一种用于防治植物病害的枯草芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体提供了一株新的枯草芽孢杆菌VB1700（

A Bacillus subtilis used to control plant diseases and its application

【技术实现步骤摘要】
一种用于防治植物病害的枯草芽孢杆菌及其应用
本专利技术涉及功能微生物筛选
，具体涉及一种用于防治植物病害的枯草芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
随着人们对无污染、无公害绿色食品呼声日益提高，生物防治已成为继农业、化学防治之后的又一重要防治方法，许多生物杀菌剂已相继问世，并广泛应用于生产，取得显著效果。生防菌的种类繁多，生产上广泛应用的有真菌、细菌、放线菌、病毒等。真菌主要有木霉菌、毛壳菌、酵母菌、淡紫拟青霉菌、厚壁孢子轮枝菌及菌根真菌等；细菌主要有芽孢杆菌、假单胞杆菌等促进植物生长菌(PGPR)、放射性土壤农杆菌和巴氏杆菌等；放线菌主要有链霉菌及其变种；病毒的弱毒株系；病原菌的无致病力突变菌株。生防菌的生防机制是多种多样的，如产生抗菌素、重寄生、溶菌作用、竞争作用和诱导抗性等。由于大多数据是在试验条件下获得的，而田间条件要复杂的多，所以实际上可能两种或三种机制同时起作用，也可能是在植物不同部位或不同发育时期某一机制在起主要作用。此外，生防机制可能还包括(1)在逆境中如干旱、养分的胁迫下，通过加强根系和植株的发育提高耐性；(2)可诱导植物对病菌的抗性；(3)增加土壤中营养成分的溶解性，并促进其吸收；(4)使病原菌的酶钝化。目前，生防菌在植物病害防治中存在以下问题：一是生防菌在田间自然条件下定殖能力差。大多数生防菌是在试验条件下筛选鉴定的，与田间自然条件有很大区别，这些生防菌在田间施用后往往因定殖能力弱，形不成足够的生物群体而降低防效。二是生防菌的抗药能力差。在试验条件下，有的生防菌生防效果不错，但在田间由于田间残留的农药或施用农药后，种群数量迅速下降。三是菌株稳定性问题。目前生防菌制剂多为活菌制剂，田间应用时常受到温度、湿度、土壤pH值等外界因素的影响,因此防治效果不稳定。因此，筛选具有稳定性好、抗药能力强等特征的新型生防菌株，具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株新的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，并提供了其在植物病害防治中的应用。所述枯草芽孢杆菌筛选自江苏抚州枯萎病高发病地块，对尖孢镰刀菌具有显著抑制作用，可有效防治常见作物病害，应用前景广泛。本专利技术一方面提供了一种枯草芽孢杆菌，命名为枯草芽孢杆菌VB1700(BacillussubtilisVB1700)，已于2019年6月6日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCCNO：M2019441。本专利技术一方面提供了所述枯草芽孢杆菌在植物病害防治中的应用。所述植物病害包括枯萎病、死棵病、烂脖子病、炭疽病、纹枯病、弯孢病、根腐病、白绢病、白粉病、疮痂病、烂果病、灰霉病、褐斑病和果腐病中的任意一种。本专利技术还提供了一种微生物制剂，包含上述枯草芽孢杆菌VB1700。所述微生物制剂还包含芽孢杆菌、假单胞菌、土壤杆菌、固氮菌、根瘤菌、青霉菌、曲霉菌、根霉菌、链霉菌中的任意一种或两种或多种的组合。所述微生物制剂中枯草芽孢杆菌VB1700的活菌量至少为108CFU/g。本专利技术还提供了上述微生物制剂在植物病害防治中的应用。本专利技术筛选到的枯草芽孢杆菌VB1700对尖孢镰刀菌具有较强的抑制作用，抑菌带宽度超过24mm。所述枯草芽孢杆菌可广泛应用于常见植物病害的防治，其中对西红柿枯萎病、甜瓜死棵病和姜烂脖子病的防治效率分别高达94.7％、88.8％和82.1％，取得了意料不到的技术效果。枯草芽孢杆菌VB1700在防治西红柿枯萎病和甜瓜死棵病的同时，还可以显著提高西红柿和甜瓜的产量和品质。与冲施化学药剂的阳性对照组相比，冲施枯草芽孢杆菌VB1700菌粉的处理组2西红柿的产量、VC含量和糖度分别提高15.1％、12.1％和7.8％。与空白对照组相比，处理组甜瓜的产量普遍提高了10.4％-20.1％，甜瓜中可溶性固形物含量提高了12.3％-24.4％，维生素C含量提高了10.6％-36.2％，取得了意料不到的技术效果。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌VB1700可单独作为防治西红柿枯萎病、甜瓜死棵病、姜烂脖子病等植物病害的生防菌剂等，广泛应用于农业生产领域，还可与其他芽孢杆菌、假单胞菌、土壤杆菌、固氮菌、根瘤菌、青霉菌、曲霉菌、根霉菌、链霉菌中的任意一种或多种进行组合，用于其他常见植物病害的防治，防治效率达到70％以上，效果显著，应该前景广阔。具体实施方式本专利技术实施例中选用的设备和试剂可以选自市售任意一种。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本专利技术技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本专利技术实施例的具体记载。对于本专利技术所涉及的培养基配方如下：PDA培养基：马铃薯洗净去皮，称取200g马铃薯切成小块，加蒸馏水煮烂(煮沸20-30min，能被玻璃棒戳破即可)，用八层纱布过滤，加热，加入20g葡萄糖，搅拌均匀，加入15-20g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，稍冷却后再补足水分至1000mL，分装试管或者锥形瓶，封口膜封口，115℃灭菌20min，冷却后贮存备用。PSA培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，蒸馏水定容至1000mL，115℃灭菌20min(配制方法同上，不需加入琼脂)；LB培养基：950ml去离子水中加入：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g，溶解，用5mol/LNaOH调pH至7.0用去离子水定容至1L，灭菌条件为121℃20min。下面结合具体实施例进一步阐述本专利技术。实施例1土壤中微生物的筛选1、土壤微生物的分离纯化：(1)土壤样品：采集自黑龙江省克山县马铃薯种植区疮痂病发病地块。(2)称取0.5g土壤样品溶于4.5ml无菌水中制成1：10的土壤溶液，然后从中吸取0.5ml土壤溶液置于4.5ml无菌水中，制成1：100的土壤溶液，以此方法类推，制备1：106-107的土壤稀释溶液。取3-4个适宜浓度的稀释液0.1ml均匀涂布于LB固体平板上；37℃培养2d后取出，挑取单个菌落继续分离纯化，直至每个平板上长出的菌落形态颜色一致，即为单一菌株。采用上述方法，申请人共筛选出18株菌，分别命名为HK1、HK2、HK3、……、HK18。2、生防菌初筛将上述分离纯化的18株菌分别接种于营养肉汤培养基中，37℃，220r/min培养14h，制备成供试菌液备用。将病原菌尖孢镰刀菌(山东省农科院植保所提供)在PDA培养基上培养5天后备用。在营养琼脂培养基的中央接种尖孢镰刀菌菌饼，在菌饼两侧距离培养皿中心2.5cm处分别接种上述供试菌液，然后30℃培养箱中培养72h后，取出测量抑菌带的宽度，以此来判断抑菌效果。具体结果见表1。表1不同菌株对尖孢镰刀菌的抑制效果菌株抑菌带宽度mmHK121.0±1.0HK223.0±1.5HK321.0±1.0<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏号为CCTCC NO：M2019441。/n

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏号为CCTCCNO：M2019441。


2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在植物病害防治中的应用。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的植物病害包括枯萎病、死棵病、烂脖子病、炭疽病、纹枯病、弯孢病、根腐病、白绢病、白粉病、疮痂病、烂果病、灰霉病、褐斑病和果腐病中的任意一种。


4.一种微生物制剂，其特征在于，所述的微生物制剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：周英俊，苑伟伟，凌红丽，吕宾，孙文丽，梁莉，
申请(专利权)人：山东康地恩生物科技有限公司，山东蔚蓝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37