一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法技术

本发明专利技术涉及一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法，其特征在于：所述方法是通过增加lncRNA‑23的表达来实现促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化，其中，所述lncRNA‑23的基因组碱基序列为：SEQ NO.1。本方法可以为肌肉发育分化的长非编码RNA研究提供启示，可以为进一步开展肌肉发育过程中关键lncRNA的作用机理研究打下良好的基础，对探索肌肉生长发育机制，改善牛肉的产量与品质提供启示。

A method of promoting myogenic differentiation of bovine skeletal muscle satellite cells

【技术实现步骤摘要】
一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法
本专利技术属于生物、细胞、组织工程技术
，尤其是一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法。
技术介绍
骨骼肌卫星细胞(skeletalmusclesatellitecell)是骨骼肌中具有分化增殖潜能的肌源性干细胞，通常以静息状态存在于肌纤维肌膜与基底膜之间，在一定的条件下可以被激活，发生增殖和成肌分化，形成骨骼肌细胞，肌卫星细胞在动物出生后肌肉的生长发育和再生过程中发挥着十分重要的作用。肌卫星细胞的体外成肌分化过程很好地模拟了体内的肌肉发育过程，是研究细胞分化和肌肉发育的良好细胞模型。肌卫星细胞的激活、增殖与成肌分化过程受多种因素的调控，了解骨骼肌卫星细胞的成肌分化调控模式，可以增加人为控制肌细胞形成的可能性。肌肉的分化和生长发育过程是内在遗传、表观遗传和外在的各种信号互作的结果，骨骼肌发育分化过程涉及多基因的表达、信号途径及网络式调控，过程极其复杂，其中，非编码RNA的调控作用受到越来越多的重视。已有研究表明长非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)在肌肉发育的过程中发挥了重要的调控作用。lncRNA是一类转录本长度超过200nt的RNA分子，它不编码蛋白，以RNA的形式在多种层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控基因的表达。1ncRNA起初被认为是基因组转录的“噪音”，是RNA聚合酶II转录的副产物，不具有生物学功能。然而，越来越多的证据表明lncRNAs生物学功能丰富，可以通过转录调控、转录后调控和表观遗传调控等多种方式调控靶基因的表达而广泛参与生物体的各项生理过程。骨骼肌卫星细胞经激活、增殖、分化并融合形成可收缩并跳动的肌管，这一过程对肌肉的生成至关重要。已有研究表明，在人和小鼠骨骼肌生长发育过程中，肌特异性lncRNAlinc-MD1可促进成肌细胞的分化，此外还有一些lncRNAMalat1、lncMD、lnc-mg等均可以通过影响相关基因的表达，从而促进成肌细胞的分化。虽然这其中已有部分的lncRNA的功能被研究，但研究多见于人或鼠。目前，在牛肌卫星细胞成肌分化中lncRNA的相关研究鲜见报道。通过检索，尚未发现与本专利技术专利申请相关的专利公开文献。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术环境胁迫问题的不足之处，提供一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法，该方法可以为肌肉发育分化的长非编码RNA研究提供启示，可以为进一步开展肌肉发育过程中关键lncRNA的作用机理研究打下良好的基础，对探索肌肉生长发育机制，改善牛肉的产量与品质提供启示。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法，其特征在于：所述方法是通过增加lncRNA-23的表达来实现促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化，其中，所述lncRNA-23的基因组碱基序列为：SEQNO.1。而且，具体步骤为：构建lncRNA-23的过表达载体pcDNA-lnc23，将pcDNA-lnc23转染至牛骨骼肌卫星细胞，增加lncRNA-23的表达水平，实现促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化。而且，所述增加lncRNA-23的表达的方法包括：采用过表达lncRNA-23表达的质粒、病毒载体或电转的方法。本专利技术取得的优点和积极效果为：1、本专利技术方法利用改变lncRNA表达对牛肌卫星细胞的成肌分化过程进行调控，可以为肌肉发育分化的长非编码RNA研究提供启示，可以为进一步开展肌肉发育过程中关键lncRNA的作用机理研究打下良好的基础，对探索肌肉生长发育机制，改善牛肉的产量与品质提供启示。2、本专利技术方法利用改变lncRNA表达对牛肌卫星细胞的成肌分化进行调控，lncRNA作为非编码RNA，其表达改变对细胞的其它生物学特性影响较小，有利于研究其它调控因子在肌卫星细胞增殖与分化过程中的功能和影响。3、利用本专利技术建立的通过改变lncRNA表达来促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程的方法，可以有效地调控肌肉发育分化过程，借助此方法可以为肌肉发育分化的lncRNA调控研究提供新的思路和方法。也可为肌肉相关疾病的研究及改善牛肉的产量和品质等方面提供新的思路和参考。4、鉴于目前lncRNA对牛骨骼肌卫星细胞是否具有一定的调节作用，以及具体的作用效果还不清楚，本专利技术构建lncRNA-23的过表达载体，然后采用脂质体试剂转染牛骨骼肌卫星细胞，过表达牛骨骼肌卫星细胞中lncRNA-23的表达水平，通过改变牛骨骼肌卫星细胞中lncRNA-23的表达，从而促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程。本专利技术的目的在于提供一种通过改变牛骨骼肌卫星细胞中lncRNA的表达，从而促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程的方法，借助此方法可以对探索肌肉发育分化的关键lncRNA的作用机理，改善牛肉的产量和品质提供新的思路和方法。附图说明图1为本专利技术中lncRNA-23在牛基因组中的位置信息图；图2为本专利技术中pcDNA-lnc23重组质粒图谱；图3为本专利技术中3、6、9月龄胎牛及成年牛不同组织中lncRNA-23的相对表达情况的定量PCR结果图，其中，A为3月龄胎牛不同组织中lncRNA-23的相对表达情况的定量PCR结果图，B为6月龄胎牛不同组织中lncRNA-23的相对表达情况的定量PCR结果图，C为9月龄胎牛不同组织中lncRNA-23的相对表达情况的定量PCR结果图，D为成年牛不同组织中lncRNA-23的相对表达情况的定量PCR结果图；图4为本专利技术中lncRNA-23在牛骨骼肌卫星细胞增殖期及分化1-3天不同时期的相对表达情况图；图5为本专利技术中过表达lncRNA-23后在牛骨骼肌卫星细胞中对lncRNA-23表达水平影响的定量PCR检测结果图；图6为本专利技术中过表达lncRNA-23对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化过程的影响结果图；图7为本专利技术中过表达lncRNA-23后细胞分化标志因子蛋白印迹结果图。具体实施方式下面详细叙述本专利技术的实施例，需要说明的是，本实施例是叙述性的，不是限定性的，不能以此限定本专利技术的保护范围。本专利技术中所使用的原料，如无特殊说明，均为常规的市售产品；本专利技术中所使用的方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法，其特征在于：所述方法是通过增加lncRNA-23的表达来实现促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化，其中，所述lncRNA-23的基因组碱基序列为：SEQNO.1。较优地，具体步骤为：构建lncRNA-23的过表达载体pcDNA-lnc23，将pcDNA-lnc23转染至牛骨骼肌卫星细胞，增加lncRNA-23的表达水平，实现促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化。较优地，所述增加lncRNA-23的表达的方法包括：采用过表达lncRNA-23表达的质粒、病毒载体或电转的方法。本专利技术的一种设计思路是：设计并构建lncRNA-23的过表达载体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法，其特征在于：所述方法是通过增加lncRNA-23的表达来实现促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化，其中，所述lncRNA-23的基因组碱基序列为：SEQ NO.1。/n

【技术特征摘要】
1.一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法，其特征在于：所述方法是通过增加lncRNA-23的表达来实现促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化，其中，所述lncRNA-23的基因组碱基序列为：SEQNO.1。


2.根据权利要求1所述的促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法，其特征在于：具体步骤为：
构建lncRNA-23的过表达...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭宏，张林林，郭益文，丁向彬，李新，陈明明，宋瑛燊，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：天津;12