一种防止接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法技术

本发明专利技术公开了一种防止接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法，所述方法为利用其HA蛋白发生G186V突变，并且不发生HA蛋白L194P突变的重组人流感H3N2病毒株接种于鸡胚，制备疫苗。本发明专利技术首次提出在H3N2流感病毒疫苗设计中提前引入G186V的突变，能够预防破坏免疫原性的L194P突变的出现，G186V的突变能够让H3N2疫苗株在鸡蛋中进行复制，但是不影响其免疫原性。本发明专利技术针对无选择性的流感疫苗制备，提供了一种预防降低免疫原性的风险，并且应用到疫苗的设计策略中后，可以更好的生产出有效性更高的H3N2流感疫苗。同时，这也提供了一种免疫策略去规避不利于免疫原性的适应性突变的产生，为后续的流感疫苗研发提供有用的思路。

【技术实现步骤摘要】
一种防止接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法
本专利技术涉及生物
，具体地，涉及一种防止接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法。
技术介绍
季节性流感疫苗提供针对甲型流感病毒两种亚型H1N1和H3N2以及乙型流感病毒的保护。然而，季节性流感疫苗的有效性令人失望，尤其是对于H3N2病毒。它们的低有效性，除了可能的病毒预测错配，主要归因于基于鸡蛋的生产过程产生的适应性突变。流感病毒血凝素在受体结合位点与宿主唾液酸化多糖受体结合，从而启动病毒生命周期。病毒在鸡蛋中的生长发生在绒毛尿囊膜中，绒毛尿囊膜含有短的唾液酸化聚糖，并且主要是α2-3连接(鸟类型受体)。相比之下，人类纤毛气管上皮细胞(人类流感病毒的天然宿主细胞)中的唾液酸化多糖主要是α2-6连接(人类类型受体)。最近人类H3N2病毒的受体特异性主要针对长支链α2-6唾液酸化聚糖。因此，对于人类H3N2病毒来说，在鸡蛋中传代过程中进化透明质酸RBS(receptorbindingsite,受体结合位点)突变以适应绒毛尿囊膜中的鸟类型受体存在很大的选择压力。因为透明质酸RBS与几个主要抗原位点部分重叠，鸡蛋适应性突变可以显著改变甲型流感疫苗的抗原性，降低季节性流感疫苗的效力。虽然这些问题可以通过基于细胞或重组流感疫苗来解决，但由于生产成本低以及现有的年度生产基础设施，市场上现有的大多数流感疫苗仍然是基于鸡蛋的。虽然鸡蛋适应性突变对于鸡蛋型季节性流感疫苗的高产至关重要，但理想的鸡蛋型疫苗应该只携带那些对抗原性影响最小的鸡蛋适应性突变。在可预见的未来，基于鸡蛋的疫苗很可能仍然是针对季节性流感病毒的主要全球预防措施，因此在鸡蛋适应过程中表征流感病毒的进化非常重要。H3N2季节性流感疫苗在生产的过程中主要在鸡蛋中进行传代扩大，并应用到人群的流感免疫中。但是由于禽类和人类的唾液酸受体的不一样，导致了流感病毒适应性突变的出现，而且部分突变。H3N2流感疫苗在鸡蛋中接种的过程中，L194P是常见的适应性突变，尽管L194P突变可以让H3N2病毒在鸡蛋中很好的适应性复制，但这个突变会引起疫苗免疫原性的降低，产生的抗体不能够结合和中和鸡蛋接种前的原始病毒株，从而降低H3N2疫苗的有效性。如何解决鸡蛋适应性突变引起的疫苗有效性降低成为科学研究的热门。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种防止接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法本专利技术的第一个目的是提供一种重组人流感H3N2病毒株。本专利技术的第二个目的是提供所述重组人流感病H3N2毒株在制备流感病毒疫苗中的应用。本专利技术的第三个目的是提供人流感H3N2病毒HA蛋白的G186V突变在抑制HA蛋白的L194P突变中的应用，本专利技术的第四个目的是提供一种人流感H3N2病毒疫苗的制备方法本专利技术的第五个目的是提供HA蛋白发生G186V突变的重组人流感H3N2病毒株在制备流感病毒疫苗中的应用。本专利技术的第六个目的是提供一种接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：本专利技术首次发现H3N2HA上两种最常见的鸡蛋适应性突变G186V和L194P是不相容的，即虽然G186V和L194P每个单突变体都是可行的，HAG186V且L194P的双突变体是不可行的。在鸡蛋中传代G186V突变体可以防止L194P突变的出现，反之亦然。结构分析表明G186V和L194P突变具有相反的结构效应。透明质酸RBS的相对高度G186V增加，但L194P减少。G186V和L194P之间的这种结构变化导致受体结合模式的差异。当突变G186V和L194P都存在时，透明质酸RBS被破坏，这解释了G186V和L194P的不兼容性。另外，研究表明，G186V具有较强的抗原性效应，而L194P强烈影响，因此本专利技术为避免L194P的突变，提前在疫苗株中引入G186V的突变，从而在不影响其在鸡蛋中适应性接种的情况下，不影响其疫苗免疫原性。实验证明此突变可以在鸡蛋中进行传代，而且在小鼠动物实验中可以看到好的免疫原性。因此本专利技术要求保护以下内容：一种重组人流感H3N2病毒株，其HA蛋白发生G186V突变，并且不发生HA蛋白L194P突变。所述重组人流感病H3N2毒株在制备流感病毒疫苗中的应用。人流感H3N2病毒HA蛋白的G186V突变在抑制HA蛋白的L194P突变中的应用，一种人流感H3N2病毒疫苗的制备方法，利用权利要求1所述重组人流感H3N2病毒株。优选地，将权利要求1所述重新人流感H3N2病毒接种于鸡胚尿囊腔，经培养，收获鸡胚病毒尿囊液。HA蛋白发生G186V突变的重组人流感H3N2病毒株在制备流感病毒疫苗中的应用。一种接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法，利用权利要求1所述重组人流感H3N2病毒株接种于鸡胚，制备疫苗。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术首次提出在H3N2流感病毒疫苗设计中提前引入G186V的突变，能够预防破坏免疫原性的L194P突变的出现，G186V的突变能够让H3N2疫苗株在鸡蛋中进行复制，但是不影响其免疫原性。本专利技术针对无选择性的流感疫苗制备，提供了一种预防降低免疫原性的风险，并且应用到疫苗的设计策略中后，可以更好的生产出有效性更高的H3N2流感疫苗。同时，这也提供了一种免疫策略去规避不利于免疫原性的适应性突变的产生，为后续的流感疫苗研发提供有用的思路。附图说明图1为通过病毒拯救实验检测不同突变体的滴度。图2为Bris07HAG186V突变病毒(A)Bris07HAL194P突变病毒(B)在卵中传代五轮，通过高通量测序检测受体结合结构域(HA1残基117-265)中卵适应性突变的出现情况(仅绘制了达到最小10％出现频率的那些突变；对Bris07HAL194P突变病毒(D)进行三次独立的传代实验，通道0表示输入的病毒)。图3为以Cα190和OH98为HA蛋白的受体结合位点的口袋距离。图4为对于所有血清样品，与G186V的结合能力和几乎与WT一样强，而与L194P的结合能力始终弱于与WT或G186V的结合能力。图5为C05显示出对野毒株HA蛋白(Kd＝1.0±0.1nM)和G186V(Kd＝1.4±0.2nM)的高亲和力，但对L194P的结合非常弱。具体实施方式下面结合说明书附图及具体实施例对本专利技术作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例1流感病毒的拯救一、实验方法G186V和L194P是H3N2中最常观察到的鸡蛋适应性突变，对G186V、L194P、G186V且L194P的H3N2流感病毒进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组人流感H3N2病毒株，其特征在于，其HA蛋白发生G186V突变，并且不发生HA蛋白L194P突变。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组人流感H3N2病毒株，其特征在于，其HA蛋白发生G186V突变，并且不发生HA蛋白L194P突变。


2.权利要求1所述重组人流感病H3N2毒株在制备流感病毒疫苗中的应用。


3.人流感H3N2病毒HA蛋白的G186V突变在抑制HA蛋白的L194P突变中的应用。


4.一种人流感H3N2病毒疫苗的制备方法，其特征在于，利用权利要求1所述重组人流感H3N2病...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕惠彬，胡正希，莫家斌，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院广州呼吸中心，
类型：发明
国别省市：广东;44