人单克隆抗IL-32抗体、多核苷酸、载体、宿主细胞、制备方法、组合物及应用技术

本发明专利技术提供了一种人单克隆抗IL‑32抗体、多核苷酸、载体、宿主细胞、制备方法、组合物及应用。所述人单克隆抗IL32抗体或其IL‑32结合片段相对于IL‑32α，优先结合IL‑32γ和/或不与IL‑32α结合，在其可变区中，所述人单克隆抗IL32抗体或其IL‑32结合片段包括以下氨基酸序列的可变重链和可变轻链的六个互补决定区：SEQ ID NO:18的31‑35位，SEQ ID NO:18的50‑66位，SEQ ID NO:18的99‑105位，SEQ ID NO:20的23‑33位，SEQ ID NO:20的49‑55位，和SEQ ID NO:20的88‑97位。

Human monoclonal anti-il-32 antibody, polynucleotide, carrier, host cell, preparation method, composition and Application

【技术实现步骤摘要】
人单克隆抗IL-32抗体、多核苷酸、载体、宿主细胞、制备方法、组合物及应用本申请是申请日为2014年07月03日专利技术名称为“人抗IL-32抗体”的申请号为2014800487311(国际申请号为PCT/EP2014/064163)的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术大体上涉及哺乳动物(优选人)源的结合白细胞介素-32(IL-32)的新型分子，特别是人单克隆抗体以及其片段、衍生物和变体。特别地，本专利技术涉及重组人患者来源的抗IL-32抗体和其IL-32结合片段。此外，描述了包括可用于治疗和诊断疾病(失调，紊乱，disorder)的这些结合分子、抗体以及其模拟物的组合物。此外，本专利技术涉及抗IL-32抗体和所提及的其等同物，用于免疫治疗以及用作自身免疫性疾病和自身炎症性疾病以及恶性肿瘤，如各种形式的关节炎、炎症性肠病(IBD)、重症肌无力(MG)、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、血管炎症与动脉粥样硬化、特应性皮炎和癌症的治疗干预中的靶。
技术介绍
免疫系统的不恰当反应可引起所涉及机体的应激症状(stressfulsymptom)。对通常对动物或人的健康没有显著影响的外来物质或物理状况的夸张免疫应答可能引起有下述症状的过敏，所述症状在从轻微反应(诸如皮肤刺激)到致命情形(诸如过敏性休克或各种血管炎)的范围内变动。对内源性抗原的免疫应答可引起自身免疫性疾病，诸如系统性红斑狼疮、特发性自身免疫性溶血性贫血、恶性贫血、I型糖尿病、疱性皮肤病(blisteringskindisease)和不同种类的关节炎。免疫反应以协调方式发生，涉及若干种细胞类型并且需要通过信号分子诸如细胞因子在所涉及的细胞类型之间进行通迅。可通过例如信号拦截或各受体的阻断来影响或抑制该通迅。细胞因子是纳摩尔级至皮摩尔级浓度的作为体液调节物的分泌的可溶性蛋白、肽和糖蛋白，由于它们在全身水平上作用，其表现类似于典型激素，并且它们在正常或病理状况下调节各个细胞和组织的功能活性。细胞因子与激素的不同之处在于：它们并不是由组织在专门腺体中的专门细胞生成的，即不存在针对这些介质(mediator)的单一器官或细胞源，因为它们实质上是由先天免疫和适应性免疫所涉及的所有细胞(诸如上皮细胞、巨噬细胞、树突细胞(DC)、自然杀伤(NK)细胞)，特别是由其中主要是辅助性T(Th)淋巴细胞的T细胞所表达的。根据细胞因子各自的功能，可将其分为三种功能类别：调节先天免疫反应、调节适应性免疫反应以及刺激造血。归因于所述三种类别内细胞因子的例如涉及细胞活化、增殖、分化、募集(recruitment)或其他生理反应(例如靶细胞分泌炎症特有的蛋白)的多效活性，已经发现由异常调节的细胞因子产生所介导的细胞信号传导的干扰是与缺陷免疫反应相关联的许多疾病(例如炎症和癌症)的原因。白细胞介素-32(IL-32，也称之为自然杀伤细胞蛋白4)是最近发现的在宿主防御和先天免疫中具有重要功能的细胞因子。人IL-32基因位于染色体16p13.3处。除了人和猿同源物，到目前为止已发现牛、猪和马同源物，然而迄今为止没有已知的小鼠同源物。已知由选择性剪接生成的6种IL-32同种型(Chen等人,VitamHorm74(2006),207-228)。最长同种型IL-32gamma(IL-32γ或IL-32g)包括234个aa(氨基酸)(UniProtKB/Swiss-Prot标识号：P24001-1)。第二种同种型，也称为IL-32beta(IL-32β或IL-32b；UniProtKB/Swiss-Prot标识号：P24001-2)具有188个aa。具有178个aa的第三种同种型也称为IL-32delta(IL-32δ或IL-32d；UniProtKB/Swiss-Prot标识号：P24001-3)。具有131个aa的IL-32alpha(IL-32α或IL-32a)是第四种同种型(UniProtKB/Swiss-Prot标识号：P24001-4)。同种型5(UniProtKB/Swiss-Prot标识号：P24001-5)和同种型6(UniProtKB/Swiss-Prot标识号:P24001-6)分别具有168个aa和179个aa。然而，还可存在其他同型，例如，Imaeda等人已经报导了具有112个aa的潜在新同型(MolMedRep.4(2011),483-487)。迄今为止，IL-32的受体是未知的。然而，存在一些数据，表明了可以通过蛋白酶3在细胞膜结合和分裂IL-32，暗示了此分子作为可能的受体，其中所产生的片段可具有生物活性并激活巨噬细胞炎性蛋白-2和IL-8(Dinarello和Kim,AnnRheumDis.65Suppl.3(2006)；iii61-64)。暗示IL-32为炎症通路的主要控制器，以自保持循环(self-perpetuatingloop)形式与TNFα具有显著协同效应，其中，IL-32促进TNFα表达，反之亦然，导致了促炎介质的扩增。已报道，诱导各种细胞因子(如TNFA/TNF-alpha、IL-1β、IL-6、IL-8和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2))以激活NF-κ-B和p38MAPK的典型细胞因子信号传导通路，且这是IL-18可诱导基因(Kim等人,Immunity22(2005),131-142；Netea等人,ProcNatlAcadSciUSA.105(2008),3515–3520；Netea等人,ProcNatlAcadSciUSA.102(2005),16309–16314；Joosten等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA103(2006),3298-3303)。最近，还展示了通过外周血单核细胞(PBMC)，IL-32增加了IFN-γ生成(Nold等人,JImmunol.181(2008),557-565；Netea等人,PLoSMed.3(2006),e277)。据报道，IL-32主要通过由IL-2或IFN-γ刺激的NK细胞、T淋巴细胞、上皮细胞和血单核细胞产生(Dahl等人,JImmunol.148(1992),597-603；Kim等人,(2005))。此外，据观察，IL-32在类风湿性关节炎(RA)滑膜组织活检中过表达，其中IL-32表达的水平与炎症的严重程度正相关(Alsaleh等人,ArthritisResTher.12(2010),R135；Cagnard等人,EurCytokineNetw.16(2005),289-292)。除了属于脊椎关节病科的各种形式的关节炎，如类风湿性关节炎(RA)或强直性脊柱炎(Ciccia等人,Rheumatology51(2012),1966-1972)之外，发现IL-32还与若干其他炎症性肠病(IBD)、重症肌无力(MG)、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、克罗恩氏病(Crohn'sdisease)、牛皮癣、特应性皮炎和癌症在功能上相关联(Alsaleh等人,(2010)；Breenan和Beech,Curr.Opin.Rheumatol.,19(2007),296-301本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人单克隆抗IL-32抗体或其IL-32结合片段，其中所述人单克隆抗IL32抗体或其IL-32结合片段相对于IL-32α，优先结合IL-32γ和/或不与IL-32α结合，并且在其可变区中，所述人单克隆抗IL32抗体或其IL-32结合片段包括以下氨基酸序列的可变重链(V

【技术特征摘要】
20130703 EP 13174937.61.一种人单克隆抗IL-32抗体或其IL-32结合片段，其中所述人单克隆抗IL32抗体或其IL-32结合片段相对于IL-32α，优先结合IL-32γ和/或不与IL-32α结合，并且在其可变区中，所述人单克隆抗IL32抗体或其IL-32结合片段包括以下氨基酸序列的可变重链(VH)和可变轻链(VL)的六个互补决定区(CDRs)：
VH-CDR1:SEQIDNO:18的31-35位，
VH-CDR2:SEQIDNO:18的50-66位，
VH-CDR3:SEQIDNO:18的99-105位，
VL-CDR1:SEQIDNO:20的23-33位，
VL-CDR2:SEQIDNO:20的49-55位，和
VL-CDR3:SEQIDNO:20的88-97位。


2.根据权利要求1所述的人单克隆抗IL-32抗体或其IL-32结合片段，其
(i)能够与重组人IL-32γ结合；和/或
(ii)能够中和IL-32γ。


3.根据权利要求1或2所述的人单克隆抗IL-32抗体或其IL-32结合片段，在它的可变区中包括选自SEQIDNO:18和20的VH和/或VL区的氨基酸序列。


4.根据权利要求1或2所述的人单克隆抗IL-32抗体或其IL-32结合片段，包括：CH和/或CL恒定区，所述CH和/或CL恒定区包含选自SEQIDNO：22和24的氨基酸序列。


5.根据权利要求1或2所述的人单克隆抗IL-32抗体或其IL-32结合片段，它选自由单链Fv片段(scFv)、F(ab')片段、F(ab)片段、F(ab')2片段和单域抗体片段组成的组。


6.根据权利要求1或2所述的人单克隆抗IL-32抗体或其IL-32结合片段，其：
(i)被可检测地标记，其中可检测标记物选自由酶、放射性同位素、荧光团、肽和重金属组成的组；或者
(ii)附着于药物。


7.根据权利要求1或2所述的人单克隆抗IL-32抗体或其IL-32结合片段，其中所述人单克隆抗IL-32抗体是IgG1或IgG3。


8.一种或多种多核苷酸，对根据权利要求1至5和7中任一项所述的人单克隆抗IL-32抗体或其IL-32结合片段编码。


9.一种或多种载体，包括根据权利要求8所述的多核苷酸。


10.一种宿主细胞，包括根据权利要求8所述的多核苷酸或根据权利要求9所述的载体，其中，所述多核苷酸是对所述可变区和恒定结构域的至少部分编码的cDNA。


11.一种用于制备抗IL-32抗体或其一种或多种免疫球蛋白链的方法，所述方法包括：
(a)培养根据权利要求10所述的宿主细胞；以及
(b)从所述宿主细胞的培养物中分离所述抗体或其一种或多种免疫球蛋白链。


12.一种抗IL-32抗体或其一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾德里安·海迪，凯·金萨德，凯·克朗，安娜莉莎·玛卡吉诺，石莫比·奥诺，帕特·彼得森，麦克·罗斯，马丁·沃克沃德，萨达·F·Y·哈克，
申请(专利权)人：因美诺克股份公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE