一种快速鉴别金银花和山银花的薄层检测方法技术

本发明专利技术提供了一种快速鉴别金银花和山银花的薄层检测方法，解决了现有四种鉴别金银花和山银花方法中所存在的可靠性低、成本高、时间长的问题。该方法选用金银花和山银花特有的代表成分对来两者进行鉴别，包括以下步骤：1)制备对照品溶液和样品溶液；2)薄层点样；3)制备展开剂；4)展开；5)显色与检视。采用此种薄层检测方法简单、快速、灵敏度高、专属性强，对金银花和山银花的对比明显，结果直观，易于辨认和区分，为确保区分金银花和山银花提供了可靠的鉴别方法。

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴别金银花和山银花的薄层检测方法
本专利技术属于植物鉴别领域，具体涉及一种快速鉴别金银花和山银花的薄层检测方法。
技术介绍
《中国药典》2015版规定：金银花为忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥花蕾或带初开的花；夏初花开放前进行采收，干燥；主要产于河南、山东、广西、湖南、广东等地。它是临床上常用的一味中药，素有“中药中的青霉素”之称。山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬(LoniceramacranthoidesHand.-Mazz.)、红腺忍冬(LonicerahypoglaucaMiq.)、华南忍冬(0LoniceraconfusaDC.)或黄褐毛忍冬(LonicerafulvotomentosaHsuetS.C.Cheng)的干燥花蕾或带初开的花；夏初花开放前进行采收，干燥。由此可见，山银花与金银花虽然同为忍冬属植物，但实为两类明显不同的物种，其中，山银花是上述四种忍冬的笼统叫法。自2005版起，《中国药典》就将金银花与山银花分列为两项，但功用表述却完全相同。药典委员会也回应，尽管金银花和山银花二者在一些功效方面存在着相同性，但更应关注其内在化学成分的差异。山银花中含有大量皂苷类成分，如果用于生产中药注射剂，则可能存在溶血等风险。市场上，山银花在销售价格上明显更低，因此，制备含金银花的药剂时，在利益驱使下不良商家会使用山银花替代金银花。同时，也由于金银花和山银花之争，引发了两者在质量评定、市场流通、临床应用等方面的一系列问题。因此，两者的鉴别工作尤为重要。目前，鉴别金银花和山银花的方法有性状鉴别，显微鉴别、薄层鉴别和液相含量的鉴别。1.性状鉴别：《中国药典》2015版中，金银花的性状鉴别为：本品呈棒状，上粗下细，略弯曲，长2～3cm，上部直径约3mm，下部直径约1.5mm；表面黄白色或绿白色(贮久色渐深)，密被短柔毛，偶见叶状苞片，花萼绿色，先端5裂，裂片有毛，长约2mm；开放者花冠筒状，先端二唇形；雄蕊5，附于筒壁，黄色；雌蕊1，子房无毛；气清香，味淡、微苦。山银花的性状鉴别为：(1)灰毡毛忍冬呈棒状而稍弯曲，长3～4.5cm，上部直径约2mm，下部直径约1mm；表面黄色或黄绿色；总花梗集结成簇，开放者花冠裂片不及全长之半；质稍硬，手捏之稍有弹性；气清香，味微苦甘。(2)红腺忍冬长2.5～4.5cm，直径0.8～2mm；表面黄白至黄棕色，无毛或疏被毛，萼筒无毛，先端5裂，裂片长三角形，被毛，开放者花冠下唇反转，花柱无毛。(3)华南忍冬长1.6～3.5cm，直径0.5～2mm；萼筒和花冠密被灰白色毛。(4)黄褐毛忍冬长1～3.4cm，直径1.5～2mm；花冠表面淡黄棕色或黄棕色，密被黄色茸毛。2.显微鉴别《中国药典》2015版中，金银花的显微鉴别为：本品粉末浅黄棕色或黄绿色；腺毛较多，头部倒圆锥形、类圆形或略扁圆形，4～33细胞，成2～4层，直径30～64～108pm，柄部1～5细胞，长可达70pm。非腺毛有两种：一种为厚壁非腺毛，单细胞，长可达90pm，表面有微细疣状或泡状突起，有的具螺纹；另一种为薄壁非腺毛，单细胞，甚长，弯曲或皱缩，表面有微细疣状突起。草酸钙簇晶直径6～45pm。花粉粒类圆形或三角形，表面具细密短剌及细颗粒状雕纹，具3孔沟。山银花的显微鉴别为：(1)灰毡毛忍冬腺毛较少，头部大多圆盘形，顶端平坦或微凹，侧面观5～16细胞，直径37～228pm；柄部2～5细胞，与头部相接处常为2(～3)细胞并列，长32～240pm，直径15～51pm。厚壁非腺毛较多，单细胞，似角状，多数甚短，长21～240(～315)pm，表面微具疣状突起，有的可见螺纹，呈短角状者体部胞腔不明显；基部稍扩大，似三角状。草酸钙簇晶，偶见。花粉粒，直径54～82pm。(2)红腺忍冬腺毛极多，头部盾形而大，顶面观8～40细胞，侧面观7～10细胞；柄部1～4细胞，极短，长5～56pm。厚壁非腺毛长短悬殊，长38～1408μm,表面具细密疣状突起，有的胞腔内含草酸钙结晶。(3)华南忍冬腺毛较多，头部倒圆锥形或盘形，侧面观20～60～100细胞；柄部2～4细胞，长50～176(～248)μm。厚壁非腺毛，单细胞，长32～623(～848)μm，表面有微细疣状突起，有的具螺纹，边缘有波状角质隆起。(4)黄褐毛忍冬腺毛有两种类型：一种较长大，头部倒圆锥形或倒卵形，侧面观12～25细胞，柄部微弯曲，3～5(～6)细胞，长88～470μm；另一种较短小，头部顶面观4～10细胞，柄部2～5细胞，长24～130(～190)μm。厚壁非腺毛平直或稍弯曲，长33～200μm，表面疣状突起较稀，有的具菲薄横隔。3.薄层鉴别《中国药典》2015版中，金银花的薄层鉴别为：取本品粉末0.2g，加甲醇5ml，放置12小时，过滤，取滤液作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液10～20μl、对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(体积比7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂，展开、取出、晾干，置于紫外光灯(365nm光照)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。山银花的薄层鉴别为：取本品粉末0.2g，加甲醇5ml，放置12小时，过滤，取滤液作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每lml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液10～20μl、对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(体积比7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂，展开、取出、晾干，置于紫外光灯(365nm光照)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。4.液相鉴别《中国药典》2015版中，金银花中含绿原酸不得少于1.5％，含木犀草苷不得少于0.05％；山银花中含绿原酸不得少于2.0％，含灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总量不得少于5.0％。其他研究学者也用液相法对金银花和山银花中的化学成分有建立指纹图谱的比较，如路俊仙等的《金银花和灰毡毛忍冬多成分定性的指纹图谱比较》。因山银花与金银花同属忍冬科植物，两者在性状及显微特征等方面存在许多相似之处，因此，从性状和显微上很难对其进行区分。而药典中金银花和山银花的薄层鉴别方法是一样的，经过实验对比发现，通过药典中记载的薄层鉴别方法并不能很好的对金银花和山银花做出区分。同时，液相鉴别的成本高，时间长，不利于快速鉴别，并非最佳鉴别方法。因此，寻求一种可靠、低成本、简便且高效鉴别金银花和山银花的方法迫在眉睫。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决
技术介绍
中四种鉴别金银花和山银花方法中所存在的可靠性低、成本高、时间长的不足之处，而提供了一种新的鉴别金银花和山银花的方法。为实现上述目的，本专利技术的构思是：在上述四种鉴别方法中，性状鉴别以及显微镜鉴别均属于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速鉴别金银花和山银花的薄层检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)制备对照品溶液和样品溶液/n1.1)分别取适量的绿原酸、木樨草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙，并分别加入甲醇溶解制成浓度为0.8～2mg/ml的对照品溶液；/n1.2)分别取适量的金银花和山银花原料样品，粉碎后过筛，置于可密封的试验容器中；/n1.3)向所述试验容器中加入所述原料样品质量5～10倍量、质量浓度为70％～95％的乙醇，并进行超声处理30～60分钟，取出试验容器后放至室温；/n1.4)对步骤1.3)经超声处理后的样品进行微孔滤膜过滤，收集滤液作为样品溶液；/n2)薄层点样/n将步骤1)中制备好的样品溶液和对照品溶液依次分别点于同一硅胶G薄层板上同一高度的不同位置上形成点样原点；/n3)制备展开剂/n3.1)取乙酸乙酯、甲醇、水和甲酸，以10∶3∶1∶0.5的体积比混合，得到展开剂；/n3.2)将展开剂置于展开缸中，密封展开缸，预饱和15～20分钟；/n4)展开/n将步骤3)预饱和后的展开缸打开，迅速将步骤2)点样后的硅胶G薄层板放入展开缸中，且展开缸中的展开剂不能没过点样原点；当展开剂的前沿上行至硅胶G薄层板上边缘，距离点样原点6cm～15cm时，将硅胶G薄层板取出；/n5)显色与检视/n5.1)吹干步骤4)展开好的硅胶G薄层板上的试剂后，喷以天然显色剂，在105℃下加热2～4分钟，放至室温后在白光下检视；/n5.2)再向硅胶G薄层板喷以质量浓度为5％～10％的硫酸乙醇溶液，并在105℃下加热3～5分钟，放至室温后分别在紫外365nm光照下和白光下检视。/n...

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴别金银花和山银花的薄层检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)制备对照品溶液和样品溶液
1.1)分别取适量的绿原酸、木樨草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙，并分别加入甲醇溶解制成浓度为0.8～2mg/ml的对照品溶液；
1.2)分别取适量的金银花和山银花原料样品，粉碎后过筛，置于可密封的试验容器中；
1.3)向所述试验容器中加入所述原料样品质量5～10倍量、质量浓度为70％～95％的乙醇，并进行超声处理30～60分钟，取出试验容器后放至室温；
1.4)对步骤1.3)经超声处理后的样品进行微孔滤膜过滤，收集滤液作为样品溶液；
2)薄层点样
将步骤1)中制备好的样品溶液和对照品溶液依次分别点于同一硅胶G薄层板上同一高度的不同位置上形成点样原点；
3)制备展开剂
3.1)取乙酸乙酯、甲醇、水和甲酸，以10∶3∶1∶0.5的体积比混合，得到展开剂；
3.2)将展开剂置于展开缸中，密封展开缸，预饱和15～20分钟；
4)展开
将步骤3)预饱和后的展开缸打开，迅速将步骤2)点样后的硅胶G薄层板放入展开缸中，且展开缸中的展开剂不能没过点样原点；当展开剂的前沿上行至硅胶G薄层板上边缘，距离点样原点6cm～15cm时，将硅胶G薄层板取出；
5)显色与检视
5.1)吹干步骤4)展开好的硅胶G薄层板上的试剂后，喷以天然显色剂，在105℃下加热2～4分钟，放至室温后在白光下检视；
5.2)再向硅胶G薄层板喷以质量浓度为5％～10％的硫酸乙醇溶液，并在105℃下加热3～5分钟，放至室温后分别在紫外365nm光照下和白光下检视。


2.根据权利要求1所述的快速鉴别金银花和山银花的薄层检测方法，其特征在于：
步骤1.1)中，所述对照品溶液的浓度为1mg/ml。


3.根据权利要求2所述的快速鉴别金银花和山银花的薄层检...

【专利技术属性】
技术研发人员：高娟，屈花，左志超，惠战峰，惠玉虎，
申请(专利权)人：陕西嘉禾生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61