条件下放置12小时，完成对淤泥的预处理。...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈治国，刘臻，张晓粤，宋学文，
申请(专利权)人：长沙学院，
类型：发明
国别省市：湖南;43