一种脱硫弧菌培养的培养方法技术

本发明专利技术涉及一种脱硫弧菌培养的培养方法，首先将制作好的培养基放入培养皿中，将培养皿水平摆放在机械式自调平培养皿架上并进行调平，其次将不同浓度稀释液加入培养皿中，用平板划线法进行接种并加入培养胶，确保无氧环境。最后，为增大接种面积和接种数量，对培养皿进行倾斜培养，调节机械式自调平培养皿架重锤和支撑板之间的角度调节装置至合适角度并进行调平，防止培养皿滑落。本发明专利技术提供的方法非常简单方便，适用于使用培养胶进行密封培养脱硫弧菌，减少培养皿架不平或操作者操作对培养皿密封效果的影响，并且适用于脱硫弧菌的倾斜培养，增大培养面积和接种数量，实现培养皿倾斜培养过程中自动调平，保证培养皿倾斜培养实现密封效果。

【技术实现步骤摘要】
一种脱硫弧菌培养的培养方法
本专利技术属于脱硫弧菌培养方法，特别涉及一种脱硫弧菌培养的培养方法。
技术介绍
目前，国内外用于纯化脱硫弧菌培养的方法较多，但都在培养过程中需辅助设备及大量的试验耗材。一般情况下分为两类，第一类为在脱硫弧菌培养过程中，需密闭容器，且在容器中添加特殊药剂（吸氧剂）；第二种方法需要大型的装置或设备，在培养过程中不断通入CO2以隔绝外界环境中的氧气（如CO2培养箱），以上方法培养脱硫弧菌需一定的实验室条件，且培养过程中资源耗费较大。所有这些都是依据脱硫弧菌均需要一定的厌氧环境培养这一特点，设法创造一个适合其生长繁殖的条件而进行的。而采用培养液进行密封则存在密封效果差的问题。现有技术中的培养液密封培养脱硫弧菌的培养方法在培养过程中的不足之处在于，由于培养皿架地面不平或操作者摆放倾斜引起培养液倾斜，导致氧气渗入，引起密封失败，影响脱硫弧菌培养。同时，当操作者放置和拿去培养皿架其他培养皿时，产生振动影响此脱硫弧菌培养皿的密封效果，引起密封失效。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种脱硫弧菌培养的培养方法，适用于使用培养胶进行密封培养脱硫弧菌，减少培养皿架不平或操作者操作对培养皿密封效果的影响，实现培养皿放置在培养皿架过程中自动调平，保证培养液倾斜放置实现密封效果。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案为：一种脱硫弧菌培养的培养方法，其创新点在于：包括以下步骤：步骤1：选用机械式自调平培养皿架：所述机械式自调平培养皿架，包括支撑架、培养皿支架、培养皿支撑板和重锤；所述培养皿支架包括呈凸字型结构的支架主体，所述支架主体的两侧设有沿支架主体中心线长度方向延伸且与支撑架配合的通孔，在支架主体的通孔下端部还固定连接有调整螺母；所述支撑架穿过支架主体两侧的通孔并与调整螺母螺纹连接，调整螺母可沿支撑架上下移动推动支架主体上下移动，且所述调整螺母由紧定螺钉固定；所述支架主体的上端两侧对称设有由外向内的L型伸出凸台，所述支架主体的中部上下两端设有连通的上锥形孔和下锥形孔，且上锥形孔内设有与其配合的锥形橡皮垫；所述重锤设置在凸型支架主体的中部，所述重锤的杆体依次穿过下锥形孔、锥形橡皮垫和上锥形孔，该重锤的杆体直径大于锥形橡皮垫的内径，且所述重锤的杆体端部与培养皿支撑板之间设有角度调整装置；所述培养皿支撑板设置在支架主体的上端部与L型伸出凸台的上端部之间，所述培养皿支撑板下端设有承压泡沫板，上端设有边长大于培养皿直径的正方形围栏；所述培养皿支撑板的正方形围栏内放置防滑垫，所述防滑垫上放置培养皿，所述培养皿支撑板外侧设有裙边，裙边上下两侧分别设有上侧缓冲弹簧和下侧缓冲弹簧，所述上侧缓冲弹簧设置在培养皿支架的L型伸出凸台和培养皿支撑板上端之间，下侧缓冲弹簧设置在培养皿支架和与培养皿支撑板下端之间；其中，所述上侧缓冲弹簧包括上侧缓冲内弹簧和上侧缓冲外弹簧，下侧缓冲弹簧包括下侧缓冲内弹簧和下侧缓冲外弹簧；步骤2：培养基制作：取3-5g/L牛肉膏、8-10g/L蛋白胨、65-75g氯化钠、蒸馏水1000ml，加热熔化后，调节PH值至7.0-7.2，制作肉汤培养基，灭菌后并保温在45℃-60℃；将培养皿经过灭菌后加入肉汤培养基，肉汤培养基高度均匀覆盖培养皿底面即可，然后将装有肉汤培养基的培养皿放置在机械式自调平培养皿架上进行调平放置，并静置3-5min；步骤3：脱硫弧菌的分离与纯化：试验材料选自污水处理场，将污水分别稀释至、、浓度的溶液，用5ml移液管分别从不同浓度稀释液中吸取0.2-0.4ml菌液放入步骤2静置后的培养皿中，并将培养皿取出摇晃使菌液将培养皿涂布均匀；步骤4：脱硫弧菌的接种及接种面的密封：首先，在步骤3处理后的培养皿中采用平板划线法对脱硫弧菌进行接种；其次，在脱硫弧菌上缓慢导入培养胶进行密封，确保无氧环境，盖上培养皿盖；步骤5：脱硫弧菌培养皿在培养皿架上的倾斜培养：首先，将步骤4密封的培养皿缓慢放入机械式自调平培养皿架，然后旋转机械式自调平培养皿架的重锤与培养皿支撑板之间的角度调整装置，使重锤与支撑板之间呈5°-15°，确保培养基不会洒出，最后机械式自调平培养皿架利用重锤的指向作用进行倾斜调平，维持培养所需的倾斜角度；步骤6：脱硫弧菌培养条件设置：采用继代保存方法，数周做一次继代培养；新分离的菌种，每3-4星期传代一次，被保存的菌种，放在室温暗处。进一步地，所述机械式自调平培养皿架的调整倾角范围为0-60°。进一步地，所述步骤1中角度调整装置包括固定螺杆和角度调整螺母，所述固定螺杆的一端与连接板固定，且连接板与培养皿支撑板垂直固定连接，所述固定螺杆的另一端穿过重锤杆体上的长腰孔，且角度调整螺母分别安装在重锤杆体的两侧。进一步地，所述步骤2中将装有肉汤培养基的培养皿放置在机械式自调平培养皿架上进行调平放置，具体为：当培养皿偏离至培养皿架对应位置中心的右侧时，调平过程为：Step1：此时培养皿关于锥形橡皮垫的转动力矩大于重锤锤头，引起培养皿支撑板和重锤整体绕锥形橡皮垫顺时针旋转，首先压缩上侧缓冲弹簧并拉伸下侧缓冲弹簧，同时压缩锥形橡皮垫和承压泡沫板右侧，上侧缓冲内弹簧压缩逐渐增大，一旦倾斜角度或载重较大使得上侧缓冲内弹簧压缩量超过上侧缓冲内弹簧和上侧缓冲外弹簧的高度差时，上侧缓冲外弹簧进一步压缩；Step2：此时上侧缓冲内弹簧向上拉伸培养皿支撑板，下侧缓冲外弹簧向上推动培养皿支撑板，培养皿支撑板和重锤整体逆时针转矩逐渐增大；当培养皿支撑板和重锤整体关于锥形橡皮垫的转动力矩等于培养皿时，培养皿支撑板和重锤整体旋转到左侧最大高度；Step3：此后培养皿支撑板和重锤整体关于锥形橡皮垫的转动力矩大于培养皿，引起培养皿支撑板和重锤整体绕锥形橡皮垫逆时针旋转，当重锤绕锥形橡皮垫逆时针旋转超过中心位置时，首先拉伸上侧缓冲弹簧并压缩下侧缓冲弹簧，同时压缩锥形橡皮垫和承压泡沫板左侧，下侧缓冲内弹簧压缩逐渐增大，一旦倾斜角度或载重较大使得下侧缓冲内弹簧压缩量超过下侧缓冲内弹簧和下侧缓冲外弹簧的高度差时，下侧缓冲外弹簧进一步压缩；Step4：此时下侧缓冲内弹簧向下拉伸培养皿支撑板，上侧缓冲外弹簧向下推动培养皿支撑板，培养皿支撑板和重锤整体顺时针转矩逐渐增大，此时培养皿支撑板右侧高度大于左侧高度，培养皿在重力的作用下向培养皿架对应位置的中心处移动；当培养皿支撑板和重锤整体关于锥形橡皮垫的转动力矩等于培养皿时，培养皿支撑板和重整体旋转到右侧最大高度；Step5：重复step1-step4，直到培养皿到达培养皿架对应位置的中心时，培养皿和重锤锤头关于锥形橡皮垫的转动力矩均为0，完成调平过程；当培养皿偏离至培养皿架对应位置中心的左侧时，调平过程与培养皿偏离至培养皿架对应位置中心的右侧时的调平过程一致，调平方向相反；所述步骤5中机械式自调平培养皿架利用重锤的指向作用进行倾斜调平与步骤2调平放置过程一致，保证培养皿倾斜放置在机械式自调平本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脱硫弧菌培养的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤1：选用机械式自调平培养皿架：/n所述机械式自调平培养皿架，包括支撑架、培养皿支架、培养皿支撑板和重锤；/n所述培养皿支架包括呈凸字型结构的支架主体，所述支架主体的两侧设有沿支架主体中心线长度方向延伸且与支撑架配合的通孔，在支架主体的通孔下端部还固定连接有调整螺母；所述支撑架穿过支架主体两侧的通孔并与调整螺母螺纹连接，调整螺母可沿支撑架上下移动推动支架主体上下移动，且所述调整螺母由紧定螺钉固定；/n所述支架主体的上端两侧对称设有由外向内的L型伸出凸台，所述支架主体的中部上下两端设有连通的上锥形孔和下锥形孔，且上锥形孔内设有与其配合的锥形橡皮垫；所述重锤设置在凸型支架主体的中部，所述重锤的杆体依次穿过下锥形孔、锥形橡皮垫和上锥形孔，该重锤的杆体直径大于锥形橡皮垫的内径，且所述重锤的杆体端部与培养皿支撑板之间设有角度调整装置；/n所述培养皿支撑板设置在支架主体的上端部与L型伸出凸台的上端部之间，所述培养皿支撑板下端设有承压泡沫板，上端设有边长大于培养皿直径的正方形围栏；所述培养皿支撑板的正方形围栏内放置防滑垫，所述防滑垫上放置培养皿，所述培养皿支撑板外侧设有裙边，裙边上下两侧分别设有上侧缓冲弹簧和下侧缓冲弹簧，所述上侧缓冲弹簧设置在培养皿支架的L型伸出凸台和培养皿支撑板上端之间，下侧缓冲弹簧设置在培养皿支架和与培养皿支撑板下端之间；其中，所述上侧缓冲弹簧包括上侧缓冲内弹簧和上侧缓冲外弹簧，下侧缓冲弹簧包括下侧缓冲内弹簧和下侧缓冲外弹簧；/n步骤2：培养基制作：/n取3-5g/L牛肉膏、8-10g/L蛋白胨、65-75g氯化钠、蒸馏水1000ml，加热熔化后，调节PH值至7.0-7.2，制作肉汤培养基，灭菌后并保温在45℃-60℃；将培养皿经过灭菌后加入肉汤培养基，肉汤培养基高度均匀覆盖培养皿底面即可，然后将装有肉汤培养基的培养皿放置在机械式自调平培养皿架上进行调平放置，并静置3-5min；/n步骤3：脱硫弧菌的分离与纯化：/n试验材料选自污水处理场，将污水分别稀释至、、浓度的溶液，用5ml移液管分别从不同浓度稀释液中吸取0.2-0.4ml菌液放入步骤2静置后的培养皿中，并将培养皿取出摇晃使菌液将培养皿涂布均匀；/n步骤4：脱硫弧菌的接种及接种面的密封：/n首先，在步骤3处理后的培养皿中采用平板划线法对脱硫弧菌进行接种；其次，在脱硫弧菌上缓慢导入培养胶进行密封，确保无氧环境，盖上培养皿盖；/n步骤5：脱硫弧菌培养皿在培养皿架上的倾斜培养：/n首先，将步骤4密封的培养皿缓慢放入机械式自调平培养皿架，然后旋转机械式自调平培养皿架的重锤与培养皿支撑板之间的角度调整装置，使重锤与支撑板之间呈5°-15°，确保培养基不会洒出，最后机械式自调平培养皿架利用重锤的指向作用进行倾斜调平，维持培养所需的倾斜角度；/n步骤6：脱硫弧菌培养条件设置：/n采用继代保存方法，数周做一次继代培养；新分离的菌种，每3-4星期传代一次，被保存的菌种，放在室温暗处。/n...

【技术特征摘要】
1.一种脱硫弧菌培养的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1：选用机械式自调平培养皿架：
所述机械式自调平培养皿架，包括支撑架、培养皿支架、培养皿支撑板和重锤；
所述培养皿支架包括呈凸字型结构的支架主体，所述支架主体的两侧设有沿支架主体中心线长度方向延伸且与支撑架配合的通孔，在支架主体的通孔下端部还固定连接有调整螺母；所述支撑架穿过支架主体两侧的通孔并与调整螺母螺纹连接，调整螺母可沿支撑架上下移动推动支架主体上下移动，且所述调整螺母由紧定螺钉固定；
所述支架主体的上端两侧对称设有由外向内的L型伸出凸台，所述支架主体的中部上下两端设有连通的上锥形孔和下锥形孔，且上锥形孔内设有与其配合的锥形橡皮垫；所述重锤设置在凸型支架主体的中部，所述重锤的杆体依次穿过下锥形孔、锥形橡皮垫和上锥形孔，该重锤的杆体直径大于锥形橡皮垫的内径，且所述重锤的杆体端部与培养皿支撑板之间设有角度调整装置；
所述培养皿支撑板设置在支架主体的上端部与L型伸出凸台的上端部之间，所述培养皿支撑板下端设有承压泡沫板，上端设有边长大于培养皿直径的正方形围栏；所述培养皿支撑板的正方形围栏内放置防滑垫，所述防滑垫上放置培养皿，所述培养皿支撑板外侧设有裙边，裙边上下两侧分别设有上侧缓冲弹簧和下侧缓冲弹簧，所述上侧缓冲弹簧设置在培养皿支架的L型伸出凸台和培养皿支撑板上端之间，下侧缓冲弹簧设置在培养皿支架和与培养皿支撑板下端之间；其中，所述上侧缓冲弹簧包括上侧缓冲内弹簧和上侧缓冲外弹簧，下侧缓冲弹簧包括下侧缓冲内弹簧和下侧缓冲外弹簧；
步骤2：培养基制作：
取3-5g/L牛肉膏、8-10g/L蛋白胨、65-75g氯化钠、蒸馏水1000ml，加热熔化后，调节PH值至7.0-7.2，制作肉汤培养基，灭菌后并保温在45℃-60℃；将培养皿经过灭菌后加入肉汤培养基，肉汤培养基高度均匀覆盖培养皿底面即可，然后将装有肉汤培养基的培养皿放置在机械式自调平培养皿架上进行调平放置，并静置3-5min；
步骤3：脱硫弧菌的分离与纯化：
试验材料选自污水处理场，将污水分别稀释至、、浓度的溶液，用5ml移液管分别从不同浓度稀释液中吸取0.2-0.4ml菌液放入步骤2静置后的培养皿中，并将培养皿取出摇晃使菌液将培养皿涂布均匀；
步骤4：脱硫弧菌的接种及接种面的密封：
首先，在步骤3处理后的培养皿中采用平板划线法对脱硫弧菌进行接种；其次，在脱硫弧菌上缓慢导入培养胶进行密封，确保无氧环境，盖上培养皿盖；
步骤5：脱硫弧菌培养皿在培养皿架上的倾斜培养：
首先，将步骤4密封的培养皿缓慢放入机械式自调平培养皿架，然后旋转机械式自调平培养皿架的重锤与培养皿支撑板之间的角度调整装置，使重锤与支撑板之间呈5°-15°，确保培养基不会洒出，最后机械式自调平培养皿架利用重锤的指向作用进行倾斜调平，维持培养所需的倾斜角度；
步骤6：脱硫弧菌培养条件设置：
采用继代保存方法，数周做一次继代培养；新分离的菌种，每3-4星期传代一次，被保存...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪红军，王凯旋，吕帅帅，汪兴兴，张加俏，李志扬，黄明宇，朱昱，张福豹，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32