鉴别蜂蜜中是否掺有非奶粉类外源蛋白质的方法技术

本发明专利技术涉及分析检测领域，特别是涉及食品检测领域，更为具体的说是涉及掺假蜂蜜的鉴别方法，本发明专利技术中以液相色谱分析法为基础，在紫外检测波长210nm下，观察保留时间7.8±0.2min处是否具有吸收峰，如果有检出，则判定该蜂蜜样品中掺有非奶粉类外源蛋白质，能够有效鉴别出不法商贩的恶意造假行为，是一种可靠有效的非奶粉类外源蛋白质掺假的鉴别方法。

The method of distinguishing honey from non milk powder exogenous protein

【技术实现步骤摘要】
鉴别蜂蜜中是否掺有非奶粉类外源蛋白质的方法
本专利技术涉及分析检测领域，特别是涉及食品检测领域，更为具体的说是涉及掺假蜂蜜的鉴别方法。
技术介绍
蜂蜜是一种天然的、具有独特保健功效的营养品。随着国民生活品质的提升，对这种天然保健品的需求日益增长，蜂蜜行业也逐渐成为经济发展、对外贸易中不可或缺的重要组成部分。近些年来，我国的蜂蜜产业迅速发展，产量位居世界前位。但是少数不法商人唯利是图，在昂贵的纯正蜂蜜中掺入相对便宜的糖浆和蛋白质。导致蜂蜜掺假、造假事件时有发生，这种蜂蜜掺假的行为极大的冲击了蜂产品市场。不仅欺骗了广大消费者，同时对我国蜂蜜市场的健康发展构成了严重的负面影响，这也极大地影响了我国蜂产品行业的国际上声誉。蜂蜜掺假一直相关食品监管部分重点关心的问题。蜂蜜由于蜂种、蜜源、环境的不同，其所含成分也具有差异。但是通常来说，蜂蜜中葡萄糖和果糖的含量约占65～80％，蔗糖含量在7％左右，水分含量16～25％。另外，蜂蜜中还含有蛋白质、矿物质、有机酸等物质，同时也包括带有芳香气味的挥发性成分等。因此，目前主要的掺假手段是向蜂蜜中添加糖类及其产物，譬如麦芽糖浆和高果玉米糖浆等C4植物糖浆。GB/T18932.1-2002通过稳定碳同位素比值质谱法鉴别蜂蜜中碳-4植物糖的含量，该鉴别方法中要求待测定蜂蜜碳-4植物糖和蜂蜜中蛋白质的稳定碳同位素比值，纯正的蜂蜜含有约0.1％的蛋白质，无法提取出蛋白质的蜂蜜被认为有掺假嫌疑。糖浆不含蛋白质，因此不法商们在向蜂蜜中掺入糖浆的同时会添加外源性蛋白质，从而满足GB/T18932.1-2002的检测要求。目前，外源蛋白质的添加方式主要是通过在掺入糖浆的同时掺入适量奶粉，针对这类掺假手段，可以通过外源性酪蛋白的检测来鉴别。但是，目前市场上出现了另一类掺假蜂蜜，这些蜂蜜满足GB/T18932.1-2002中稳定碳同位素比值的要求，但是通过其他的光谱学方法等则明显显示其中混有糖浆类物质。各检测结果之间的矛盾说明造假手段已经升级，不法商人通过添加非奶粉类的外源蛋白质逃避现有的检测手段，从而使得掺假蜂蜜不易被检出。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，针对目前新出现的通过掺入非奶粉类的外源蛋白质的掺假蜂蜜，提供一种有效可行的鉴别方法。为了解决这一技术问题，本专利技术公开了一种鉴别蜂蜜中是否掺有非奶粉类外源蛋白质的方法，该方法是以液相色谱分析法为基础，在紫外检测波长210nm下，观察保留时间7.8±0.2min处是否具有吸收峰，如果有，则判定该蜂蜜样品中掺有非奶粉类外源蛋白质。其中液相色谱分析法的色谱条件为：色谱柱为KinetexC18柱(100mm×4.6mm，2.6μm),柱温为40℃；进样体积5μL，流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液，等度洗脱，流动相比例A:B＝30:70，流速为0.02mL·min-1，紫外检测器波长210nm。进一步，在本专利技术中还公开包括有样品前处理步骤，该步骤中将待检测蜂蜜在60℃的水浴条件下溶解于0.1ml/L的磷酸溶液与乙醇溶液所形成的混合溶液中，其中磷酸溶液与乙醇溶液的体积比为1:4。进一步地，是向待检测蜂蜜中分别加入体积比为1:4的0.1ml/L的磷酸溶液和乙醇溶液，然后在60℃的水浴中，涡旋、溶解。更进一步地，本专利技术还公开待检测进样样品的定容方法是，将经过预处理的蜂蜜转移至容量瓶中，并以流动相定容至刻度线。这里所说的流动相，就是指前述的分别由流动相A乙腈和流动相B0.1％磷酸水溶液按照体积比30:70混合而成的流动相溶液。定容后的蜂蜜样品经过0.45μm有机相及水相滤膜过滤转移至进样瓶中。本专利技术针对目前蜂蜜新型造假手段，通过不断的摸索和实验，寻找到一种可以鉴别蜂蜜中是否掺有非奶粉类外源蛋白质的方法，该方法检出限低，能够有效鉴别出不法商贩的恶意造假行为，同时样品前处理方法巧妙、简单、适合于推广。为保护广大消费者利益，规范我国蜂蜜行业，提升我国蜂蜜在国际社会的竞争力提供了有力技术支持。附图说明图1为纯正蜂蜜液相色谱-紫外检测图谱。图2为掺有非奶粉类外源蛋白质的掺假蜂蜜的液相色谱-紫外检测图谱。图3为实施例5中样品液相色谱图。具体实施方式为了更好的理解本专利技术，下面我们结合具体的实施例对本专利技术进行进一步的阐述。实施例1非奶粉类外源蛋白质特征检测峰的确定首先，收集不同地区、不同种类的纯正蜂蜜。纯正蜂蜜共161个，包括:洋槐蜜、油菜蜜、荆条蜜、椴树蜜、枣花蜜、葵花蜜、荞麦蜜、紫云英蜜、棉花蜜、荔枝蜜、龙眼蜜、枸杞蜜和百花蜜，蜂蜜的产地包括:新疆、四川、内蒙、湖北、辽宁、江苏、河南、河北、吉林、陕西、山东、甘肃等省份。这些样品能够涵盖目前常见的所有蜂蜜蜜种。将上述样品分别标记为纯正蜂蜜样本1、纯正蜂蜜样本2、纯正蜂蜜样本3、……纯正蜂蜜样本n。然后收集掺入非奶粉类的外源蛋白质的掺假蜂蜜。这些蜂蜜具有如下两个特点：第一，这些蜂蜜样本按照GB/T18932.1-2002中公开的方法，通过稳定碳同位素比值质谱法鉴别蜂蜜中碳-4植物糖的含量，满足碳-4植物糖和蜂蜜中蛋白质的稳定碳同位素比值；第二，这些蜂蜜样本通过其他检测手段判定，其中掺有糖浆，但采用传统的检测方法测定不含有外源蛋白质。。将这些掺假蜂蜜标记为掺假蜂蜜样本1、掺假蜂蜜样本2、掺假蜂蜜样本3、……掺假蜂蜜样本n。将各个蜂蜜样本按照如下方法进行预处理：称取2.0g左右样品于50mL离心管中，分别加入0.1mol/L磷酸溶液1mL，和4mL乙醇,60℃水浴10min，涡旋、溶解；然后转移至10mL容量瓶中，加流动相(乙腈：0.1％磷酸水溶液＝30:70(体积比))定容到刻度线处；经过0.45μm有机相及水相滤膜过滤至进样瓶中，待测。特别要说明的是，在这一预处理中有两个关键的技术点，第一个技术点在于采用60°的水浴进行溶解处理；第二个技术点在于采用流动相定容。经过实验表明60℃水浴回收率能够达到99.8％，相较于传统的技术所实现的70％回收率的技术效果，产生了质的改变。同时采用流动相定容，可以保证紫外图谱效果好，检出限低，提高检出精度。将处理好的待检测样品进行液相色谱分析。色谱条件：色谱柱为KinetexC18柱(100mm×4.6mm，2.6μm),柱温为40℃；进样体积5μL，流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液，等度洗脱，流动相比例A:B＝30:70，流速为0.2mL·min-1，紫外检测器波长210nm。将纯正蜂蜜样本1、纯正蜂蜜样本2、……纯正蜂蜜样本n的液相色谱分析图谱进行叠加，获得的图谱如图1所示。分别将掺假蜂蜜样本1、掺假蜂蜜样本2、……掺假蜂蜜样本n的液相色谱分析图谱叠加，获得图谱如图2所示。通过图2与图1中所示的图谱进行比对，我们发现：在纯正蜂蜜的谱图中均不含有保留时间7.8±0.2min处的吸收峰，而在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鉴别蜂蜜中是否掺有非奶粉类外源蛋白质的方法，其特征在于：该方法是以液相色谱分析法为基础，在紫外检测波长210nm下，观察保留时间7.8±0.2min处是否具有吸收峰，如果有，则判定该蜂蜜样品中掺有非奶粉类外源蛋白质。/n

【技术特征摘要】
20180724 CN 20181081897911.鉴别蜂蜜中是否掺有非奶粉类外源蛋白质的方法，其特征在于：该方法是以液相色谱分析法为基础，在紫外检测波长210nm下，观察保留时间7.8±0.2min处是否具有吸收峰，如果有，则判定该蜂蜜样品中掺有非奶粉类外源蛋白质。


2.根据权利要求1所述的鉴别蜂蜜中是否掺有非奶粉类外源蛋白质的方法，其特征在于：其中液相色谱分析法的色谱条件为：色谱柱为KinetexC18柱,流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液，等度洗脱，...

【专利技术属性】
技术研发人员：季美泉，吴斌，王艳，丁涛，费晓庆，张健，郭思言，李静静，姜珊，刘芸，陈磊，刘艳，张晓燕，柳菡，沈伟健，高玲，王茂华，唐茂芝，吴海文，
申请(专利权)人：江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，国家认证认可监督管理委员会认证认可技术研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32