诊断试剂盒及MAK16在制备系统性红斑狼疮早期诊断试剂中的应用技术方案

本发明专利技术公开了一种诊断试剂盒及MAK16在制备系统性红斑狼疮(SLE)早期诊断试剂中的应用，该诊断试剂盒，可用于系统性红斑狼疮疾病的早期诊断，试剂盒包括酶标板、作为抗原的人蛋白质MAK16、包被液、标准血清、酶标试剂、封闭液、样品稀释液，将人蛋白质MAK16包被于酶标板上，通过测定血清中抗人蛋白质MAK16的IgG抗体的光密度，以辅助诊断系统性红斑狼疮。本发明专利技术提供了一种灵敏、安全、可靠、易操作的商品化试剂盒，通过定性检测人血清中抗蛋白质MAK16的IgG抗体的水平，有助于辅助诊断和鉴别诊断SLE；提供的试剂盒用于SLE疾病筛查或初步诊断的特异性为88.12％，敏感性为48.98％；用于SLE疾病鉴别诊断的特异性为86.50％，敏感性为39.50％，可以作为现有SLE诊断标记物的有益补充。

Application of diagnostic kit and mak16 in the preparation of early diagnostic reagents for systemic lupus erythematosus

【技术实现步骤摘要】
诊断试剂盒及MAK16在制备系统性红斑狼疮早期诊断试剂中的应用
本专利技术属于生物科学领域，尤其涉及一种诊断试剂盒及MAK16在制备系统性红斑狼疮早期诊断试剂中的应用。
技术介绍
系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)是一种可能损伤全身多系统、多器官的严重威胁人类健康的慢性自身免疫性疾病，在世界各地均有发病，不同性别、种族和地区间存在较大差异，其中亚洲和美洲人的发病率较高(ReesF,etal:Rheumatology(Oxford),2017,56(11):1945-1961)，其在全球平均患病率约为17/10万～48/10万，在中国的患病率约为40/10万～70/10万，男女比例约为1:9，临床上很难治愈，随着病程的迁延或反复发作，可以造成身体各个器官或系统的不可逆性的损伤，其中较常见的损伤有皮肤黏膜、肾脏、血液系统、神经系统、关节(WuH,etal:Autoimmunityreviews,2017,16(4):391-397)，其它损伤还可见于肝、肺、眼，心、脑等几乎全身所有器官和系统。目前认为系统性红斑狼疮发生是由遗传、环境、激素等多种因素共同作用的结果(PaleyMA,etal:CurrOpinRheumatol,2017,29(2):178-186)。由于SLE的发病机制复杂，初期病情隐匿，涉及的器官损伤众多，临床早期诊断存在较大难度，且缺乏确切可靠的金标准，需要结合临床症状、体征、病史和实验室检查进行综合诊断。在过去的几十年里，系统性红斑狼疮的诊断、治疗技术和预后虽在不断改善，然而，由于病程易迁延反复且无法预测，临床上仍无法完全治愈等原因，系统性红斑狼疮患者仍承受着沉重的疾病负担，严重影响患者的生活质量。系统性红斑狼疮的临床表现多样，血清学和免疫学指标变异性很大(ApostolopoulosD,etal:AustFamPhysician,2013,42(10):696-700)。鉴于大量自身抗体的产生并攻击相应靶抗原，或与靶抗原结合形成免疫复合物，沉积于机体各组织是SLE发病的直接原因，国内外学者一直致力于新的高特异性和敏感性的自身抗体的发现。通过实验室检查，可以在病人血清中发现各种不同免疫球蛋白或抗体的异常升高。因此，系统性红斑狼疮自身抗体诊断标志物的发现具有重要临床应用价值。理想的系统性红斑狼疮诊断标志物应符合以下条件：(1)敏感性高；(2)特异性高；(3)存在于体液，特别是血液中，易于检测。近年有文献综述报道，在SLE病人体内已发现100多种自身抗体异常高表达(YanivG,etal:AutoimmunRev,2015,14(1):75-79)。然而，在目前已发现的众多血清免疫学指标中，还没有任何一种指标可以单独达到敏感性和特异性均很高地用于临床SLE的早期诊断。目前，指南推荐及临床上常用的自身抗体有：ANA、anti-dsDNA、anti-Sm、aPL、anti-rib-P、anti-DNP、AHA、AnuA、ANCA等。在已发现的临床常用自身抗体中，ANA能与所有动物的细胞核发生反应，可在SLE等大多混合结缔组织疾病(MTCD)中检测出，为SLE的初筛血清学指标；抗dsDNA抗体可出现在SLE发病早期，与SLE关系较密切，随疾病的活动度不同而升降，可在40％-70％SLE患者中检测出；anti-Sm抗体在SLE患者阳性检出率约30％；抗磷脂抗体(aPL)在30％-40％的SLE患者中可检出；抗核糖体P蛋白抗体(anti-rib-P)在SLE病人中的阳性率为15％-35％，与SLE中的神经精神症状伴发症相关(VianaVT,etal:Lupus,2017,26(5):453-462)；抗脱氧核糖核蛋白抗体(anti-DNP)与SLE患者疾病活动性具有一定相关；抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)常与SLE的活动性有关，在SLE患者的阳性率约为21％-25％(WeinerM,etal:AutoimmunRev,2016,15(10):978-982)。通过对这些常见自身抗体应用价值的分析可以看出，其在SLE的诊断及鉴别诊断，疾病的发生、发展及临床各种表征的出现等方面都有一定作用，但也都存在一些不足，进一步从全蛋白组水平探索未知的SLE高度相关自身抗体具有重要的临床意义。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种诊断试剂盒，以解决现有技术中的系统性红斑狼疮诊断试剂盒不能实现对SLE的早期高灵敏性、高特异性的诊断的技术性问题。本专利技术的第二目的在于提供一种MAK16在制备系统性红斑狼疮早期诊断试剂中的应用，以解决现有技术中的系统性红斑狼疮诊断试剂盒不能实现对SLE的早期高灵敏性、高特异性的诊断的技术性问题。为解决上述问题，本专利技术的技术方案为：一种诊断试剂盒，用于系统性红斑狼疮疾病的早期诊断，所述试剂盒包括酶标板、作为抗原的人蛋白质MAK16、包被液、标准血清、酶标试剂、封闭液和样品稀释液，其中，所述人蛋白质MAK16包被于所述酶标板上，所述诊断试剂盒通过测定血清中抗人蛋白质MAK16的IgG抗体的浓度，以辅助诊断系统性红斑狼疮。优选地，所述人蛋白质MAK16是从酿酒酵母中过量表达，亲和纯化而得到的，浓度为50μg/mL。优选地，所述酶标试剂含HRP标记抗人IgG抗体0.8mg/mL，其中，抗人IgG抗体是由亲和纯化山羊法制备的。优选地，所述标准血清包括阳性标准血清和阴性标准血清，所述阴性标准血清为已知MAK16抗体为阴性的健康人血清；所述阳性标准血清为已知MAK16抗体为阳性的血清。优选地，所述封闭液为含3％BSA的0.01mol/LpH7.4磷酸盐-NaCl缓冲溶液(PBS)，即1升溶液中含30gBSA(牛血清白蛋白)、8gNaCl、0.2gKH2PO4、2.9gNa2HPO4·12H2O和0.2gKCl。优选地，所述样品稀释液为0.01mol/LpH7.4的PBS溶液，即1升溶液中包含以下成分：10gBSA、8gNaCl、0.2gKH2PO4、2.9gNa2HPO4·12H2O、0.2gKCl、1mLTween-20、10mLFBS(胎牛血清)、0.4mLProClin300。优选地，所述诊断试剂盒采用的是现在临床广泛使用的ELISA技术，应用间接法定性检测人血清中抗蛋白质MAK16的IgG抗体，具体是：用纯化的MAK16蛋白包被微孔板，制成固相抗原，向包被的微孔中依次加入待测血清，与HRP标记的抗人IgG抗体结合后，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加TMB溶液显色，TMB在HRP酶的催化下转变成蓝色，并在酸的作用下最终转变成黄色，颜色的深浅和样品中的抗蛋白质MAK16的IgG抗体的水平呈正相关。本专利技术还提供了MAK16在制备系统性红斑狼疮早期诊断试剂中的应用，通过使用该诊断试剂，测定血清中抗MAK16的IgG抗体的光密度，以辅助诊断系统性红斑狼疮。本专利技术由于采用以上技术方案，使其与现有技术相比具有以下的优点和积极效果：1、本专利技术提供了一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诊断试剂盒，用于系统性红斑狼疮疾病的诊断，其特征在于，所述试剂盒包括酶标板、作为抗原的人蛋白质MAK16、包被液、标准血清、酶标试剂、封闭液和样品稀释液，其中，所述人蛋白质MAK16包被于所述酶标板上，所述诊断试剂盒通过测定血清中抗人蛋白质MAK16的IgG抗体的光密度，以辅助诊断系统性红斑狼疮。/n

【技术特征摘要】
1.一种诊断试剂盒，用于系统性红斑狼疮疾病的诊断，其特征在于，所述试剂盒包括酶标板、作为抗原的人蛋白质MAK16、包被液、标准血清、酶标试剂、封闭液和样品稀释液，其中，所述人蛋白质MAK16包被于所述酶标板上，所述诊断试剂盒通过测定血清中抗人蛋白质MAK16的IgG抗体的光密度，以辅助诊断系统性红斑狼疮。


2.根据权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述人蛋白质MAK16是从酿酒酵母中过量表达，亲和纯化而得到的，浓度为50μg/mL。


3.根据权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述酶标试剂含HRP酶标记抗人IgG抗体0.8mg/mL。


4.根据权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述标准血清包括阳性标准血清和阴性标准血清，所述阴性标准血清为已知MAK16抗体为阴性的的健康人血清；所述阳性标准血清为已知MAK16抗体为阳性的血清。


5.根据权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述封闭液为含3％BSA的0.01mol/LpH7.4磷酸盐-NaCl缓冲溶液，即1升溶液中含30gBSA、8...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶冬青，凌华志，
申请(专利权)人：安徽医科大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34