一种磷脂快速检测方法技术

技术编号:23189977 阅读:36 留言:0更新日期:2020-01-24 15:56
本发明专利技术公开了一种磷脂快速检测方法,包括以下步骤,a、对水产品中的磷脂进行粗提取,得磷脂粗提液,即A品,b、合成TiO

A rapid method for phospholipid detection

【技术实现步骤摘要】
一种磷脂快速检测方法
本专利技术属于水产品的磷脂检测方法领域,尤其涉及一种水产品的磷脂快速检测方法。
技术介绍
通过对水产品脂质组学的研究,可深化对水产品及加工副产物的脂质营养学认识;并可建立脂质组学指纹图谱,为水产品鉴伪、溯源提供技术手段;还可以为预防、诊断、治疗水生动物疾病提供参考,为水环境调控与污染监测提供科学依据。磷脂是水产品脂质组学的主要分析对象之一,磷脂的种类众多,根据磷脂极性基团不同,可将磷脂分为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇等多个类别,而对水产品中各类别磷脂含量的检测是整个分析过程中必须可少的步骤。磷脂的整个检测过程包括对水产品中磷脂的提取和对提取物的检测。对提取物的检测可采用基质辅助激光解吸,从而得到检测图,检测图中每个波峰对应一种磷脂,根据每个波峰的面积计算出对应种类的磷脂浓度,可根据检测图进行后续的分析工作。对水产品中磷脂的提取可采用Bligh&Dyer法,Bligh&Dyer法虽然能提取到水产品中的大部分磷脂,但是提取速度慢、耗时长,导致整个检测过程的耗时长,检测效率低;而且在提取的同时容易混入杂质,会在基质辅助激光解吸时形成干扰,得到的检测图不准确,即检测结果不精准;并且由于在Bligh&Dyer法中大量使用了氯仿,氯仿遇光照会与空气中的氧作用,逐渐分解而生成剧毒的光气(碳酰氯)和氯化氢,容易对人体造成危害。因此,现有的磷脂检测方法存在检测效率低、检测结果不精准和容易对人体造成危害的缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于,提供一种磷脂快速检测方法。本专利技术具有检测效率高、检测结果精准和不容易对人体造成危害的优点。本专利技术的技术方案:一种磷脂快速检测方法,包括以下步骤,a、对水产品中的磷脂进行粗提取,得磷脂粗提液,即A品,b、合成TiO2微孔阵列芯片,得B品,c、将A品置于B品,静置,使磷脂与TiO2反应完全,得C品,d、在C品上滴加super-DHB和9-AA基质溶液的混合液,得D品,e、干燥D品,使D品上的磷脂结晶,得E品,f、E品采用基质辅助激光解吸检测,得检测图。前述的磷脂快速检测方法中,所述的步骤a,是采用Bligh&Dyer法对水产品中的磷脂进行粗提取,得磷脂粗提液,即A品。前述的磷脂快速检测方法中,所述的步骤a,是采用改进后的Bligh&Dyer法对水产品中的磷脂进行粗提取,得磷脂粗提液,即A品;所述改进后的Bligh&Dyer法,包括以下步骤,a1、取水产品的肌肉组织,得A1品,a2、将A1品至于氯仿和甲醇的混合液中振荡混匀,得A2品,a3、A2品超声冰浴提取5-15min,得A3品,a4,A3品中加入纯水,振荡混匀,得A4品,a5、用冷冻离心机对A4品进行离心,使A4品内溶液上下分层,得A5,a6、取出A5品中的下层溶液,得A6品,a7、在A6品中加入氯仿,得A7品,a8、A7品冷冻离心机进行离心,使A7品内溶液上下分层,得A8品,a9、取出A8品中的下层溶液,得A9品,a10、在A6品中加入氯仿溶液,得A10品,a11、A10品冷冻离心机进行离心,使A10品内溶液上下分层,得A11品,a12、取出A11品中的下层溶液,a13、将步骤a6中取出的下层溶液、步骤a9中取出的下层溶液和步骤a12中取出的下层溶液混合,得A13品,a14、用氮气吹干A13品,得A14品,a15、用甲醇水溶液溶解A14品,甲醇浓度90%,得磷脂粗提液,即A品。前述的磷脂快速检测方法中,所述步骤a1中,所述水产品的肌肉组织经过均质处理;所述的步骤a2中,按重量份计,是将1份的A1和1.75份混合液振荡混匀,混合液中氯仿和甲醇的比例1:2;所述的步骤a3中,A2品采用探头式超声冰浴提取10min,超声功率25kHz、60%变幅;所述的步骤a4中,所述纯水的加入量1.25份;所述的步骤a5中,所述冷冻离心机的转速8000rpm,离心时间15min;所述的步骤a6中,所述A5品中的下层溶液用移液枪取出;所述的步骤a7中,所述氯仿的加入量为2份;所述的步骤a8中,所述冷冻离心机的转速8000rpm,离心时间15min;所述的步骤a9中,所述A8品中的下层溶液用移液枪取出;所述的步骤a10中,所述氯仿的加入量2份;所述的步骤a11中,所述冷冻离心机的转速8000rpm,离心时间15min;所述的步骤a12中,所述A11品中的下层溶液用移液枪取出。前述的磷脂快速检测方法中,所述TiO2微孔阵列芯片的合成方法,包括以下步骤,b1、将镀金盖玻片浸没于5-15mM的MPA溶液中静置超过5h,得B1品,b2、用乙醇清洗B1品,得B2品,b3、用去离子水清洗B2品,得B3品,b4、用氮气吹干B3品,得B4品,b5、向B4品表面喷PAH溶液,PAH溶液干燥后,喷TALH溶液,TALH溶液干燥后,B4表面形成一个复层单元,得B5品,b6、在B5品表面形成再次形成复层单元,得B6品,b7、B6品用去离子水润洗,得B7品,b8、干燥B7品,得B8品,b9、B8品450-550℃下老化4-6h,得TiO2盖玻板,即B9品,b10、B9品浸没于5-15mM的OTS甲苯溶液,使其表面合成一层输水层,得B10品,b11、干燥B10品,得B11品,b12、B11品置于热蒸汽中熏蒸0.5-1.5min,得B12品,b13、在B12品表面盖上具有阵列微孔的模具,紫外光下照射0.8-1.2h,得B13品,b14、先后用乙醇和0.4-0.6mM的氢氧化钠溶液润洗B13品的阵列点,得B14品,b15、去离子水清洗B14品,得TiO2微孔阵列芯片的成品,即B品。前述的磷脂快速检测方法中,所述步骤b1中,所述MPA溶液为10mM;所述步骤b5中,所述PAH溶液1mg/mL、pH7.5,所述TALH溶液5wt%、pH7.5;所述步骤b6中,在B5品表面形成再次形成的复层单元数量为1-19个;所述步骤b9中,所述B8品是在马弗炉中老化,炉温500℃,老化时间4小时;所述步骤b10中,所述OTS甲苯溶液的浓度10mM;所述步骤b12中,所述B11品的熏蒸时间1min;所述步骤b13中,所述紫外光的照射时间1h,所述紫外光波长254nm;所述步骤b14中,所述氢氧化钠溶液的浓度0.5mM。前述的磷脂快速检测方法中,所述步骤c,是用移液枪分多次将A品转移到B品上,每次转移10μL,静置,使磷脂与TiO2反应完全,得C品。前述的磷脂快速检测方法中,所述步骤d,包括以下步骤,d1、用2%的TFA溶液对C品进行润洗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磷脂快速检测方法,其特征在于:包括以下步骤,/na、对水产品中的磷脂进行粗提取,得磷脂粗提液,即A品,/nb、合成TiO

【技术特征摘要】
1.一种磷脂快速检测方法,其特征在于:包括以下步骤,
a、对水产品中的磷脂进行粗提取,得磷脂粗提液,即A品,
b、合成TiO2微孔阵列芯片,得B品,
c、将A品置于B品,静置,使磷脂与TiO2反应完全,得C品,
d、在C品上滴加super-DHB和9-AA基质溶液的混合液,得D品,
e、干燥D品,使D品上的磷脂结晶,得E品,
f、E品采用基质辅助激光解吸检测,得检测图。


2.根据权利要求1所述的磷脂快速检测方法,其特征在于:所述的步骤a,是采用Bligh&Dyer法对水产品中的磷脂进行粗提取,得磷脂粗提液,即A品。


3.根据权利要求2所述的磷脂快速检测方法,其特征在于:所述的步骤a,是采用改进后的Bligh&Dyer法对水产品中的磷脂进行粗提取,得磷脂粗提液,即A品;所述改进后的Bligh&Dyer法,包括以下步骤,
a1、取水产品的肌肉组织,得A1品,
a2、将A1品至于氯仿和甲醇的混合液中振荡混匀,得A2品,
a3、A2品超声冰浴提取5-15min,得A3品,
a4,A3品中加入纯水,振荡混匀,得A4品,
a5、用冷冻离心机对A4品进行离心,使A4品内溶液上下分层,得A5,
a6、取出A5品中的下层溶液,得A6品,
a7、在A6品中加入氯仿,得A7品,
a8、A7品冷冻离心机进行离心,使A7品内溶液上下分层,得A8品,
a9、取出A8品中的下层溶液,得A9品,
a10、在A6品中加入氯仿溶液,得A10品,
a11、A10品冷冻离心机进行离心,使A10品内溶液上下分层,得A11品,
a12、取出A11品中的下层溶液,
a13、将步骤a6中取出的下层溶液、步骤a9中取出的下层溶液和步骤a12中取出的下层溶液混合,得A13品,
a14、用氮气吹干A13品,得A14品,
a15、用甲醇水溶液溶解A14品,甲醇浓度90%,得磷脂粗提液,即A品。


4.根据权利要求3所述的磷脂快速检测方法,其特征在于:所述步骤a1中,所述水产品的肌肉组织经过均质处理;
所述的步骤a2中,按重量份计,是将1份的A1和1.75份混合液振荡混匀,混合液中氯仿和甲醇的比例1:2;
所述的步骤a3中,A2品采用探头式超声冰浴提取10min,超声功率25kHz、60%变幅;
所述的步骤a4中,所述纯水的加入量1.25份;
所述的步骤a5中,所述冷冻离心机的转速8000rpm,离心时间15min;
所述的步骤a6中,所述A5品中的下层溶液用移液枪取出;
所述的步骤a7中,所述氯仿的加入量为2份;
所述的步骤a8中,所述冷冻离心机的转速8000rpm,离心时间15min;
所述的步骤a9中,所述A8品中的下层溶液用移液枪取出;
所述的步骤a10中,所述氯仿的加入量2份;
所述的步骤a11中,所述冷冻离心机的转速8000rpm,离心时间15min;
所述的步骤a12中,所述...

【专利技术属性】
技术研发人员:沈清
申请(专利权)人:浙江工商大学杭州邦沃森生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:浙江;33

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1