快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法技术

本发明专利技术公开了一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法。包括以下步骤：S1采集有机污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液；S2土著微生物激活培养；S3土著微生物富集培养；S4投加菌液和无机营养剂至污染土壤。本发明专利技术利用特定配方的营养液富集培养土著微生物中的有机污染物降解菌，可原地异位培养后直接投加到污染土壤中，整个操作过程简单，周期短，能高效降低场地污染土壤中的有机污染物含量，并能减少化学氧化药剂使用量和避免由引入外源微生物带来的生态风险。

Rapid cultivation of indigenous microorganisms to remove soil organic pollutants

【技术实现步骤摘要】
快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法
本专利技术涉及环境微生物
，具体涉及一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法。
技术介绍
多环芳烃(PolycyclicAromaticHydrocarbons，PAHs)是分子中含有两个以上苯环的碳氢化合物，包括萘、蒽、菲、芘等200余种化合物，其中大多具有“三致效应”(致畸、致癌和致突变性)，是土壤环境风险管控的重要目标污染物。土壤中微生物资源丰富，能利用PAHs等有机污染物作为碳源或能源被微生物利用，将其转化为二氧化碳和水。相比其他修复技术，微生物修复技术具有低成本、高效和环境友好等特点。土壤环境中能够降解有机污染物的微生物菌群较少，工程实施中常通过外源添加微生物的手段增加有机污染物降解菌群。外源微生物需要与土著微生物进行竞争，使得添加的微生物在土壤环境中存在时间较短，同时引入外源微生物可能带来环境生态风险。快速富集土壤样品中的目标微生物菌群可有效提高污染土壤微生物修复的效率。目标微生物菌群的传统富集技术主要采用选择性培养基法，富集过程周期长，难以满足工期紧的需求。
技术实现思路
针对以上不足之处，本专利技术的目的在于提供一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，该方法可以在短时间内获得大量土著微生物，配施无机营养剂，能够实现土壤有机污染物去除效率的提高。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，包括以下步骤：S1采集有机污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液；S2将土壤悬液稀释后接种至第一营养液并培养1d～7d，得到第一培养液；S3将第一培养液接种至第二营养液后培养1d～3d，得到第二培养液；取部分第二培养液用于收集菌体，菌体回接至S2所述培养体系。S4将步骤S3所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，调节含水率，然后，孵育7d～30d。进一步地，所述的步骤S1具体为：取有机污染土样50g～500g，置于搅拌池中，所述缓冲液为450mL～4500mL，pH6.5，含磷酸二氢钾1g/L的无菌磷酸缓冲液，震荡时间为30min～60min，且每10min～15min以47kHz频率超声一次，每次20s～40s；进一步地，所述的步骤S2具体为：将步骤S1所述土壤悬液进行10倍梯度稀释，取稀释倍数为10或102的稀释液分别接种至第一营养液中，于温度为25℃～32℃、转速为120rpm～180rpm的摇床上培养1d～7d，即得到第一培养液。进一步地，所述第一营养液为1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硝酸钾、0.1g/L酵母提取物、0.1g/L～1g/L添加剂，pH6.5～pH7.5；进一步地，所述添加剂为苯甲酸、苯酚、对羟基苯甲酸、儿茶酚或者对香豆酸中的一种或几种；进一步地，所述的步骤S3具体为：将步骤S2所述第一培养液接种至第二营养液中，接种量为目标培养液体积1％～10％，于温度为25℃～32℃、发酵罐或转速为120rpm～180rpm的摇床上培养1d～2d，即得到第二培养液；进一步地，所述第二营养液为2.0g/L～10g/L玉米浆、0.1g/L～2g/L酵母提取物、1.0g/L～10g/L硫酸镁、1.0g/L～10g/L硝酸钾、1～5g/LNaCl，pH6.5～pH7.5；优选地，将所述收集的第二培养液菌体回接至S1所述培养体系，接种量为目标培养液体积的1‰～1％；进一步地，所述的步骤S4具体为：将步骤S3所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，调节含水率至25％～35％，25℃～32℃孵育7d～30d；所述无机营养剂为硝酸钾、尿素、氯化铵、磷酸二氢钾或磷酸氢二钾中的一种或几种；进一步地，所述投加无机营养剂对处理土壤干重的质量分数为0.5‰～2‰；进一步地，投加第二培养液对处理土壤的体积分数为1％～10％。有益效果：本专利技术利用特异营养物质和合适的培养条件快速富集土壤中的有机污染物降解菌群，并投加到有机污染土壤中，操作简单，周期短，不会因引入外源微生物带来生态风险且能够大大提高土壤有机污染物的去除效率。附图说明图1为本专利技术快速培养土著微生物去除土壤有机污染物的流程图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1S1采集污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液：取有机污染土样500g，置于搅拌池中，所述缓冲液为4500mL，pH6.5，含磷酸二氢钾1g/L的无菌磷酸缓冲液，震荡时间为45min，且每15min以47kHz频率超声一次，每次20s；S2土著微生物激活培养：将步骤S1所述土壤悬液进行10倍梯度稀释，取稀释倍数为10的稀释液分别接种至第一营养液中，其中，1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硝酸钾、0.1g/L酵母提取物、0.2g/L苯甲酸，pH6.5～pH7.5；将培养瓶于温度为30℃、转速为160rpm的摇床上培养2d，即得到第一培养液；S3土著微生物富集培养：将步骤S2所述第一培养液接种至第二营养液中，其中，5g/L玉米浆、0.5g/L酵母提取物、2.0g/L硫酸镁、5.0g/L硝酸钾、2g/LNaCl，pH6.5；接种量为目标培养液体积2％，于温度为30℃、发酵罐中培养1d～2d，即得到第二培养液；优选地，将所述收集的第二培养液菌体回接至S2所述培养体系，接种量为目标培养液体积的2‰；S4投加菌液和无机营养剂至污染土壤：将步骤S3所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，其中，无机营养剂为尿素，投加无机营养剂对处理土壤干重的质量分数为1％，投加第二培养液对处理土壤的体积分数为1％；调节含水率至25％，30℃孵育30d。与对照相比，土壤中二苯并[a,h]蒽去除效率提高31.5％～89.2％，菲去除效率提高45.6％～96.7％。实施例2S1采集污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液：取有机污染土样500g，置于搅拌池中，所述缓冲液为4500mL，pH6.5，含磷酸二氢钾1g/L的无菌磷酸缓冲液，震荡时间为45min，且每15min以47kHz频率超声一次，每次20s；S2土著微生物激活培养：将步骤S1所述土壤悬液进行10倍梯度稀释，取稀释倍数为10的稀释液分别接种至第一营养液中，其中，1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硝酸钾、0.1g/L酵母提取物、0.2g/L添加剂，pH6.5～pH7.5；其中，添加剂为苯甲酸、对羟基苯甲酸和对香豆酸，质量比为1：1：1；将培养瓶于温度为25℃、转速为160rpm的摇床上培养2d，即得到第一培养液；S3土著微生物富集培养：将步骤S2所述第一培养液接种至第二营养液中，其中，5g/L玉米浆、0.5g/L酵母提取物、2.0g/L硫酸镁、5.0g/L硝酸钾、2g/LNaCl，pH6.5；接种量为目标培养液体积2％，于温度为25℃、发酵罐中培养1d～2d，即得到第二培养液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1采集有机污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液；/nS2将土壤悬液稀释后接种至第一营养液并培养1d～7d，得到第一培养液；/nS3将第一培养液接种至第二营养液并培养1d～3d，得到第二培养液；取部分第二培养液用于收集菌体，菌体回接至S2所述培养体系。/nS4将步骤S3所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，调节含水率，然后，孵育7d～30d。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1采集有机污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液；
S2将土壤悬液稀释后接种至第一营养液并培养1d～7d，得到第一培养液；
S3将第一培养液接种至第二营养液并培养1d～3d，得到第二培养液；取部分第二培养液用于收集菌体，菌体回接至S2所述培养体系。
S4将步骤S3所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，调节含水率，然后，孵育7d～30d。


2.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，所述的步骤S1具体为：取有机污染土样50g～500g，置于搅拌池中；投加含磷酸二氢钾1g/L的无菌磷酸缓冲液为450mL～4500mL，pH6.5；震荡时间为30min～60min，且每10min～15min以47kHz频率超声一次，每次20s～40s。


3.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，所述第一营养液为1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硝酸钾、0.1g/L酵母提取物、0.1g/L～1g/L添加剂，pH6.5～pH7.5。


4.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，所述的步骤S2具体为：将所述土壤悬液进行10倍梯度稀释，取稀释倍数为10或102的稀释液分别接种至第一营养液中，在温度为25℃～32℃、转速为120rpm～180rpm的摇床上培养1d～7d，即得到第一培养液。


5.如权利要求1所述的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘金光，李明，程寒飞，王龙，朱巧红，冉景，卢慧中，
申请(专利权)人：中冶华天工程技术有限公司，中冶华天南京工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34