一种肾病早筛小型全自动分析仪配套的尿液检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种能够在同一小型全自动分析仪平台上配套定量测定尿液微量白蛋白、转铁蛋白、β2微球蛋白、α1微球蛋白、免疫球蛋白G和肌酐的肾病早筛小型全自动分析仪配套的尿液微量蛋白检测试剂盒，包括尿液微量蛋白检测试剂盒和肌酐测定试剂盒；所述尿液微量蛋白检测试剂盒包括尿液微量蛋白R1试剂和尿液微量蛋白R2试剂。本发明专利技术具有检测质量高、检测快速高效(15分钟出结果)、检测全面系统、使用方便价廉的优点，为肾脏病早期筛查检测，提供了一个有用平台，且可广泛应用于基层医院及大医院门诊检验科，并带来较大的社会效益和经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种肾病早筛小型全自动分析仪配套的尿液检测试剂盒
本专利技术涉及体外诊断技术免疫及生化检测领域，尤其是涉及一种肾病早筛小型全自动分析仪配套的尿液检测试剂盒。
技术介绍
肾脏病是常见病多发病。全世界超过5亿人患有不同的肾脏疾病。我国普通人群慢性肾脏病发病率为10％～13％，由此推测我国超过1亿人罹患该病。慢性肾脏病早期阶段，患者一般没有不适症状，往往被忽视。然而，看似健康的该病患者死于心脑血管病的风险是正常人的十倍以上。如发展到尿毒症，不仅有害健康，甚至会危及生命，还有两至三成患者首次到医院就诊时，肾功能损害已发展到不可逆阶段。国际肾脏病学会和国际肾脏病基金联合会呼吁，每个人都应关爱自己“神奇的肾脏”，及早发现肾脏损害并接受必要治疗，以免引发严重病症。鉴于当前全球慢性肾脏病的发病率不断上升，而公众对该病的防治知识普遍缺乏，经国际肾脏病学会和国际肾脏病基金联合会提议，决定从2006年起将每年3月份的第二个星期四确定为世界肾脏日，目的在于提高人们对慢性肾脏病以及相关心血管疾病和死亡率的认识，并重视在慢性肾脏病早期检测和预防方面全球的迫切需求。肾脏病早期筛查的手段和方法不多，B超及影像检查帮助不大，目前常用的方法是测定尿液中的微量蛋白。尿液微量蛋白测定可反映早期肾病、肾损伤情况。尿中微量蛋白升高多见于糖尿病、高血压及妊娠子痫等疾病并发肾病的前期。尿液微量蛋白初期检出增高阶段是肾病发生的早期信号和预兆，此时肾脏损害处在尚可逆转的时期，如及时治疗，可以终止或逆转肾病的发展进程。尿液微量蛋白联合检测可作为全身性或局部炎症反应的肾功能指标(如尿路感染等原因引起的肾脏早期病变，急性胰腺炎并发症的预测指标，服用对肾功能有影响药物的了解判断等)，便于早期观察肾功能情况并及早采取治疗措施。常用于肾病早筛的尿液微量蛋白测定项目有：白蛋白、转铁蛋白、β2微球蛋白、α1微球蛋白和免疫球蛋白G，还有为计算比值的生化项目尿液肌酐测定。白蛋白分子量约为6.7万。正常人尿液微量白蛋白(MA)含量甚微，当肾小球基膜的体积屏障受损时，尿液中MA明显升高。MA检测是临床反映肾小球和心血管系统改变的早期指征。转铁蛋白分子量约7.7万。尿液转铁蛋白(TRF)检测是反映肾小球基底膜电荷屏障损伤的可靠指标，TRF较MA更敏感。β2微球蛋白分子量约3.3万。尿液β2微球蛋白(β2MG)主要与肾小管功能有关。检测β2MG是辅助诊断近曲小管损伤敏感而特异的指标；尿蛋白/β2MG比值有助于鉴别肾小球或肾小管病变；用于鉴别上、下尿路感染，上尿路感染时β2MG明显增加，下尿路感染时β2MG基本正常；用于判断肾移植的排斥反应；糖尿病、高血压病人早期β2MG与肾功能损害程度显著相关；恶性肿瘤、自身免疫性疾病肾损害时，β2MG明显增高；重金属中毒肾损害的流行病调查，β2MG可作为筛选检测项目。α1微球蛋白分子量约1.18万。尿液α1微球蛋白(α1MG)测定是反映肾小管受损及其重吸收功能的一项灵敏指标，且优于β2MG。免疫球蛋白G(IgG)分子量约16万。IgG通常不易通过肾小球滤过膜，尿中排量极微。检测尿液IgG主要用于鉴别选择性与非选择性肾小球性蛋白尿，判断肾小球受损的严重程度和预后。肌酐分子量为113.1。正常人尿肌酐日排出量相当稳定，成年男性日排出量为1.0～1.8g，女性为0.7～1.0g，而且不受食物蛋白质含量和尿量的影响。因此，可用尿液微量蛋白与肌酐测定结果进行比值计算，能更为准确地反映肾功能状况。目前尿液微量蛋白定量测定方法有酶免法、免疫比浊法及胶体金免疫层析法等。酶免法定量测定CV较大，在医院检验科已不常用；免疫比浊法运用大型自动化仪器，普遍应用于大医院检验科批量检测尿液微量蛋白；胶体金免疫层析法常应用于基层医院，但定量检测质量较差；中国专利技术专利CN105911291A公开了一种尿液微量蛋白检测试剂盒及其检测方法，在液相芯片检测仪上同时联合检测尿液七种微量蛋白，提高了检测灵敏度和检测速度，适合大医院高通量检测尿液微量蛋白，但对基层医院及大医院门诊不适用。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供一种能够在同一小型全自动分析仪平台上进行尿液微量白蛋白、转铁蛋白、β2微球蛋白、α1微球蛋白、免疫球蛋白G和肌酐定量测定的肾病早筛小型全自动分析仪配套的尿液微量蛋白检测试剂盒，可广泛应用于基层医院及大医院门诊检验科，并带来较大的社会效益和经济效益。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的一种肾病早筛小型全自动分析仪配套的尿液检测试剂盒，包括尿液微量蛋白检测试剂盒和肌酐测定试剂盒；所述尿液微量蛋白检测试剂盒包括尿液微量蛋白R1试剂和尿液微量蛋白R2试剂；所述尿液微量蛋白R1试剂包括以下组分：聚乙二醇6000、PBS缓冲液、表面活性剂及防腐剂，以PBS缓冲液质量为基准计，尿液微量蛋白R1试剂中，聚乙二醇6000含量为1～5％，表面活性剂含量为0.02～0.1％，防腐剂含量为0.02～0.2％，；所述尿液微量蛋白R2试剂通过以下方法制得：(1)将羧基乳胶微球加入到MES缓冲液或PBS缓冲液中，加入EDC溶液和NHS溶液，搅拌均匀得羧基乳胶微球溶液；(2)在羧基乳胶微球溶液加入EDC溶液和NHS溶液，搅拌均匀后离心取离心固体物，将离心固体物用PBS缓冲液重悬，得羧基乳胶微球活化溶液；(3)在羧基乳胶微球活化溶液中加入尿液微量蛋白抗体，混合均匀后进行孵育反应，反应后于反应产物中加入牛血清转铁蛋白溶液，再进行孵育反应，离心取离心固体物，用PBS缓冲液重悬，再次离心取离心固体物，加入乳胶微球保存液，即得尿液微量蛋白R2试剂；所述肌酐试剂盒包括肌酐R1试剂和肌酐R2试剂；所述肌酐R1试剂包括以下组分：PBS缓冲液、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶、表面活性剂及防腐剂，以PBS缓冲液质量为基准计，肌酐R1试剂中，肌酸酶含量为0～0.05％，肌氨酸氧化酶含量为0～0.05％，过氧化氢酶含量为0～0.05％，抗坏血酸氧化酶含量为0～0.05％，表面活性剂含量为0.02～0.1％，防腐剂含量为0.02～0.2％；所述肌酐R2试剂包括以下组分：PBS缓冲液、肌酐酶、过氧化物酶、亚铁氰化钾、4-氨基安替比林、表面活性剂及防腐剂，以PBS缓冲液质量为基准计，肌酐R2试剂中，肌酐酶含量为0～0.05％，过氧化物酶含量为0～0.05％，亚铁氰化钾含量为0～0.05％，4-氨基安替比林含量为0～0.05％，表面活性剂含量为0.02～0.1％，防腐剂含量为0.02～0.2％。作为优选，尿液微量蛋白R1试剂中，所述PBS缓冲液pH为6.5～8.5，浓度为50mmol/mL，所述表面活性剂为吐温-20、曲拉通-100、聚醚中的至少一种，所述防腐剂为叠氮钠、对羟基苯甲酸、Proclin300中的至少一种。作为优选，步骤(1)中，所述MES缓冲液pH为5.0～6.0，浓度为50～200mmol/mL，所述PBS缓冲液pH为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肾病早筛小型全自动分析仪配套的尿液检测试剂盒，其特征在于，包括尿液微量蛋白检测试剂盒和肌酐测定试剂盒；/n所述尿液微量蛋白检测试剂盒包括尿液微量蛋白R1试剂和尿液微量蛋白R2试剂；/n所述尿液微量蛋白R1试剂包括以下组分：聚乙二醇6000、PBS缓冲液、表面活性剂及防腐剂，以PBS缓冲液质量为基准计，尿液微量蛋白R1试剂中，聚乙二醇6000含量为1～5％，表面活性剂含量为0.02～0.1％，防腐剂含量为0.02～0.2％，；所述尿液微量蛋白R2试剂通过以下方法制得：/n(1)将羧基乳胶微球加入到MES缓冲液或PBS缓冲液中，加入EDC溶液和NHS溶液，搅拌均匀得羧基乳胶微球溶液；/n(2)在羧基乳胶微球溶液加入EDC溶液和NHS溶液，搅拌均匀后离心取离心固体物，将离心固体物用PBS缓冲液重悬，得羧基乳胶微球活化溶液；/n(3)在羧基乳胶微球活化溶液中加入尿液微量蛋白抗体，混合均匀后进行孵育反应，反应后于反应产物中加入牛血清白蛋白溶液，再进行孵育反应，离心取离心固体物，用PBS缓冲液重悬，再次离心取离心固体物，加入乳胶微球保存液，即得尿液微量蛋白R2试剂；/n所述肌酐试剂盒包括肌酐R1试剂和肌酐R2试剂；/n所述肌酐R1试剂包括以下组分：PBS缓冲液、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶、表面活性剂及防腐剂，以PBS缓冲液质量为基准计，肌酐R1试剂中，肌酸酶含量为0～0.05％，肌氨酸氧化酶含量为0～0.05％，过氧化氢酶含量为0～0.05％，抗坏血酸氧化酶含量为0～0.05％，表面活性剂含量为0.02～0.1％，防腐剂含量为0.02～0.2％；/n所述肌酐R2试剂包括以下组分：PBS缓冲液、肌酐酶、过氧化物酶、亚铁氰化钾、4-氨基安替比林、表面活性剂及防腐剂，以PBS缓冲液质量为基准计，肌酐R2试剂中，肌酐酶含量为0～0.05％，过氧化物酶含量为0～0.05％，亚铁氰化钾含量为0～0.05％，4-氨基安替比林含量为0～0.05％，表面活性剂含量为0.02～0.1％，防腐剂含量为0.02～0.2％。/n...

【技术特征摘要】
1.一种肾病早筛小型全自动分析仪配套的尿液检测试剂盒，其特征在于，包括尿液微量蛋白检测试剂盒和肌酐测定试剂盒；
所述尿液微量蛋白检测试剂盒包括尿液微量蛋白R1试剂和尿液微量蛋白R2试剂；
所述尿液微量蛋白R1试剂包括以下组分：聚乙二醇6000、PBS缓冲液、表面活性剂及防腐剂，以PBS缓冲液质量为基准计，尿液微量蛋白R1试剂中，聚乙二醇6000含量为1～5％，表面活性剂含量为0.02～0.1％，防腐剂含量为0.02～0.2％，；所述尿液微量蛋白R2试剂通过以下方法制得：
(1)将羧基乳胶微球加入到MES缓冲液或PBS缓冲液中，加入EDC溶液和NHS溶液，搅拌均匀得羧基乳胶微球溶液；
(2)在羧基乳胶微球溶液加入EDC溶液和NHS溶液，搅拌均匀后离心取离心固体物，将离心固体物用PBS缓冲液重悬，得羧基乳胶微球活化溶液；
(3)在羧基乳胶微球活化溶液中加入尿液微量蛋白抗体，混合均匀后进行孵育反应，反应后于反应产物中加入牛血清白蛋白溶液，再进行孵育反应，离心取离心固体物，用PBS缓冲液重悬，再次离心取离心固体物，加入乳胶微球保存液，即得尿液微量蛋白R2试剂；
所述肌酐试剂盒包括肌酐R1试剂和肌酐R2试剂；
所述肌酐R1试剂包括以下组分：PBS缓冲液、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶、表面活性剂及防腐剂，以PBS缓冲液质量为基准计，肌酐R1试剂中，肌酸酶含量为0～0.05％，肌氨酸氧化酶含量为0～0.05％，过氧化氢酶含量为0～0.05％，抗坏血酸氧化酶含量为0～0.05％，表面活性剂含量为0.02～0.1％，防腐剂含量为0.02～0.2％；
所述肌酐R2试剂包括以下组分：PBS缓冲液、肌酐酶、过氧化物酶、亚铁氰化钾、4-氨基安替比林、表面活性剂及防腐剂，以PBS缓冲液质量为基准计，肌酐R2试剂中，肌酐酶含量为0～0.05％，过氧化物酶含量为0～0.05％，亚铁氰化钾含量为0～0.05％，4-氨基安替比林含量为0～0.05％，表面活性剂含量为0.02～0.1％，防腐剂含量为0.02～0.2％。


2.根据权利要求1所述的一种肾病早筛小型全自动分析仪配套的尿液检测试剂盒，其特征在于，尿液微量蛋白R1试剂中，所述PBS缓冲液pH为6.5～8.5，浓度为50mmol/mL，所述表面活性剂为吐温-20、曲拉通-100、聚醚中的至少一种，所述防腐剂为叠氮钠、对羟基苯甲酸、Proclin300中的至少一种。


3.根据权利要求1所述的一种肾病早筛小型全自动分析仪配套的尿液检测试剂盒，其特征在于，步骤(1)中，所述ME...

【专利技术属性】
技术研发人员：张乐之，吴敏华，余铭恩，王梦娜，梁春蕾，孙颖，
申请(专利权)人：杭州康知生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33