生物体粒子测定用方法、装置及试剂盒、及非特异信号的检测方法制造方法及图纸

本发明专利技术涉及生物体粒子测定用方法、装置及试剂盒、及非特异信号的检测方法。本发明专利技术的方法包括：将下列试样供于信号检测：通过将从受试体分取的含生物体粒子的第1试样和能与生物体粒子结合且含标记物质的检测体在能与生物体粒子结合且不含标记物质的抑制物质的存在下混合而调制的第1测定试样、及通过将从与受试体相同的受试体与第1试样独立地分取的第2试样和检测体在抑制物质实质上不存在的条件下混合而调制的第2测定试样，其中在检测工序中检测到来源于第1和第2测定试样中所含的标记物质的信号，从来源于第1和第2测定试样中所含的标记物质的信号的检测结果算出生物体粒子的测定结果。

Methods, devices and kits for the determination of biological particles, and methods for the detection of non-specific signals

【技术实现步骤摘要】
生物体粒子测定用方法、装置及试剂盒、及非特异信号的检测方法
在本说明书中公开了涉及生物体粒子的测定方法、非特异信号的检测方法、粒子测定装置及用于检测生物体粒子的试剂盒的技术。
技术介绍
在生物体内，已知淀粉样凝集体等的凝集体或称为外泌体或微颗粒的各种细胞外小泡等的生物体粒子从细胞内向细胞外释放。近年，这些生物体粒子作为反映组织的病态生理学的信息的生物标志物而受到关注。作为测定细胞外小泡的方法的一例，可举出非专利文献1。在此文献中公开了由作为标记抗体的阴性对照的同种型对照抗体的散点图的荧光强度设定背景信号的阈值，确定CD41阳性的细胞外小泡的方法。【现有技术文献】【非专利文献】【非专利文献1】Aflowcytometricmethodforcharacterizationofcirculatingcell-derivedmicroparticlesinplasma.,NielsenMHetal.,JExtracellVesicles.2014；3.doi：10.3402/jev.v3.20795.eCollection201)【专利技术的概要】【专利技术要解决的课题】本专利技术人发现，在非专利文献1记载的方法中，不能与通过荧光染料标记抗体与细胞外小泡以外的混杂物非特异性地结合而发生的信号区别开有无法正确地检测细胞外小泡的担忧。本公开以判别来源于测定对象的生物体粒子的特异性信号和非特异性的信号，提高生物体粒子的测定精度作为一课题。【用于解决课题的手段】本公开的有的实施方式涉及生物体粒子的测定方法。上述测定方法包括：将通过将含从受试体分取的生物体粒子的第1试样和能与上述生物体粒子结合并且含标记物质的检测体在能与上述生物体粒子结合并且不含上述标记物质的抑制物质的存在下混合而调制的第1测定试样、及，通过将从与上述受试体相同的受试体与上述第1试样独立地分取的第2试样和上述检测体在上述抑制物质实质上不存在的条件下混合而调制的第2测定试样供于信号检测的检测工序，其中，从在上述检测工序中检测到来源于上述第1测定试样中所含的上述标记物质的信号和来源于上述第2测定试样中所含的上述标记物质的信号的来源于上述第1测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果和来源于上述第2测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果算出上述生物体粒子的测定结果的算出工序。由本实施方式，生物体粒子的正确的测定变得可能。本公开的有的实施方式涉及非特异信号的检测方法。从通过将含从受试体分取的生物体粒子的试样和能与上述生物体粒子结合并且含标记物质的检测体在能与上述生物体粒子结合并且不含上述标记物质的抑制物质的存在下混合而调制的测定试样将来源于上述标记物质的信号由粒子测定装置检测，将检测的信号判断为非特异信号。根据本实施方式，可在生物体粒子的测定中，判别非特异性的信号。本公开的有的实施方式涉及生物体粒子的测定方法。上述测定方法包括：将含从受试体分取的生物体粒子的第i试样、能与含与固相能解离地结合的标签的上述生物体粒子结合的捕获体和能与上述生物体粒子结合并且含标记物质的检测体在能与上述生物体粒子结合并且不含上述标记物质的抑制物质的存在下混合，在上述固相上形成上述生物体粒子、上述捕获体和上述抑制物质的第i复合物的调制工序a-1，调制含从上述固相解离的上述第i复合物的一部分或全部的第i测定试样的调制工序a-2，将从与上述受试体相同的受试体与上述第i试样独立地分取的第ii试样、上述捕获体和上述检测体在上述抑制物质实质上不存在的条件下混合，在上述固相上形成上述生物体粒子、上述捕获体和上述检测体的第ii复合物的调制工序b-1，调制含从上述固相解离的上述第ii复合物的一部分或全部的第ii测定试样的调制工序b-2，将来源于上述第i测定试样中所含的上述标记物质的信号和来源于上述第ii测定试样中所含的上述标记物质的信号由粒子测定装置检测的检测工序，及从来源于上述第i测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果和来源于上述第ii测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果算出上述生物体粒子的测定结果的算出工序。本公开的有的实施方式涉及粒子测定装置。上述粒子测定装置具备处理部，所述处理部取得对于将含从受试体分取的生物体粒子的第1试样和与上述生物体粒子结合并且含标记物质的检测体在能与上述生物体粒子结合并且不含上述标记物质的抑制物质的存在下混合而调制的第1测定试样而将来源于上述第1测定试样中所含的上述标记物质的信号由粒子测定装置检测的结果，及对于将从与上述受试体相同的受试体与上述第1试样独立地分取的第2试样和上述检测体在上述抑制物质实质上不存在的条件下混合而调制的第2测定试样而将来源于上述第2测定试样中所含的上述标记物质的信号由粒子测定装置检测的结果，从来源于上述第1测定试样中所含的上述标记物质的信号的测定结果和来源于上述第2测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果算出上述生物体粒子的测定结果。本公开的有的实施方式涉及用于检测生物体粒子的试剂盒。上述试剂盒含能结合生物体粒子且含标记物质的检测体、及能与上述粒子结合且不含标记物质的抑制物质。本公开的有的实施方式涉及检测体及抑制物质用于制造用于检测生物体粒子的试剂盒的用途。上述检测体能与上述生物体粒子结合并且含标记物质，上述抑制物质能与上述生物体粒子结合并且不含上述标记物质，上述试剂盒在上述的方法中使用。【专利技术的效果】由本专利技术，更正确的生物体粒子的测定变得可能。【附图说明】【图1】显示第1测定方法的概略图。【图2】显示第2测定方法的概略图。【图3】显示第3测定方法的概略图。【图4】显示粒子测定系统的构成例。【图5】显示粒子测定装置的硬件的构成例。【图6】显示粒子测定装置的动作的流程。【图7】显示检查试剂盒的例。【图8】图8A显示由以往方法，使用APC标记抗CD235a抗体而检测的信号。图8B显示由以往方法，使用APC标记同种型对照抗体而检测的信号。【图9】显示使用抗CD146抗体的细胞外小泡的流式细胞术的结果。【图10】显示使用抗CD61抗体或抗CD235a抗体的细胞外小泡的流式细胞术的结果。【图11】显示使用抗CD61抗体的细胞外小泡的流式细胞术的结果。【图12】图12A显示由本公开的方法，使用APC标记抗CD235a抗体而检测的信号。图12B显示由本公开的方法，使用APC标记同种型对照抗体而检测的信号。【具体实施方式】[1.用语的说明]首先，对于本公开中使用的用语进行说明。如无特别说明，在本说明书、专利权利要求、附图中使用的用语的解释根据本项的说明。“受试体”是从动物或植物采集的液体成分，只要是含生物体粒子，就不限制。具体而言，从动物采集的受试体含血清、血浆、淋巴液、尿、腹水、胸水、脑脊髓液、间质液等。另外，从植物采集的液体试样含间质液、导管液、师管液等。另外，受试体也可为生物体粒子的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.生物体粒子的测定方法，其包括：/n(a)将下列试样供于信号检测的检测工序：/n通过将从受试体分取的含生物体粒子的第1试样和能与上述生物体粒子结合并且含标记物质的检测体在能与上述生物体粒子结合并且不含上述标记物质的抑制物质的存在下混合而调制的第1测定试样、及/n通过将从与上述受试体相同的受试体与上述第1试样独立地分取的第2试样和上述检测体在上述抑制物质实质上不存在的条件下混合而调制的第2测定试样，/n其中，在上述检测工序中检测到来源于上述第1测定试样中所含的上述标记物质的信号和来源于上述第2测定试样中所含的上述标记物质的信号，及/n(b)从来源于上述第1测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果和来源于上述第2测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果算出上述生物体粒子的测定结果的算出工序。/n

【技术特征摘要】
20180727 JP 2018-1415221.生物体粒子的测定方法，其包括：
(a)将下列试样供于信号检测的检测工序：
通过将从受试体分取的含生物体粒子的第1试样和能与上述生物体粒子结合并且含标记物质的检测体在能与上述生物体粒子结合并且不含上述标记物质的抑制物质的存在下混合而调制的第1测定试样、及
通过将从与上述受试体相同的受试体与上述第1试样独立地分取的第2试样和上述检测体在上述抑制物质实质上不存在的条件下混合而调制的第2测定试样，
其中，在上述检测工序中检测到来源于上述第1测定试样中所含的上述标记物质的信号和来源于上述第2测定试样中所含的上述标记物质的信号，及
(b)从来源于上述第1测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果和来源于上述第2测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果算出上述生物体粒子的测定结果的算出工序。


2.权利要求1所述的生物体粒子的测定方法，其中上述标记物质是荧光物质。


3.权利要求1或2所述的生物体粒子的测定方法，其中抑制：
上述检测体与存在于上述生物体粒子的目标分子中所含的目标部位结合，
上述抑制物质的至少一部分与上述目标部位结合，
上述检测体与上述目标部位结合。


4.权利要求3所述的生物体粒子的测定方法，其中上述目标分子是蛋白质或糖链。


5.权利要求3或4所述的生物体粒子的测定方法，其中上述检测体含与上述目标部位结合的抗体。


6.权利要求3～5之任一项所述的生物体粒子的测定方法，其中上述抑制物质含与上述目标部位结合的抗体。


7.权利要求5所述的生物体粒子的测定方法，其中上述检测体含与上述目标部位结合的凝集素。


8.权利要求1～7之任一项所述的生物体粒子的测定方法，其中在上述第1测定试样的调制中，将上述第1试样和上述抑制物质混合，上述抑制物质的至少一部分与上述生物体粒子结合之后，将上述检测体混合而调制上述第1测定试样。


9.权利要求1～7之任一项所述的生物体粒子的测定方法，其中在上述第1测定试样的调制中，以上述检测体和上述抑制物质竞争结合的方式将上述检测体、上述抑制物质和上述第1试样混合而调制上述第1测定试样。


10.权利要求1～9之任一项所述的生物体粒子的测定方法，其中在上述算出工序中，通过从来源于上述第2测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果减去来源于上述第1测定试样中所含的上述标记物质的信号的检测结果而算出上述生物体粒子的测定结果。


11.权利要求1～10之任一项所述的生物体粒子的测定方法，其中上述受试体选自：全血、血浆、血清、脑脊髓液、淋巴液、及细胞间质液。


12.权利要求1～11之任一项所述的生物体粒子的测定方法，其中上述生物体粒子的大小是30nm以上、并且1,000nm以下。


13.权利要求1～12之任一项所述的生物体粒子的测定方法，其中上述生物体粒子是选自下列的至少一种：外...

【专利技术属性】
技术研发人员：饭野琢也，吉川景子，松本和也，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP