T细胞培养基及培养方法技术

本发明专利技术提供了用于培养T细胞的添加剂，其包括白介素‑2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子‑α和趋化因子配体5以及任选的特异性培养成分。另外，本发明专利技术还提供了包含该添加剂的T细胞培养基及培养T细胞的方法，可以提高T细胞的增殖率，同时可以提高具有增殖活性T细胞以及免疫功能活化T细胞的比例并减少T细胞发生细胞凋亡的状况。

T cell culture medium and method

【技术实现步骤摘要】
T细胞培养基及培养方法
本专利技术属于细胞培养领域，具体而言，本专利技术涉及一种T细胞培养基及培养方法，其能提高T细胞的增殖率，同时可以提高具有增殖活性的T细胞以及免疫功能活化的T细胞的比例并减少T细胞发生细胞凋亡的状况，并且其只需稍加改变即可灵活地应对不同T细胞的培养。
技术介绍
T细胞为淋巴细胞的一种，其来自于人体骨髓的造血干细胞（Hematopoieticstemcells,HSC），T细胞由胸腺迁移到胸腺内而分化成熟，T细胞在胸腺内分化成熟后进一步移居到淋巴组织中。T细胞还可进一步分为毒杀型T细胞（CytotoxicTcell）及辅助型T细胞（HelperTcell）、调节型T细胞（RegulatoryTcell）以及记忆型T细胞（MemoryTcell），各类T细胞皆在人体免疫反应中扮演重要角色。因此，近年来T细胞常被用于进行有关于免疫系统的实验研究或是相关范畴的应用，然而，当要以T细胞进行实验研究或是将T细胞应用于其他范畴时，都需要增殖出足够的T细胞。中国专利申请CN102168067A公开了一种调节性T细胞的诱导培养方法，其中主要使用了细胞因子和地西他滨来联合诱导；中国专利申请CN105154402A公开了一种培养基及其应用，其中包括转铁蛋白、孕酮、干细胞生长因子、IL-2、IL-4等，主要用于CAR-T细胞的培养；中国专利申请CN104278012A公开了一种成人调节性T细胞体外扩增培养基及其使用方法，其中包括转化生长因子-β、骨形态发生蛋白-4、IL-2、IL-4等；中国专利申请CN105969729A公开了一种T细胞培养基及其制备方法，其在RPMI-1640培养基的基础上进一步添加了IL-2、内皮细胞生长因子、转铁蛋白等。然而，令人意外的是，本专利技术人研究获得了新的T细胞培养基及其中的添加剂，没有为现有技术所公开和教导。尤其是该T细胞培养基中的添加剂能方便、灵活地与现有的含谷氨酰胺的无血清培养基混合配制成优化的T细胞培养基，分别针对不同T细胞的培养，用于提高T细胞的增殖率，提高具有增殖活性的T细胞以及免疫功能活化的T细胞的比例并减少T细胞发生细胞凋亡的状况。
技术实现思路
专利技术简述本专利技术要解决的技术问题在于提供一种新的T细胞培养基及其中的添加剂，用于体外培养T细胞。该T细胞培养基中的添加剂能方便、灵活地与现有的含谷氨酰胺的无血清培养基混合配制成优化的T细胞培养基，分别针对不同T细胞的培养，用于提高T细胞的增殖率，提高具有增殖活性的T细胞以及免疫功能活化的T细胞的比例并减少T细胞发生细胞凋亡的状况。具体而言，在第一方面，本专利技术提供了用于培养T细胞的添加剂，其包括白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的特异性培养成分，其中特异性培养成分选自抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺中的一种。。优选本专利技术第一方面的添加剂由白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的特异性培养成分组成，其中特异性培养成分选自抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺中的一种。也优选在本专利技术第一方面的添加剂中，所述T细胞是αβT细胞、γδT细胞或NKT细胞。也优选在本专利技术第一方面的添加剂中，白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺的比例为10-6000IU：1-300pg：1-3000pg：50-1500pg：10-100ng：1-20nmol：20-200ng。更优选在本专利技术第一方面的添加剂中，白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺的比例为100-4000IU：20-80pg：200-800pg：500-1200pg：20-80ng：3-10nmol：50-150ng。特别优选在本专利技术第一方面的添加剂中，白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺的比例为200-3000IU：40pg：400pg：1000pg：50ng：5nmol：100ng。在第二方面，本专利技术提供了T细胞培养基，其由含谷氨酰胺的无血清培养基和本专利技术第一方面的添加剂组成。优选在本专利技术第二方面的培养基中，所述T细胞是αβT细胞、γδT细胞或NKT细胞。也优选在本专利技术第二方面的培养基中，所述含谷氨酰胺的无血清培养基是AIM-V、X-VIVO15或CellgroSCGM。也优选在本专利技术第二方面的培养基中，白介素-2的浓度为10-6000IU/mL，优选为100-4000IU/mL，更优选为200-3000IU/mL。在第三方面，本专利技术提供了体外培养T细胞的方法，其包括用本专利技术第二方面的培养基对样本培养出T细胞的步骤。优选在本专利技术第三方面的方法中，本专利技术第二方面的培养基中的本专利技术第一方面的添加剂中的特异性培养成分和所述T细胞选自以下3组之一：（1）抗-CD3抗体和αβT细胞；（2）唑来膦酸和γδT细胞；以及（3）半乳糖苷基神经酰胺和NKT细胞。也优选在本专利技术第三方面的方法中，所述样本含单核细胞，优选含外周血液单核细胞。专利技术详述本专利技术提供了新的用于培养T细胞的添加剂、含有该添加剂的T细胞培养基和使用该T细胞培养基培养T细胞的方法等。本专利技术的用于培养T细胞的添加剂包括白介素-2（interleukin-2,简称为IL2）、碱性成纤维细胞生长因子（basicFibroblastGrowthFactor,简称为bFGF）、转化生长因子-α（Transforminggrowthfactor-α,简称为TGF-α）和趋化因子配体5（Chemokineligand5,简称为CCL5）以及任选的特异性培养成分。在本文中，术语“任选”表示选择或者不选择，即本专利技术第一方面的添加剂可以包含特异性培养成分，也可以不包含特异性培养成分。当不需要特异性增殖特定种类的T细胞时，本专利技术第一方面的添加剂无需包含特异性培养成分，因而本专利技术第一方面的添加剂可以由白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5组成；当需要特异性增殖αβT细胞时，本专利技术第一方面的添加剂中的特异性培养成分是抗-CD3抗体；当需要特异性增殖γδT细胞时，本专利技术第一方面的添加剂中的特异性培养成分是唑来膦酸；或者，当需要特异性增殖NKT细胞时，本专利技术第一方面的添加剂中的特异性培养成分是半乳糖苷基神经酰胺。抗-CD3抗体可以是抗-CD3的多克隆抗体，也可以是抗-CD3的单克隆抗体，优选是抗-CD3的单克隆抗体。本专利技术第一方面的添加剂可以包含溶剂，如水。由于本专利技术第一方面的添加剂要添加在含谷氨酰胺的无血清培养基中使用，会被稀释，所以该添加剂中的溶质浓度要大于在T细胞培养是所使用的浓度。例如，白介素-2的使用浓度为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于培养T细胞的添加剂，其包括白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的特异性培养成分，其中特异性培养成分选自抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺中的一种。/n

【技术特征摘要】
1.用于培养T细胞的添加剂，其包括白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的特异性培养成分，其中特异性培养成分选自抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺中的一种。


2.权利要求1所述的添加剂，其由白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的特异性培养成分组成，其中特异性培养成分选自抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺中的一种。


3.权利要求1或2所述的添加剂，其中，白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺的比例为10-6000IU：1-300pg：1-3000pg：50-1500pg：10-100ng：1-20nmol：20-200ng，优选为100-4000IU：20-80pg：200-800pg：500-1200pg：20-80ng：3-10nmol：50-150ng，更优选为200-3000IU：40pg：400pg：1000pg：50ng：5nmol：100ng。


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【专利技术属性】
技术研发人员：季匡华，王愈善，江欣倩，黄逸君，詹姆斯周，
申请(专利权)人：广西慧宝源健康产业有限公司，强普生技股份有限公司，桂林商源植物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45