一种高纯度三七总皂苷的提取方法技术

发明专利技术公开了一种纯度三七总皂苷的提取方法，涉及中药提取技术领域，提取方法包括以下步骤：(1)循环进行热/冷冻预处理；(2)粉碎过筛；以低共熔溶剂和乙醇组成的混合溶剂作为提取溶剂，加入中性纤维素酶和果胶酶；微波提取；调节pH值为4.5‑5，继续微波提取；浓缩提取液，得浓缩液；(3)浓缩液中加入丙酮，调节pH值至7‑7.5，搅拌，放置，过滤，得沉淀；加入水溶解沉淀物；(4)溶解液上大孔吸附树脂，收集洗脱液，减压浓缩；浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗；(5)水洗液加乙醇，过脱色树脂；(6)洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩，减压干燥，即得。本发明专利技术各步骤间相互协同，使所制备得到的三七总皂苷纯度高，且七总皂苷提取率高。

A method of extracting total saponins of Panax notoginseng with high purity

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度三七总皂苷的提取方法
本专利技术涉及中药提取
，特别涉及一种高纯度三七总皂苷的提取方法。
技术介绍
三七又名山膝、金不换，系五加科人参属植物三七(Panaxnotoginseng(Bpk.)F.H.Chen)的干燥根及根茎。主产于我国云南、广西等省，为传统珍贵药材。现代药理学研究表明，三七不但具有良好的止血、活血化瘀双向药理作用，还有着强心、扩张冠状动脉、增加冠状血流量、抗动脉粥样硬化、抗血栓形成等活性，是外伤和心脑血管类疾病的常选药材，其主要有效成分为三七总皂苷，含有量较高者有三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd等。因其临床疗效显著，故在心脑血管类疾病的新药研制方面有着极大的开发空间及市场需求，也势必会带来良好的经济和市场效应。2015年版《中国药典》规定：三七总皂苷按干燥品计算，含三七皂苷R1不得少于5.0％、人参皂苷Rg1不得少于25.0％、人参皂苷Re不得少于2.5％、人参皂苷Rb1不得少于30.0％、人参皂苷Rd不得少于5.0％，且三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量不得低于75％(供口服用)或85％(供注射用)。三七提取液中三七总皂苷的提纯方法有醇沉去杂法、有机溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、聚酰胺柱法等。其中大孔吸附树脂法操作简便、无污染、成本较低，较其它方法所得提取物体积小、不吸潮、易制成各种剂型，中性氧化铝能去除部分三七总皂苷中的伴生物质，有利于澄明度符合要求。申请号CN201910195030.5的国内专利公开了一种高纯度三七总皂苷生产制备方法，该方法包括以下步骤：(1)三七粉碎过筛，醇提，浓缩；(2)加入丙酮萃取，去丙酮，加水溶解沉淀物；或加入正丁醇萃取，保留正丁醇，浓缩，加水溶解；(2)上大孔吸附树脂，经碱水洗、纯化水洗、乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩；(4)上精制树脂纯化，水洗；(5)水洗液加乙醇后过脱色树脂；(6)活性炭脱色，过滤，浓缩，干燥。通过该方法中的方法，可使最终七总皂苷中三七总皂苷总含量达90％以上。但是目前，面对市场对于三七总皂苷纯度越来越高的要求，提高三七总皂苷总含量，具有重要的经济意义。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本申请提供了一种高纯度三七总皂苷的提取方法，各步骤间相互协同，使所制备得到的三七总皂苷纯度高，且三七总皂苷提取率高。本专利技术的技术方案如下：一种高纯度三七总皂苷的提取方法，包括以下步骤：(1)将三七整体置于烘箱中，抽真空的状态下加热至80-90℃，保持8-10min；然后快速放入-18℃的冰箱中保持15-20min；如此循环3-5次；(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过80-100目筛，得三七粉料；向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为80-90％的乙醇组成的混合溶剂，混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:1-2.5；然后加入中性纤维素酶和果胶酶，中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的3.5-4.5％，果胶酶的加入量为三七粉料质量的1-1.5％；然后在温度为45-50℃下进行微波提取，微波功率为200-300W，提取时间为10-15min；然后使用pH调节剂调节pH值为4.5-5，继续微波提取，温度为45-50℃，微波功率为200-300W，提取时间为5-8min，得提取液；离心，取上清液，然后经滤膜过滤，得提取液；浓缩提取液，得浓缩液；(3)向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮，丙酮的加入量为浓缩液体积的5-7倍，并加入pH调节剂调节pH值至7-7.5，搅拌20-30min后，放置5-6h，过滤，使用丙酮洗涤1-2次，得沉淀；然后加入水溶解沉淀物，得溶解液；(4)将步骤(3)中的溶解液上大孔吸附树脂，使用质量浓度为65-70％的乙醇作为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至55℃相对密度1.06-1.09；将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗，水洗后收集水洗液；(5)步骤(4)所得水洗液加乙醇，使所得溶液中乙醇的质量浓度为50-60％，然后过脱色树脂，收集过柱液；(6)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩，将所得浓缩液在55-60℃下进行减压干燥至恒重，即得所述三七总皂苷。优选地，步骤(1)中，所述低共熔溶剂由氢键供体和氢键受体通过氢键缔合形成；所述氢键供体为乙二醇、丙二醇或丁二木糖醇；所述氢键受体氯化胆碱或硫酸氢四丁基铵。进一步优选地，所述氢键供体和氢键受体的摩尔比为1:1-3。优选地，步骤(2)中，所述三七粉料与混合溶剂的固液比为1:13-18g/ml。优选地，步骤(2)中，所述pH调节剂为质量浓度为10-15％的柠檬酸溶液或质量浓度为10-15％的醋酸溶液。优选地，步骤(3)中，所述pH调节剂为质量浓度为1-3％的氢氧化钾溶液或为质量浓度为1-3％的氢氧化钠溶液。优选地，步骤(3)中，加入水溶解沉淀物，加水量为三七粉料质量的4-5.5倍。优选地，步骤(4)中，所述大孔吸附树脂为HPD-100型大孔吸附树脂或D101大孔吸附树脂。优选地，步骤(5)中所述脱色树脂为D941型弱碱性阴离子脱色树脂或D900型弱碱性阴离子交换树脂。本专利技术有益的技术效果在于：1、本专利技术在进行提取三七总皂苷前，先循环进行“加热/冷冻”预处理，一方面使三七具有多孔结构，疏松度高，使后续提取时，各种成分易于从细胞中溶出，另一方面可减少三七总皂苷与细胞内物质的结合度，分离程度高，对于提高总皂苷提取率十分有益。2、在进行完“加热/冷冻”预处理后，进行三七总皂苷的提取，提取时采用低共熔溶剂和乙醇的混合溶剂，结合微波提取，有利于三七总皂苷的渗出，其中低共熔溶剂可以沉淀部分多糖、脂肪、蛋白质等物质，使所得提取液中的三七总皂苷的含量增加。3、本专利技术在较低的温度下即可进行有效提取，适宜的微波功率不会使三七总皂苷分解，并可使酶仍然保持在较好活性。而依次采用“酶协同超声波提取”、“酸性环境超声波提取”，可使提取液中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd等物质的含量显著增加。本专利技术中的粉碎目数适宜，加入混合溶剂后，提取过程不会出现糊化，且与酶、混合溶剂等接触面积大，皂苷类物质容易溶出，具有较高的提取速率。4、本专利技术中的提取工艺温度较低，可避免一些活性成分的分解，有效提高了皂苷提取率及纯度。再采用丙酮去杂时，先将丙酮采用碱性试剂调节至中性，然后搅拌后静置沉淀，过滤，并采用丙酮洗涤，可有效去除较多量的黄酮类伴生物质、脂质等。之后采用大孔吸附树脂和聚酰胺树脂树脂吸附结合，不仅对三七提取液中的糖类物质进行有效去除，同时对于提取液中富含的黄酮类伴生物质及其脂质进行进一步去除。5、通过本专利技术中提取方法提取得到的七总皂苷提取率高，达到l6.2％以上；并且三七总皂苷具有高纯度，按干燥品计算，含三七皂苷R1≥7.9％、人参皂苷Rg1≥35.8％、人参皂苷Re≥4.8％、人参皂苷Rb1≥32.7％、人参皂苷Rd≥11本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高纯度三七总皂苷的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将三七整体置于烘箱中，抽真空的状态下加热至80-90℃，保持8-10min；然后快速放入-18℃的冰箱中保持15-20min；如此循环3-5次；/n(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过80-100目筛，得三七粉料；向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为80-90％的乙醇组成的混合溶剂，混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:1-2.5；/n然后加入中性纤维素酶和果胶酶，中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的3.5-4.5％，果胶酶的加入量为三七粉料质量的1-1.5％；然后在温度为45-50℃下进行微波提取，微波功率为200-300W，提取时间为10-15min；然后使用pH调节剂调节pH值为4.5-5，继续微波提取，温度为45-50℃，微波功率为200-300W，提取时间为5-8min，得提取液；离心，取上清液，然后经滤膜过滤，得提取液；浓缩提取液，得浓缩液；/n(3)向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮，丙酮的加入量为浓缩液体积的5-7倍，并加入pH调节剂调节pH值至7-7.5，搅拌20-30min后，放置5-6h，过滤，使用丙酮洗涤1-2次，得沉淀；然后加入水溶解沉淀物，得溶解液；/n(4)将步骤(3)中的溶解液上大孔吸附树脂，使用质量浓度为65-70％的乙醇作为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至55℃相对密度1.06-1.09；/n将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗，水洗后收集水洗液；/n(5)步骤(4)所得水洗液加乙醇，使所得溶液中乙醇的质量浓度为50-60％，然后过脱色树脂，收集过柱液；/n(6)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩，将所得浓缩液在55-60℃下进行减压干燥至恒重，即得所述三七总皂苷。/n...

【技术特征摘要】
1.一种高纯度三七总皂苷的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将三七整体置于烘箱中，抽真空的状态下加热至80-90℃，保持8-10min；然后快速放入-18℃的冰箱中保持15-20min；如此循环3-5次；
(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过80-100目筛，得三七粉料；向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为80-90％的乙醇组成的混合溶剂，混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:1-2.5；
然后加入中性纤维素酶和果胶酶，中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的3.5-4.5％，果胶酶的加入量为三七粉料质量的1-1.5％；然后在温度为45-50℃下进行微波提取，微波功率为200-300W，提取时间为10-15min；然后使用pH调节剂调节pH值为4.5-5，继续微波提取，温度为45-50℃，微波功率为200-300W，提取时间为5-8min，得提取液；离心，取上清液，然后经滤膜过滤，得提取液；浓缩提取液，得浓缩液；
(3)向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮，丙酮的加入量为浓缩液体积的5-7倍，并加入pH调节剂调节pH值至7-7.5，搅拌20-30min后，放置5-6h，过滤，使用丙酮洗涤1-2次，得沉淀；然后加入水溶解沉淀物，得溶解液；
(4)将步骤(3)中的溶解液上大孔吸附树脂，使用质量浓度为65-70％的乙醇作为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至55℃相对密度1.06-1.09；
将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗，水洗后收集水洗液；
(5)步骤(4)所得水洗液加乙醇，使所得溶液中乙醇的质量浓度为50-60％，然后过脱色树脂，收集过柱液；
(6)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩，将所得...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛月兰，龚喜，
申请(专利权)人：江苏红豆杉药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32