一种类肽纳米片层、其制备方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种类肽纳米片层，所述纳米片层包含，如式I所示的类肽，还提供了该类肽及其纳米片层的制备方法和应用。本发明专利技术的类肽可以通过采用表面等离激元共振成像技术检测阿尔兹海默症，具有高通量、灵敏度高的优点，而且芯片可以重复利用所以成本低。另外，本发明专利技术直接检测血液中的多肽含量，不会给病人造成创伤。本发明专利技术涉及具有特定功能的纳米片层的合成以及对阿尔兹海默症的检测。因目前缺乏对阿尔兹海默症早期的有效检测手段，利用本发明专利技术可以有效地实现对阿尔兹海默症的早期检测，进而展开治疗并延缓病情的恶化。

A kind of peptide nano film, its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种类肽纳米片层、其制备方法及应用
本专利技术属于药物科学领域，具体涉及一种类肽纳米片层，及其制备方法和应用。
技术介绍
阿尔兹海默症(Alzheimer’sDisease,AD)是一种以记忆力减退和认知功能障碍为发病症状的老年期高发病率的神经系统变性疾病。根据相关调查研究报告显示，预计到2030年全球阿尔兹海默症患者数量将达到7470万，到2050年将达1亿3150万人。在中国，到2050年阿尔兹海默症患者数量估计将达到3000万，并且目前老龄化的社会现象越来越严重，在65岁以上的老人患阿尔兹海默症病概率为6.6％，在85岁以上的老人中发病率高达30％以上，因此阿尔兹海默症成为我们必须要面对的重大社会问题。目前，诊断首先要根据临床表现做出痴呆的诊断，然后对病史、病程的特点、体格检查及神经系统检查、心理测试与辅助检查的资料综合分析，排除其他原因引起的痴呆，才能诊断为阿尔兹海默症。最常用的有简易智能状态检查，是一个非常简单的测试工具。此外，阿尔兹海默病评定量表亦是国际通用的测试工具。这些检测需要医生具有丰富的经验和知识。还有一些其他的辅助检测手段，比如影像学检查、正电子发射型计算机断层扫描成像、脑电图检查等。目前，只能在临床症状较为明显时对阿尔兹海默症作出诊断，缺乏有效的早期检查方法和生化方面的检查手段。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种类肽纳米片层、其制备方法及应用。为实现上述目的，本专利技术的第一方面提供了一种类肽纳米片层，所述纳米片层包含：如式I所示的类肽，其中，所述n为3-7的正整数。根据第一方面所述的类肽纳米片层，所述纳米片层的片层厚度优选为：1～10nm，优选为2～5nm。本专利技术的第二方面提供了第一方面所述的类肽纳米片层的制备方法，所述方法包括以下步骤：(1)制备类肽母液：将类肽溶解到二甲基亚砜和水的混合溶液中制得类肽母液；(2)制备类肽溶液：将步骤(1)制备的类肽母液稀释到片层形成缓冲液中制得类肽溶液；和(3)摇晃步骤(2)制备的类肽溶液，得到所述类肽纳米片层溶液。根据本专利技术第二方面的制备方法，其中，所述步骤(1)中，所述类肽通过固相亚单元合成法制备，包括以下步骤：(a)将溴乙酸和N,N’-二异丙基碳二亚胺加入RinkamideAM树脂进行反应，将树脂末端的氨基酰化；(b)加入伯胺进行反应，完成一个亚单位的合成；(c)重复步骤(a)和(b)直至完成其余单位的合成；和(d)合成完毕后，侧链保护基团被除去，并用三氟乙酸、超纯水、三异丙基硅烷混合溶液将类肽从树脂上裂解。根据本专利技术第二方面的制备方法，其中，所述步骤(1)中，反应温度为37℃，反应时间为10～60min，优选为20～40min，最优选为30min；所述步骤(2)中，所述伯胺选自以下一种或多种：1,4丁二胺、β-苯乙胺、乙二胺、异丁胺、甲基苄胺、胡椒基胺、联苯乙胺；优选为1,4丁二胺、β-苯乙胺、乙二胺、异丁胺，胡椒基胺、联苯乙胺；更优选为1,4丁二胺、β-苯乙胺、异丁胺；最优选为β-苯乙胺；和/或所述步骤(4)中，所述混合溶液中体积比为95％三氟乙酸，2.5％超纯水和2.5％三异丙基硅烷。根据本专利技术第二方面的制备方法，其中，所述步骤(1)中，所述混合溶液中二甲基亚砜和水的体积比为2:1；和/或所述类肽母液的浓度为1～5mM，优选为1～3mM，最优选为2mM。根据本专利技术第二方面的制备方法，其中，所述步骤(2)中，所述片层形成缓冲液中包括4-羟乙基哌嗪乙磺酸和氯化钠；优选地，所述缓冲液中4-羟乙基哌嗪乙磺酸的浓度为5～20mM，进一步优选为8～15mM，最优选为10mM；所述缓冲液中氯化钠的浓度为50～200mM，进一步优选为80～150mM，最优选为100mM；和/或所述缓冲液的PH为8。根据本专利技术第二方面的制备方法，其中，所述步骤(3)中，所述溶液的摇晃方法为手动摇晃法和/或机器摇晃法；其中，所述手动摇晃法包括以下步骤：将类肽溶液在室温下稳定存放22小时，然后手动轻轻摇晃30秒，再稳定1分钟，重复摇晃-稳定过程5次；和/或所述机器摇晃法包括以下步骤：将类肽溶液在管中自水平至垂直缓慢旋转，旋转速度为0.6rpm，每隔450秒旋转一次。本专利技术的第三方面提供了第一方面所述的类肽纳米片层或根据第二方面所述方法制备的类肽纳米片层在制备用于检测β-淀粉样多肽相关疾病的医疗产品中的应用；优选地，所述β-淀粉样多肽相关疾病为阿尔茨海默症。本专利技术的第四方面提供了一种用于检测β-淀粉样多肽的试剂盒，所述试剂盒包括：第三方面所述的类肽纳米片层，和/或根据第二方面所述方法制备的类肽纳米片层。本专利技术的目的是提供一种阿尔兹海默症检测的新方法。所述技术可通过特异性识别β-淀粉样多肽(Aβ1-42)的类肽纳米片层作为探针分子，利用表面等离激元共振成像技术检测血清中β-淀粉样多肽的含量，从而实现对阿尔兹海默症的检测。本专利技术方法具有高通量、成本低、灵敏度高的优点，可以实现对阿尔兹海默症的早期检测。所述应用用于合成具有特定功能纳米片层结构，用于检测β-淀粉样多肽以及用于检测血清中β-淀粉样多肽的含量，实现对阿尔兹海默症的检测。本专利技术提供一种合成类肽纳米片层的方法，所述方法包括：(1)首先合成一条特定序列的类肽；(2)然后类肽分子在界面处自组装形成纳米片层结构；(3)最后对纳米片层进行表征；优选的，合成方法采用固相亚单元合成法；优选的在气液界面自组装形成纳米片层；优选的，利用荧光显微镜和原子力显微镜进行表征。本专利技术还提供一种检测β-淀粉样多肽方法，所述方法包括：(4)首先检测纳米片层结构和β-淀粉样多肽的亲和力；(5)然后检测纳米片层结构检测β-淀粉样多肽的灵敏度和特异性；优选地，检测方法利用表面等离激元共振成像技术。本专利技术还提供一种检测血清中β-淀粉样多肽含量方法，即将血清稀释一定比例检测病人和正常人血清中β-淀粉样多肽含量的不同。优选地，检测方法利用表面等离激元共振成像技术；优选地，血清稀释比例在(1：10到1:10000之间)本专利技术总体上是基于表面等离激元共振成像技术，以特定功能的纳米片层为探针，检测血清中β-淀粉样多肽含量，实现对阿尔兹海默症的检测。本专利技术的类肽纳米片层可以具有但不限于以下有益效果：本专利技术的类肽可以通过采用表面等离激元共振成像技术检测阿尔兹海默症，具有高通量、灵敏度高的优点，而且芯片可以重复利用所以成本低。另外，本专利技术直接检测血液中的多肽含量，不会给病人造成创伤。本专利技术涉及具有特定功能的纳米片层的合成以及对阿尔兹海默症的检测。因目前缺乏对阿尔兹海默症早期的有效检测手段，利用本专利技术可以有效地实现对阿尔兹海默症的早期检测，进而展开治疗并延缓病情的恶化。附图说明<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种类肽纳米片层，其特征在于，所述纳米片层包含：如式I所示的类肽，/n

【技术特征摘要】
1.一种类肽纳米片层，其特征在于，所述纳米片层包含：如式I所示的类肽，



其中，所述n为3-7的正整数。


2.根据权利要求1所述的类肽纳米片层，其特征在于，所述纳米片层的片层厚度为1～10nm，优选为2～5nm。


3.根据权利要求1或2所述的类肽纳米片层的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)制备类肽母液：将类肽溶解到二甲基亚砜和水的混合溶液中制得类肽母液；
(2)制备类肽溶液：将步骤(1)制备的类肽母液稀释到片层形成缓冲液中制得类肽溶液；和
(3)摇晃步骤(2)制备的类肽溶液，得到所述类肽纳米片层溶液。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述类肽通过固相亚单元合成法制备，包括以下步骤：
(a)将溴乙酸和N,N’-二异丙基碳二亚胺加入RinkamideAM树脂进行反应，将树脂末端的氨基酰化；
(b)加入伯胺进行反应，完成一个亚单位的合成；
(c)重复步骤(a)和(b)直至完成其余单位的合成；和
(d)合成完毕后，侧链保护基团被除去，并用三氟乙酸、超纯水、三异丙基硅烷混合溶液将类肽从树脂上裂解。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：
所述步骤(1)中，反应温度为37℃，反应时间为10～60min，优选为20～40min，最优选为30min；
所述步骤(2)中，所述伯胺选自以下一种或多种：1,4丁二胺、β-苯乙胺、乙二胺、异丁胺、甲基苄胺、胡椒基胺、联苯乙胺；优选为1,4丁二胺、β-苯乙胺、乙二胺、异丁胺，胡椒基胺、联苯乙胺；更优选为1,4丁二胺、β-苯乙胺、异丁胺；最优选为β-苯乙胺；和/或
所述步骤(4)...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨延莲，高厚乾，朱凌，赵子健，胡志远，王琛，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：北京;11