一种用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开一种用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，属于生物医学技术领域，血清蛋白标志物为TP53、GNAS、PBRM1、SRSF2、SMARCB1、GNA11、ACVR1B、PIK3CA或COPB1编码的蛋白中的任意一种或两种以上的联合。同时提供上述血清蛋白标志物的试剂盒及检测方法。本发明专利技术基于癌症驱动基因在肿瘤发生和发展中所起的作用，定制138个癌症驱动基因编码的人类蛋白质芯片，共包含180个人源重组蛋白质，先通过蛋白质芯片初步筛选出胃癌的早期检测血清标志物，再经过ELISA间接法实验进行验证，筛选出可用于胃癌早期筛查和诊断的一组胃癌联合检测血清标志物，其为TP53、SRSF2、SMARCB1和GNA11基因编码的蛋白的联合，其联合诊断胃癌ROC曲线下面积达0.950，95％CI为0.925‑0.976，保证特异度90.70％时，灵敏度为86.83％，一致率达到80.3％。

【技术实现步骤摘要】
一种用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物、试剂盒及检测方法
本专利技术属于生物医学

技术介绍
胃癌是一种常见的高致死性恶性肿瘤，其死亡率位居癌症中的第二，晚期胃癌的早期诊断率和5年生存率均<20％。当前胃癌中广泛运用的检测手段包括无创检查(如B超、CT等)和有创检查(胃镜、钡餐等)，但缺乏依从性和普及运用的可能。因此，需要新的生物标记物及时发现胃癌，尤其是血清分子标志物，让胃癌患者能够及时有效的早查、早诊、早治，是提高胃癌患者生存率、降低死亡率的关键所在。尽管目前有一些肿瘤标志物，如CA125(癌抗原125)、CA19-9(癌抗原19-9)、CEA(癌胚抗原)、CA724(癌抗原724)等可用于胃癌的辅助检测，但其敏感性和特异性均不高，因此，到目前为止尚没有理想的可供临床使用的胃癌早期筛查和诊断的标志物。近年来，在人类肿瘤学的研究领域内，许多研究已经发现癌症患者血清中含有一组独特的诱发自身抗体反应的细胞蛋白，被称为肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigen，TAA)，其诱导产生的抗体称为抗TAA-抗体(autoantibody)。这一概念的提出对胃癌早期诊断研究指引了一个新的方向。肿瘤相关抗原(tumor-associateantigens，TAAs)的自身抗体在正常人和非肿瘤患者血清中不存在或滴度很低，而且患者血清中自身抗体水平的升高往往早于肿瘤症状的出现。再者，抗-TAA抗体具有其它肿瘤标志物不具备的优势，一方面是它能够在血清中持续稳定存在，而其它的标志物，包括TAA本身，在其被肿瘤细胞释放后就被快速降解或者在其进入血液循环后的很短时间内就被机体清除。而且，检测自身抗体的方法和试剂的普及性也有助于研究癌症患者体内抗-TAA抗体的产生规律和功能。因此，检测抗-TAAs的自身抗体可以作为早期肿瘤辅助筛查和诊断的血清标志物。与其他潜在标志物相比，抗TAAS自身抗体在癌症患者血清样品中具有高度稳定性和持久性，并且可以在疾病症状开始之前被检测到。近年来，抗TAAS自身抗体作为早期肿瘤生物标志物，在检测各种类型的肿瘤或作为肿瘤预后指标方面得到了广泛的探索。总的来说，由于肿瘤的异源性，单抗TAA自身抗体的敏感性和特异性较低，对特定肿瘤的诊断缺乏鉴别能力。多年来的后续研究一直试图寻找诊断胃癌更加敏感特异的抗TAA自身抗体，优化诊断胃癌的组合。寻找有价值的TAA自身抗体，常用的方法有两种：一是重组cDNA表达文库血清学筛选(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibraries，SEREX)；另一种是蛋白质组学技术。与SEREX相比，蛋白组学技术能够对多个肿瘤血清进行筛选，并且能够筛选出具有翻译后修饰的TAA。在肿瘤的发生发展过程中，涉及到几十万个基因的突变，但仅有某些关键基因突变才可引起肿瘤的发生发展，这些关键基因被称为癌症驱动基因。研究认为不同类型的肿瘤发生时，一般都包含2-8个驱动基因，正是因为这些基因的突变才可导致肿瘤的优势生长，这些基因可以通过调节细胞周期、细胞生存和基因组维持3个细胞核心过程，被分为12个信号通路。目前在多种肿瘤的全基因组测序研究中共发现138个癌症驱动基因(参见VogelsteinB.Science.(2013)339(6127):1546-1558)，包括74个抑癌基因和64个癌症基因。这些基于癌症驱动基因编码的蛋白亦可诱发机体在其循环血液中产生相应的自身抗体，通过对癌症驱动基因编码蛋白及其诱发的血清中的自身抗体的研究可在一定程度上揭示肿瘤的发生发展或预后等。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，同时提供上述血清蛋白标志物的试剂盒及检测方法是本专利技术的另一专利技术目的。基于上述目的，本专利技术采取以下技术方案：一种用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，血清蛋白标志物为TP53、GNAS、PBRM1、SRSF2、SMARCB1、GNA11、ACVR1B、PIK3CA或COPB1编码的蛋白中的任意一种或两种以上的联合。所述血清蛋白标志物为TP53、SRSF2、SMARCB1或GNA11基因编码的蛋白中的任意一种或两种以上的联合。所述血清蛋白标志物为TP53、SRSF2、SMARCB1和GNA11基因编码的蛋白的联合。所述TP53基因编码的蛋白具有如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；所述SRSF2基因编码的蛋白具有如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列；所述GNA11基因编码的蛋白具有如SEQIDNO.5所示的氨基酸序列；所述SMARCB1基因编码的蛋白具有如SEQIDNO.10所示的氨基酸序列。一种试剂盒，包括所述的用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物。所述血清蛋白标志物被包被于固相载体上。所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺或纤维素。所述试剂盒还包括阳性对照血清、阴性对照血清、封闭液、血清稀释液、第二抗体、第二抗体稀释液、洗涤液、显色液或终止液中的任意一种或两种以上的组合。使用用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物的检测方法，包括以下步骤：1)对每种血清蛋白标志物分别进行包被、封闭后，清洗；2)再与稀释后的待测血清进行一抗孵育，清洗，再进行二抗孵育，清洗；3)显色系统显色后终止反应，测定吸光度值；4)以OD450-OD620为相对OD值，然后扣去空白对照，将血清蛋白标志物的吸光度值代入以下公式，计算预测概率P值，P＝1/(1+Exp(-(-7.118+9.545×ODTP53+6.183×ODSRSF2+8.237×ODSMARCB1+3.514×ODGNA11)))；式中ODTP53、ODSRSF2、ODSMARCB1、ODGNA11分别为每种血清蛋白标志物的相对OD值减去空白对照后的吸光度值；当P值≥0.5时，初步判定为胃癌样品；当P值＜0.5时，初步判定为正常样品。还包括步骤5)计算出每种血清蛋白标志物的阳性率、灵敏度特异度、约登指数、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比；步骤6)并联联合检测：利用logistics回归模型构建上述血清蛋白标志物的并联联合检测模型，计算联合诊断结果。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1)本专利技术基于癌症驱动基因在肿瘤发生和发展中所起的作用，定制138个癌症驱动基因编码的人类蛋白质芯片，共包含180个人源重组蛋白质，先通过蛋白质芯片初步筛选出胃癌的早期检测血清标志物，再经过ELISA间接法实验进行验证，筛选出可用于胃癌早期筛查和诊断的一组胃癌联合检测血清标志物，其为TP53、SRSF2、SMARCB1和GNA11基因编码的蛋白的联合，其联合诊断胃癌ROC曲线下面积达0.885，95％CI为0.852-0.919，保证特异度90.3％时，灵敏度为70.8％，一致率达到80.3％，可辅助胃癌的临床诊断，具有较好的参考价值。2)本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，其特征在于：血清蛋白标志物为TP53、GNAS、PBRM1、SRSF2、SMARCB1、GNA11、ACVR1B、PIK3CA或COPB1编码的蛋白中的任意一种或两种以上的联合。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，其特征在于：血清蛋白标志物为TP53、GNAS、PBRM1、SRSF2、SMARCB1、GNA11、ACVR1B、PIK3CA或COPB1编码的蛋白中的任意一种或两种以上的联合。


2.如权利要求1所述的用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，其特征在于：所述血清蛋白标志物为TP53、SRSF2、SMARCB1或GNA11基因编码的蛋白中的任意一种或两种以上的联合。


3.如权利要求2所述的用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，其特征在于：所述血清蛋白标志物为TP53、SRSF2、SMARCB1和GNA11基因编码的蛋白的联合。


4.如权利要求3所述的用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，其特征在于：所述TP53基因编码的蛋白具有如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；所述SRSF2基因编码的蛋白具有如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列；所述GNA11基因编码的蛋白具有如SEQIDNO.5所示的氨基酸序列；所述SMARCB1基因编码的蛋白具有如SEQIDNO.10所示的氨基酸序列。


5.一种试剂盒，其特征在于：包括如权利要求1-4任一所述的用于胃癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物。


6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述血清蛋白标志物被包被于固相载体上。


7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺或纤维素。


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【专利技术属性】
技术研发人员：张建营，王鹏，王晓，叶华，史健翔，代丽萍，杨倩，秦洁洁，王科妍，江秉华，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南;41