用于解除肿瘤免疫抑制的组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开用于解除肿瘤免疫抑制的组合物及其应用。本发明专利技术的组合物包含下述(a)至(e)成分或它们的编码核酸：(a)IL‑15、其突变体或其功能片段；(b)IL‑15受体α、其突变体或其功能片段；(c)IL‑12、其突变体或其功能片段；(d)TGF‑β调节肽、其突变体或其功能片段和(e)PD1‑CD80融合蛋白、其突变体或其功能片段。本发明专利技术的组合物能够协同提高T淋巴细胞的免疫应答。

Composition for relieving tumor immunosuppression and its application

【技术实现步骤摘要】
用于解除肿瘤免疫抑制的组合物及其应用
本专利技术涉及免疫学以及医药领域，具体地涉及用于解除肿瘤免疫抑制的组合物及其应用。
技术介绍
传统上，肿瘤细胞免疫疗法主要为通过接种或过继细胞免疫疗法刺激免疫系统，从而引发免疫应答。这种方法是基于这样的假设：肿瘤细胞表达肿瘤特异性抗原，并被主要组织相容性复合体(MHC)呈递到肿瘤细胞表面，而抗肿瘤T细胞没有被充分激活。因此，为了解决这个问题，主要是尝试通过刺激关键的正的共免疫性和先天免疫途径，如CD28，CD40L(CD154)和各种TLR受体，或者抑制负的免疫抑制途径，如CTLA-4受体，PD-1受体而增加这些抗原的识别。现有研究表明，癌组织中CD80的表达量明显低于癌周组织和正常组织，通常表达于细胞浆区和细胞核内，因此难以诱导肿瘤特异性T细胞激活，这是肿瘤逃逸免疫监视的重要原因。树突状细胞(DC)是目前已知最强的抗原呈递细胞(APC)，表面表达丰富的CD80，能在体内外摄取肿瘤抗原，直接激活初始T淋巴细胞，促进T辅助细胞(Th)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的生成，从而在肿瘤免疫中发挥重要作用。大量研究发现，肿瘤组织及其区域淋巴结中浸润性树突状细胞(TIDC)的膜上的CD80表达明显受到抑制，使DC不能有效地诱导抗肿瘤免疫而引起局部免疫功能低下，从而导致肿瘤细胞逃逸。另外研究表明，肿瘤可以通过分泌转化生长因子-β(TGFβ)抑制机体的免疫功能，如：TGFβ通过阻断DC成熟，造成不成熟DC数量增多，进而可造成T细胞功能丧失的免疫抑制状态，这种无效的肿瘤特异性抗原呈递促进了肿瘤生长。近年来，DC肿瘤疫苗在肿瘤的预防和治疗中方面展现了较好的应用前景。DC是目前已知最强的APC，表面表达丰富的CD80，能在体内外摄取肿瘤抗原，直接激活初始T淋巴细胞，促进T辅助细胞(Th)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的生成，从而在肿瘤免疫中发挥重要作用。DC相关疫苗在前列腺癌中的研究较为深入。如Sipuleucel-T直接将前列腺癌酸性磷酸酶抗原转染DC激发机体产生特异性的抗肿瘤反应。IMPACT研究显示，尽管客观有效率评价显示治疗效果有限(<5％)，Sipuleucel-T组的中位生存时间(25.8个月)要高于对照组(21.7个月)4.1个月。2010年4月，美国FDA批准Sipuleucel-T用于治疗无症状或症状轻微的转移性去势治疗无效的难治性前列腺癌(castration-resistantprostatecancer，CRPC)。然而，Sipuleucel-T上市后，一直销量不佳，原制造商丹德里昂公司(DendreonCorporation)宣告破产。而且其他几个大型的基于DC细胞的肿瘤疫苗三期临床均失败告终。例如默克公司的Stimuvax(靶向MUC1，2013年更名为tecemotide)III期研究两度宣告失败，葛兰素史克公司的GSK1572932A(靶向MAGEA3)也止步于临床III期，这些数据表明，单独的DC疫苗的使用通常不能导致所期待的免疫治疗效果的改善，不能得到令人满意的临床效果。这可能是因为受各种免疫抑制因素的影响，导致DC疫苗没有诱导产生足够多的抗肿瘤的T细胞，进而导致临床的失败。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人在免疫调节剂研发领域进行了深入研究，基于高通量筛选技术发现，通过同时调节多个通路，并进一步使用TGF-β调节肽和PD1-CD80来增强信号通路阻断，可以发挥各组分的协同作用，解除T淋巴细胞的免疫抑制，大大提升抗原递呈细胞的活性。至少部分地基于上述发现完成了本专利技术。具体地，本专利技术包括以下内容。本专利技术的第一方面，提供一种用于解除肿瘤免疫抑制的组合物，该组合物包含下述(a)至(e)成分：(a)IL-15、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；(b)IL-15受体α、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；(c)IL-12、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；(d)TGF-β调节肽、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；和(e)PD1-CD80融合蛋白、其突变体或其功能片段，或者其编码核酸。在某些具体实施方案中，所述TGF-β调节肽的序列为下述(a’)至(c’)中的一种：(a’)SEQIDNo.6所示的氨基酸序列；(b’)与(a’)具有相同物种来源且同源性为95％以上的氨基酸序列；(c’)在(a’)的基础上经氨基酸突变得到且保留活性的序列。在某些具体实施方案中，所述组合物中(a)和(b)能够结合形成复合物，且所述组合物中包含有Fc结构域。在某些具体实施方案中，(a)成分包含SEQIDNo.1所示的序列，(b)成分包含SEQIDNo.3所示的序列，(c)成分包含SEQIDNo.4所示的序列，(e)成分包含SEQIDNo.8所示的序列。在某些具体实施方案中，编码所述(a)成分和(b)成分的核酸为同一核酸，且其具有SEQIDNo.2所示的序列，编码所述(c)成分的核酸具有SEQIDNo.5所示的序列，编码所述(d)成分的核酸具有SEQIDNo.7所示的序列，和编码所述(e)成分的核酸具有SEQIDNo.9所示的序列。本专利技术的第二方面，提供一种工程化的抗原递呈现细胞，其能够用于解除肿瘤免疫抑制，在工程化的免疫细胞内包含第一方面所述的组合物。在某些具体实施方案中，所述抗原递呈细胞进一步包括抗原或表达所述抗原的核酸。在某些具体实施方案中，抗原递呈细胞为树突状细胞。本专利技术的第三方面，提供工程化的抗原递呈细胞的制备方法，包括使含有第一方面所述的组合物包含于抗原递呈细胞，从而获得所述工程化的抗原递呈细胞的步骤。在某些具体实施方案中，工程化的抗原递呈细胞的制备方法包括：(1)构建能够产生(a)至(e)成分的核酸；(2)从静脉血中分离得到外周血单核细胞，并诱导分化得到抗原递呈细胞；和(3)将步骤(1)的核酸引入步骤(2)的抗原递呈细胞，并在适于所述核酸表达的条件下培养所述抗原递呈细胞。本专利技术通过利用IL15、IL15Rα和IL12调节T细胞活化和增殖的能力，促使DC细胞诱导产生的特异的细胞毒性T细胞持续扩增，产生更多的有抗肿瘤活性的淋巴细胞，提高治疗肿瘤，例如DC疫苗在治疗肿瘤的效果。更进一步地，本专利技术使用TGF-β调节肽，其与TGF-β的亲和力大于与TGFBR1或TGFBR2的亲和力，从而解除TGFβ对DC成熟的阻断，进而解除T细胞功能丧失的免疫抑制状态，并通过PD1-CD80蛋白阻断PD-L1/2与T细胞表面的PD-1结合，解除对T细胞的抑制，释放其杀伤肿瘤的功能。本专利技术的实验证实IL15、IL15Rα通路的激活和TGF-β通路的阻断以及与PD1-CD80的组合能够产生多通路协同作用，大大提高了各成分的效果。附图说明图1为使用编码本专利技术组合物各组分蛋白的mRNA以及抗原mRNA转染DC细胞后，在体外致敏T细胞的实验中CD8T细胞免疫应答结果。...

【技术保护点】
1.一种用于解除肿瘤免疫抑制的组合物，其特征在于，包含下述(a)至(e)成分或编码(a)至(e)成分的核酸：/n(a)IL-15、其突变体或其功能片段；/n(b)IL-15受体α、其突变体或其功能片段；/n(c)IL-12、其突变体或其功能片段；/n(d)TGF-β调节肽、其突变体或其功能片段，和/n(e)PD1-CD80融合蛋白、其突变体或其功能片段。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于解除肿瘤免疫抑制的组合物，其特征在于，包含下述(a)至(e)成分或编码(a)至(e)成分的核酸：
(a)IL-15、其突变体或其功能片段；
(b)IL-15受体α、其突变体或其功能片段；
(c)IL-12、其突变体或其功能片段；
(d)TGF-β调节肽、其突变体或其功能片段，和
(e)PD1-CD80融合蛋白、其突变体或其功能片段。


2.根据权利要求1所述的用于解除肿瘤免疫抑制的组合物，其特征在于，所述TGF-β调节肽的序列为下述(a’)至(c’)之一：
(a’)SEQIDNo.6所示的氨基酸序列；
(b’)与(a’)具有相同物种来源且同源性为95％以上的氨基酸序列；
(c’)在(a’)的基础上经氨基酸突变得到且保留活性的序列。


3.根据权利要求1所述的用于解除肿瘤免疫抑制的组合物，其特征在于，所述(a)和(b)能够结合形成复合物。


4.根据权利要求2所述的解除肿瘤免疫抑制的组合物，其特征在于，所述(a)成分包含SEQIDNo.1所示的序列，所述(b)成分包含SEQIDNo.3所示的序列，所述(c)成分包含SEQIDNo.4所示的序列，和所述(e)成分包含SEQIDNo.8所示的序列。


5.根据权利要求4所述的用于解除肿瘤免疫抑制的...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙圣楠，林鑫，文高柳，吴斐然，
申请(专利权)人：北京启辰生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11