【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】源自干细胞的施旺细胞相关申请的交叉引用本申请要求2016年11月14日提交的美国申请第62/421,816号的优先权，将其全部内容并入本文以供参考，并且对其要求优先权。
本专利技术公开的主题涉及源自干细胞(例如人干细胞)的施旺细胞前体和施旺细胞，以及其用于周围神经系统(PNS)和/或中枢神经系统(“CNS”)的再生、预防和/或修复髓鞘损伤、和/或预防和/或治疗周围神经病变(例如糖尿病性周围神经病变)的基于细胞的治疗的用途。
技术介绍
施旺细胞(SC)是周围神经系统(PNS)的神经胶质，并且对PNS功能必不可少。它们经由施旺细胞前体(SCP)中间体从神经嵴(NC)发展而来。SC在PNS的功能调节、维持和修复中起着关键的作用，并且在损伤后表现出促进神经修复的显著能力(Jessen等，2015；Lavdas等，2008)。SC缺陷涉及广泛的人类疾病，比如神经鞘瘤(Schwannomatosis)、夏科-马里-图思病(CharcotMarieToothDisease)、格林巴利综合征(GuillainBarreSyndrome)和各种其它周围神经病变，包括糖尿病性周围神经病变(DPN)。糖尿病是周围神经病变的主要原因，影响30％(Callaghan等，2012)至60％(Zochodne，2007)的糖尿病患者。它代表严重的健康问题，导致生活质量下降，发病率和死亡率增加(LaFontaine等，2014)。2001年美国与DPN相关的医疗费用估计为每年46-137亿美元，并且继续增加(Gordois等...
【技术保护点】
1.一种用于诱导干细胞分化的体外方法，其包括使干细胞群体与一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂接触和使细胞与一种或多种Wnt激活剂接触，以及进一步使所述细胞与一种或多种FGF激活剂接触至少约3天，以产生表达一种或多种施旺细胞前体标志物的分化细胞群体。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20161114 US 62/421,8161.一种用于诱导干细胞分化的体外方法，其包括使干细胞群体与一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂接触和使细胞与一种或多种Wnt激活剂接触，以及进一步使所述细胞与一种或多种FGF激活剂接触至少约3天，以产生表达一种或多种施旺细胞前体标志物的分化细胞群体。
2.根据权利要求1所述的方法，其包括使所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂接触约14天。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂的最初接触不晚于从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约20天。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂的最初接触在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约10天至约15天。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂的最初接触在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约11天。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其还包括使所述细胞与一种或多种SC分化诱导剂接触。
7.根据权利要求6所述的方法，其包括使所述细胞与所述一种或多种SC分化诱导剂接触至少约3天，以产生表达一种或多种施旺细胞前体标志物的分化细胞群体。
8.根据权利要求7所述的方法，其包括使所述细胞与所述一种或多种SC分化诱导剂接触约14天。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述细胞与所述一种或多种SC分化诱导剂的最初接触在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约10天至约15天。
10.根据权利要求6-9中任一项所述的方法，其包括使所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂和所述一种或多种SC分化诱导剂同时接触。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约25天或之后，所述干细胞群体分化成表达一种或多种所述施旺细胞前体标志物的分化细胞群体。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其还包括使所述干细胞与一种或多种SMAD抑制剂接触。
13.根据权利要求12所述的方法，包括使所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂和所述一种或多种SMAD抑制剂同时接触。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述细胞与所述一种或多种Wnt激活剂的最初接触不晚于从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约4天。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述细胞与所述一种或多种Wnt信号传导激活剂的最初接触在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约2天。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述细胞与所述一种或多种Wnt信号传导激活剂的最初接触在所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触的同一天。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂是选自SB431542、其衍生物及其混合物的小分子。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂是SB431542。
19.根据权利要求12-18中任一项所述的方法，其中所述一种或多种SMAD抑制剂是选自LDN193189、其衍生物及其混合物的小分子。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述一种或多种SMAD抑制剂是LDN193189。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述一种或多种Wnt激活剂减少糖原合成酶激酶3β(GSK3β)，用于激活Wnt信号传导。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述一种或多种Wnt激活剂是选自CHIR99021、Wnt-1、WNT3A、Wnt4、Wnt5a、其衍生物及其混合物的小分子。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述一种或多种Wnt激活剂是CHIR99021。
24.根据权利要求6-23中任一项所述的方法，其中所述一种或多种SC分化诱导剂选自神经调节蛋白、LIF、CNTF、毛喉素、TGFβ和FBS。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述一种或多种SC分化诱导剂是NRG1。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述一种或多种FGF激活剂选自FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF7、FGF8、FGF10、FGF18、其衍生物及其混合物。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述一种或多种FGF激活剂是FGF2。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述一种或多种施旺细胞前体标志物选自SOX10、GAP43、BLBP、MPZ、Dhh、P75NTR、CD49D、TFAP2、CDH19、CD44、ERBB3、POU3F1、GFAP、CALCB、GRP116、TSPYL5、ITPKA、SLC17A6、SYPL2、LOC100128252、ANGPTL7、LOC728978、ZNF502、SLC16A6、LPL、SLC30A2和SLC10A4。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述干细胞是人干细胞。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述人干细胞选自人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞、人单性生殖干细胞、原始生殖细胞样多能干细胞、外胚层干细胞、F-class多能干细胞。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其包括使所述分化细胞群体经受有利于所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的条件。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述有利于所述分化细胞成熟为所述施旺细胞群体的条件包括：使所述分化细胞与一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触。
33.根据权利要求32所述的方法，其包括使分化的SC前体细胞群体与所述一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触至少约3天。
34.根据权利要求33所述的方法，其包括使分化的SC前体细胞群体与一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触约10天。
35.根据权利要求33所述的方法，其包括使分化的SC前体细胞群体与一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触约35天。
36.根据权利要求31-35中任一项所述的方法，其还包括使分化的SC前体细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触。
37.根据权利要求36所述的方法，其包括使分化的SC前体细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触至少约3天。
38.根据权利要求37所述的方法，其包括使分化的SC前体细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触约10天。
39.根据权利要求37所述的方法，其包括使分化的SC前体细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触约35天。
40.根据权利要求36-39中任一项所述的方法，其包括使分化的SC前体细胞群体与一种或多种FGF激活剂、一种或多种施旺细胞分化诱导剂和一种或多种SC分化增强剂同时接触。
41.根据权利要求31-40中任一项所述的方法，其中所述有利于所述分化细胞成熟为所述施旺细胞群体的条件包括：进一步使所述分化细胞与一种或多种SC分化增强剂接触。
42.根据权利要求36-41中任一项所述的方法，其中所述一种或多种SC分化增强剂选自环腺苷酸(cAMP)、毛喉素、LIF和CNTF。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述一种或多种SC分化增强剂是cAMP。
44.根据权利要求1-44中任一项所述的方法，其包括使所述分化细胞群体聚集为3D球状体；和使所述3D球状体与所述一种或多种FGF激活剂和所述一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触。
45.根据权利要求44所述的方法，其还包括在贴壁培养中培养所述3D球状体。
46.根据权利要求31-45中任一项所述的方法，其中所述施旺细胞群体表达一种或多种施旺细胞标志物。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述一种或多种施旺细胞标志物选自LRRTM4、CDH1、FABP7、BDNF、UNCB5、SOSTDC1、OLIG1、PLAT、KCNJ10、SHH、NTN1、GDNF、ERBB3、GAP43、SOX10、S100、GFAP、POU3F1、PMP22、MBP、AQP4、MPZ、NGFR、NFATC4、MOG、IFNG、MAL、NTF3、TGFB1、CD9、CD81、CD44、CD98、CD49E、CD49D、TYRP1、ENTHD1、NT5E、HTR2B、NOV、IL8、SLC16A6、CDKN2A、PLP2、S100A6、AQP9和CDH19。
48.一种表达一种或多种施旺细胞前体标志物的体外分化细胞群体，其中所述分化细胞群体在以下之后源自干细胞群体：
使干细胞群体与一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂和一种或多种Wnt激活剂接触，和
进一步使所述干细胞群体与一种或多种FGF激活剂接触至少约3天。
49.根据权利要求48所述的分化细胞群体，其中所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂接触约14天。
50.根据权利要求48或49所述的分化细胞群体，其中所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂的最初接触不晚于从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约20天。
51.根据权利要求49所述的分化细胞群体，其中细胞与所述一种或多种FGF激活剂的最初接触在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约10天至约15天。
52.根据权利要求49所述的分化细胞群体，其中所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂的最初接触在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约11天。
53.根据权利要求48-52中任一项所述的分化细胞群体，其中使所述细胞进一步与一种或多种SC分化诱导剂接触。
54.根据权利要求53所述的分化细胞群体，其中使所述细胞进一步与所述一种或多种SC分化诱导剂接触至少约3天。
55.根据权利要求53或54所述的分化细胞群体，其中所述细胞与所述一种或多种SC分化诱导剂的最初接触在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约10天至约15天。
56.根据权利要求53-55中任一项所述的分化细胞群体，其中使所述细胞进一步与所述一种或多种Wnt激活剂、所述一种或多种FGF激活剂和所述一种或多种SC分化诱导剂同时接触。
57.根据权利要求48-56中任一项所述的分化细胞群体，其中在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约25天或之后，所述干细胞群体分化成表达一种或多种所述施旺细胞前体标志物的分化细胞群体。
58.根据权利要求48-57中任一项所述的分化细胞群体，其中使所述干细胞群体进一步与一种或多种SMAD抑制剂接触。
59.根据权利要求58所述的分化细胞群体，其中所述干细胞群体与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂和所述一种或多种SMAD抑制剂同时接触。
60.根据权利要求48-59中任一项所述的分化细胞群体，其中所述细胞与所述一种或多种Wnt信号传导激活剂的最初接触不晚于从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约4天。
61.根据权利要求60所述的分化细胞群体，其中细胞与所述一种或多种Wnt信号传导激活剂的最初接触在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约2天。
62.根据权利要求60所述的分化细胞群体，其中所述细胞与所述一种或多种Wnt信号传导激活剂的最初接触在所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触的同一天。
63.根据权利要求48-63中任一项所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂是选自SB431542、其衍生物及其混合物的小分子。
64.根据权利要求63所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂是SB431542。
65.根据权利要求58-64中任一项所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种SMAD抑制剂是选自LDN193189、其衍生物及其混合物的小分子。
66.根据权利要求65所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种SMAD抑制剂是LDN193189。
67.根据权利要求48-66中任一项所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种Wnt激活剂减少糖原合成酶激酶3β(GSK3β)，用于激活Wnt信号传导。
68.根据权利要求67所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种Wnt激活剂是选自CHIR99021、Wnt-1、WNT3A、Wnt4、Wnt5a、其衍生物及其混合物的小分子。
69.根据权利要求68所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种Wnt激活剂是CHIR99021。
70.根据权利要求53-69中任一项所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种SC分化诱导剂选自神经调节蛋白、LIF、CNTF、毛喉素、TGFβ和FBS。
71.根据权利要求70所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种SC分化诱导剂是NRG1。
72.根据权利要求48-71中任一项所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种FGF激活剂选自FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF7、FGF8、FGF10、FGF18、其衍生物及其混合物。
73.根据权利要求72所述的分化细胞群体，其中所述一种FGF激活剂是FGF2。
74.根据权利要求48-73中任一项所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种施旺细胞前体标志物选自SOX10、GAP43、BLBP、MPZ、Dhh、P75NTR、CD49D、TFAP2、CDH19、CD44、ERBB3、POU3F1、GFAP、CALCB、GRP116、TSPYL5、ITPKA、SLC17A6、SYPL2、LOC100128252、ANGPTL7、LOC728978、ZNF502、SLC16A6、LPL、SLC30A2和SLC10A4。
75.根据权利要求48-74中任一项所述的分化细胞群体，其中所述干细胞是人干细胞。
76.根据权利要求75所述的分化细胞群体，其中所述人干细胞是人多能干细胞。
77.根据权利要求75所述的分化细胞群体，其中所述人干细胞选自人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞、人单性生殖干细胞、原始生殖细胞样多能干细胞、外胚层干细胞和F-class多能干细胞。
78.一种表达一种或多种施旺细胞标志物的体外分化细胞群体，其中在表达一种或多种施旺细胞前体标志物的细胞群体与一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触之后，所述分化细胞群体源自表达一种或多种施旺细胞前体标志物的根据权利要求48-77中任一项所述的细胞群体。
79.根据权利要求78所述的分化细胞群体，其中在进一步使表达一种或多种施旺细胞前体标志物的根据权利要求48-77中任一项所述的细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触之后，所述分化细胞群体源自表达一种或多种施旺细胞前体标志物的细胞群体。
80.根据权利要求78或79所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种SC分化增强剂选自环腺苷酸(cAMP)、毛喉素、LIF和CNTF。
81.根据权利要求80所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种SC分化增强剂是cAMP。
82.根据权利要求78-81中任一项所述的分化细胞群体，其中表达一种或多种施旺细胞前体标志物的根据权利要求48-77中任一项所述的细胞群体与一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触至少约3天。
83.根据权利要求82所述的分化细胞群体，其中表达一种或多种施旺细胞前体标志物的根据权利要求48-77中任一项所述的细胞群体与一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触约10天。
84.根据权利要求82所述的分化细胞群体，其中表达一种或多种施旺细胞前体标志物的根据权利要求48-77中任一项所述的细胞群体与一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触约35天。
85.根据权利要求78-84中任一项所述的分化细胞群体，其中表达一种或多种施旺细胞前体标志物的根据权利要求48-77中任一项所述的细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触至少约3天。
86.根据权利要求85所述的分化细胞群体，其中表达一种或多种施旺细胞前体标志物的根据权利要求48-77中任一项所述的细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触至少约10天。
87.根据权利要求85所述的分化细胞群体，其中表达一种或多种施旺细胞前体标志物的根据权利要求48-77中任一项所述的细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触至少约35天。
88.根据权利要求77-87中任一项所述的分化细胞群体，其中所述一种或多种施旺细胞标志物选自LRRTM4、CDH1、FABP7、BDNF、UNCB5、SOSTDC1、OLIG1、PLAT、KCNJ10、SHH、NTN1、GDNF、ERBB3、GAP43、SOX10、S100、GFAP、POU3F1、PMP22、MBP、AQP4、MPZ、NGFR、NFATC4、MOG、IFNG、MAL、NTF3、TGFB1、CD9、CD81、CD44、CD98、CD49E、CD49D、TYRP1、ENTHD1、NT5E、HTR2B、NOV、IL8、SLC16A6、CDKN2A、PLP2、S100A6、AQP9和CDH19。
89.一种组合物，其包括根据权利要求48-77中任一项所述的分化施旺细胞前体群体。
90.一种组合物，其包括根据权利要求78-88中任一项所述的施旺细胞群体。
91.一种预防和/或治疗受试者中施旺细胞相关疾病的方法，其包括向患有施旺细胞相关疾病的受试者施用有效量的以下之一：
(a)根据权利要求48-77中任一项所述的分化施旺细胞前体群体；
(b)组合物，其包括根据权利要求48-77中任一项所述的分化施旺细胞前体群体；
(c)根据权利要求78-88中任一项所述的施旺细胞群体；和
(d)组合物，其包括根据权利要求78-88中任一项所述的施旺细胞群体。
92.根据权利要求91所述的方法，其中施旺细胞相关疾病是周围神经病变。
93.根据权利要求91或92所述的方法，其中周围神经病变是糖尿病性周围神经病变。
94.根据权利要求48-77中任一项所述的分化施旺细胞前体群体，其用于预防和/或治疗受试者中的施旺细胞相关疾病。
95.根据权利要求94所述的分化施旺细胞前体群体，其中施旺细胞相关疾病是周围神经病变。
96.根据权利要求95所述的分化施旺细胞前体群体，其中周围神经病变是糖尿病性周围神经病变。
97.一种组合物，其包括根据权利要求48-77中任一项所述的分化施旺细胞前体群体，用于预防和/或治疗受试者中的施旺细胞相关疾病。
98.根据权利要求97所述的组合物，其中施旺细胞相关疾病是周围神经病变。
99.根据权利要求98所述的组合物，其中周围神经病变是糖尿病性周围神经病变。
100.根据权利要求78-88中任一项所述的施旺细胞群体，其用于预防和/或治疗受试者中的施旺细胞相关疾病。
101.根据权利要求100所述的施旺细胞群体，其中施旺细胞相关疾病是周围神经病变。
102.根据权利要求101所述的施旺细胞群体，其中周围神经病变是糖尿病性周围神经病变。
103.一种组合物，其包括根据权利要求78-88中任一项所述的施旺细胞群体，用于预防和/或治疗受试者中的施旺细胞相关疾病。
104.根据权利要求103所述的组合物，其中施旺细胞相关疾病是周围神经病变。
105.根据权利要求104所述的组合物，其中周围神经病变是糖尿病性周围神经病变。
106.根据权利要求48-77中任一项所述的分化施旺细胞前体群体在药物制造中的用途，所述药物用于预防和/或治疗施旺细胞相关疾病。
107.根据权利要求106所述的用途，其中施旺细胞相关疾病是周围神经病变。
108.根据权利要求107所述的用途，其中周围神经病变是糖尿病性周围神经病变。
109.包括根据权利要求48-77中任一项所述的分化施旺细胞前体群体的组合物在药物制造中的用途，所述药物用于预防和/或治疗施旺细胞相关疾病。
110.根据权利要求109所述的用途，其中施旺细胞相关疾病是周围神经病变。
111.根据权利要求110所述的用途，其中周围神经病变是糖尿病性周围神经病变。
112.根据权利要求78-88中任一项所述的施旺细胞群体在药物制造中的用途，所述药物用于预防和/或治疗施旺细胞相关疾病。
113.根据权利要求112所述的用途，其中施旺细胞相关疾病是周围神经病变。
114.根据权利要求113所述的用途，其中周围神经病变是糖尿病性周围神经病变。
115.包括根据权利要求78-88中任一项所述的施旺细胞群体的组合物在药物制造中的用途，所述药物用于预防和/或治疗施旺细胞相关疾病。
116.根据权利要求115所述的用途，其中施旺细胞相关疾病是周围神经病变。
117.根据权利要求116所述的用途，其中周围神经病变是糖尿病性周围神经病变。
118.一种用于诱导干细胞分化的试剂盒，其包括：
一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂，
一种或多种Wnt激活剂，
和
一种或多种FGF激活剂。
119.根据权利要求118所述的试剂盒，其包括用于诱导干细胞分化成表达一种或多种施旺细胞前体标志物的分化细胞群体的说明书，其中所述说明书包括使所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂接触至少约3天。
120.根据权利要求119所述的试剂盒，其中所述说明书包括使所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂接触约14天。
121.根据权利要求119-120中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书包括使所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂的最初接触不晚于从所述细胞与所述一种或多种Wnt激活剂的最初接触起约20天。
122.根据权利要求121所述的试剂盒，其中所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂的最初接触在从所述细胞与所述一种或多种Wnt激活剂的最初接触起约10天至约15天。
123.根据权利要求1202所述的试剂盒，其中所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂的最初接触在从所述细胞与所述一种或多种Wnt激活剂的最初接触起11天。
124.根据权利要求118-123中任一项所述的试剂盒，其还包括一种或多种SC分化诱导剂。
125.根据权利要求124所述的试剂盒，其中所述说明书包括进一步使所述细胞与所述一种或多种SC分化诱导剂接触至少约3天。
126.根据权利要求125所述的试剂盒，其中所述说明书包括进一步使所述细胞与所述一种或多种SC分化诱导剂接触约14天。
127.根据权利要求124-126中任一项所述的试剂盒，其中所述细胞与所述一种或多种SC分化诱导剂的最初接触在从所述细胞与所述一种或多种Wnt激活剂的最初接触起约10天至约15天。
128.根据权利要求124-127中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书包括使所述细胞与所述一种或多种FGF激活剂和所述一种或多种SC分化诱导剂同时接触。
129.根据权利要求118-128中任一项所述的试剂盒，其还包括一种或多种SMAD抑制剂。
130.根据权利要求129所述的试剂盒，其中所述说明书还包括使所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂和所述一种或多种SMAD抑制剂接触。
131.根据权利要求130所述的试剂盒，其中所述说明书包括使所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂和所述一种或多种SMAD抑制剂同时接触。
132.根据权利要求118-131中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书包括使所述细胞与所述一种或多种Wnt激活剂的最初接触不晚于从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约4天。
133.根据权利要求132所述的试剂盒，其中所述说明书包括使所述细胞与所述一种或多种Wnt激活剂的最初接触在从所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触起约2天。
134.根据权利要求132所述的试剂盒，其中所述说明书包括使所述干细胞与所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂的最初接触在所述细胞与所述一种或多种Wnt激活剂的最初接触的同一天。
135.根据权利要求118-134中任一项所述的试剂盒，其中所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂是选自SB431542、其衍生物及其混合物的小分子。
136.根据权利要求135所述的试剂盒，其中所述一种或多种TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂是SB431542。
137.根据权利要求129-136中任一项所述的试剂盒，其中所述一种或多种SMAD抑制剂是选自LDN193189、其衍生物及其混合物的小分子。
138.根据权利要求137所述的试剂盒，其中所述一种或多种SMAD抑制剂是LDN193189。
139.根据权利要求118-138中任一项所述的试剂盒，其中所述一种或多种Wnt激活剂减少糖原合成酶激酶3β(GSK3β)，用于激活Wnt信号传导。
140.根据权利要求139所述的试剂盒，其中所述一种或多种Wnt激活剂是选自CHIR99021、Wnt-1、WNT3A、Wnt4、Wnt5a、其衍生物及其混合物的小分子。
141.根据权利要求140所述的试剂盒，其中所述一种或多种Wnt激活剂是CHIR99021。
142.根据权利要求124-141中任一项所述的试剂盒，其中所述一种或多种SC分化诱导剂选自神经调节蛋白、LIF、CNTF、毛喉素、TGFβ和FBS。
143.根据权利要求142所述的试剂盒，其中所述一种或多种SC分化诱导剂是NRG1。
144.根据权利要求118-143中任一项所述的试剂盒，其中所述一种或多种FGF激活剂选自FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF7、FGF8、FGF10、FGF18、其衍生物及其混合物。
145.根据权利要求144所述的试剂盒，其中所述一种FGF激活剂是FGF2。
146.根据权利要求118-145中任一项所述的试剂盒，其还包括一种或多种SC分化增强剂和用于诱导所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的说明书。
147.根据权利要求146所述的试剂盒，其中所述一种或多种SC分化增强剂选自环腺苷酸(cAMP)、毛喉素、LIF和CNTF。
148.根据权利要求147所述的试剂盒，其中所述一种或多种SC分化增强剂是cAMP。
149.根据权利要求146-148中任一项所述的试剂盒，其中所述用于诱导所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的说明书包括：使所述分化细胞与所述一种或多种FGF激活剂和所述一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触。
150.根据权利要求149所述的试剂盒，其中所述用于诱导所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的说明书包括：使所述分化的SC前体细胞群体与一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触至少约3天。
151.根据权利要求149所述的试剂盒，其中所述用于诱导所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的说明书包括：使所述分化的SC前体细胞群体与一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触约10天。
152.根据权利要求150所述的试剂盒，其中所述用于诱导所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的说明书包括：使所述分化的SC前体细胞群体与一种或多种FGF激活剂和一种或多种施旺细胞分化诱导剂接触约35天。
153.根据权利要求146-151中任一项所述的试剂盒，其中所述用于诱导所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的说明书还包括：使分化的SC前体细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触。
154.根据权利要求153所述的试剂盒，其中所述用于诱导所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的说明书还包括：使分化的SC前体细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触至少约3天。
155.根据权利要求154所述的试剂盒，其中所述用于诱导所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的说明书还包括：使分化的SC前体细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触约14天。
156.根据权利要求154所述的试剂盒，其中所述用于诱导所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的说明书还包括：使分化的SC前体细胞群体与一种或多种SC分化增强剂接触约35天。
157.根据权利要求153-156中任一项所述的试剂盒，其中所述用于诱导所述分化细胞成熟为施旺细胞群体的说明...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·施图德，F·法塔希，
申请(专利权)人：纪念斯隆凯特琳癌症中心，
类型：发明
国别省市：美国;US
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