一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法技术

本发明专利技术涉及化学检测分析技术领域，具体涉及一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法。一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法，包括以下步骤：1)代谢物提取：将处理后的样本溶液离心，取上清液，备用；2)标准溶液配制：分别配制各目标化合物的单标中间液，再将各单标中间液混合、稀释，配制成外标混合液，依次稀释该外标混合液，得一系列标准溶液；3)上机检测：设置液相色谱和质谱条件，进行上机检测。本申请中采用色谱质谱联用法，色谱能够对目标分析物进行有效的分离，并且质谱的灵敏度更高，能够在更少的样本中得到更准确的结果，而且能够同时检测到TMAO及其相关代谢产物，从而为疾病的诊断、治疗和预防提供更多的线索。

A detection method of TMAO and its related metabolites

【技术实现步骤摘要】
一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法
本专利技术涉及化学检测分析
，具体涉及一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法。
技术介绍
氧化三甲胺(Trimetlylamineoxide，TMAO)，是水产品中含量相对较多的低分子胺类化合物。在人体中肠道微生物能够代谢胆碱和卵磷脂生成三甲胺进而被代谢成TMAO。氧化三甲胺及代谢物参与多种重要的生物学功能，如渗透压调节、稳定蛋白、参与细胞分裂等。研究表明TMAO水平升高与心血管疾病呈现明显正相关，与高血压、心功能不全、动脉硬化等多种疾病密切相关，氧化三甲胺及相关代谢物的研究在探索TMAO代谢、相关疾病发病机理、诊断、治疗及预防手段等方面均有重要的参考价值。因此，TMAO及其相关代谢产物在血浆中的定量检测方法具有重要的临床价值。专利CN108507984A中通过酶联免疫法测定生物样本中的TMAO，这也是目前大部分科研人员使用的方法。但是酶联免疫法的主要缺陷是抗体之间的交叉反应导致的方法灵敏度不高。专利CN109917042A虽然也是通过色谱质谱联用的方法，但是只检测了TMAO一种物质，不能同时对TMAO及其相关代谢产物进行检测，方法的全面性不足，进而会影响到检测方法的准确度。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术第一个方面提供了一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法，包括以下步骤：1)代谢物提取：将处理后的样本溶液离心，取上清液，备用；2)标准溶液配制：分别配制各目标化合物的单标中间液，再将各单标中间液混合、稀释，配制成外标混合液，依次稀释该外标混合液，得一系列标准溶液；3)上机检测：设置液相色谱和质谱条件，进行上机检测；所述液相色谱的流动相A相选自甲酸铵、甲酸铵水溶液、甲酸、甲酸水溶液中的一种或几种。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述处理后的样本溶液中包括内标混合液。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述液相色谱的流动相A相为甲酸铵水溶液和甲酸水溶液。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述液相色谱的流动相B相为乙腈。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述液相色谱的梯度洗脱条件为：0-1min：流动相A为10％→10％，流动相B为90％→90％；1-6.5min：流动相A为10％→29.5％，流动相B为90％→70.5％；6.5-8min：流动相A为29.5％→50％，流动相B为70.5％→50％；8-9.3min：流动相A为50％→50％，流动相B为50％→50％；9.3-9.5min：流动相A为50％→10％，流动相B为50％→90％；9.5-13min：流动相A为10％→10％，流动相B为90％→90％。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述质谱的仪器为三重四极杆质谱仪。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述质谱的离子源参数如下：Capillaryvoltage＝+4000/-3500V，nozzlevoltage＝+500/-500V。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述质谱的离子源参数还包括：gastemperature＝300℃，gasflow＝5L/min，sheathgastemperature＝250℃，sheathgasflow＝11L/min，nebulizer＝45psi。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述质谱的分析采用MRM模式。本专利技术第二个方面提供了一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法在检测TMAO及其相关代谢产物中的应用。有益效果：本专利技术提供的TMAO及其相关代谢产物的检测方法，通过采用特殊的仪器及分析模式，一方面使得复杂的碳水化合物(胆碱、甜菜碱、氧化三甲胺等)的分析变得更高效，加强了梯度兼容性，提高了检测的准确度；另一方面通过对质谱参数进行精心设置，并结合正负离子模式，成功得到了分离度高、碎片丰富的谱图和特征碎片离子，提高了检测的灵敏度。此外，本申请中利用各种物质上多种作用力的共同作用最终提高了目标化合物的分离效果，使得信噪比高，进一步提高了检测的灵敏度；同时，由于本专利技术采用色谱质谱联用法，色谱能够对目标分析物进行有效的分离，并且质谱的灵敏度更高，能够在更少的样本中得到更准确的结果，而且能够同时检测到TMAO及其相关代谢产物，从而为疾病的诊断、治疗和预防提供更多的线索。附图说明图1为标准溶液的离子色谱图。图2为样本溶液的离子色谱图。符号说明：1代表氧化三甲胺；2代表胆碱；3代表肌酸酐；4代表甜菜碱；5代表L-肉碱。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术提供技术方案中的技术特征作进一步清楚、完整的描述，并非对其保护范围的限制。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本专利技术所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。本专利技术中的词语“优选的”、“更优选的”、“最优选的”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本专利技术实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。此外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本专利技术的范围之外。单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。为了解决上述问题，本专利技术第一个方面提供了一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法，包括以下步骤：1)代谢物提取：将处理后的样本溶液离心，取上清液，备用；2)标准溶液配制：分别配制各目标化合物的单标中间液，再将各单标中间液混合、稀释，配制成外标混合液，依次稀释该外标混合液，得一系列标准溶液；3)上机检测：设置液相色谱和质谱条件，进行上机检测。步骤1)代谢物提取本专利技术所述的代谢物提取是指对样本进行处理，得到处理后的样本溶液，再将处理后的样本溶液进行离心，取上清液，备用。本专利技术对所述的样本没有特别的限制，只要是含有TMAO而不影响本专利技术目的即可，可以是人的血浆样本，也可以是取自哺乳动物、植物或真菌中。在一种优选的实施方式中，本专利技术所述的样本为血浆样本。在一种优选的实施方式中，本专利技术所述处理后的样本溶液中包括内标混合液。〈内标混合液〉本专利技术所述的内标是指各目标化合物对应的同位素化合物。本专利技术所述的目标化合物为肌酸酐、胆碱、甜菜碱、氧化三甲胺和L-肉碱，其所对应的同位素化合物分别为肌酸酐-(甲基-d3)、氯化胆碱-(三甲基-d9)、甜菜碱-(三甲基-d9)、三甲胺-d9N-氧化物、L-肉碱-(三甲基-d9)。所述的肌酸酐(Creatinine)，又称2-氨基-1,5-二氢-1-甲基-4H-咪唑啉-4-酮、肌氨基酐、缩水肌肉素、2-氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮、肌酸-DL-酒石酸(葡萄酸)1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺，分子式为C4H7N3O，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)代谢物提取：将处理后的样本溶液离心，取上清液，备用；/n2)标准溶液配制：分别配制各目标化合物的单标中间液，再将各单标中间液混合、稀释，配制成外标混合液，依次稀释该外标混合液，得一系列标准溶液；/n3)上机检测：设置液相色谱和质谱条件，进行上机检测；/n所述液相色谱的流动相A相选自甲酸铵、甲酸铵水溶液、甲酸、甲酸水溶液中的一种或几种。/n

【技术特征摘要】
1.一种TMAO及其相关代谢产物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)代谢物提取：将处理后的样本溶液离心，取上清液，备用；
2)标准溶液配制：分别配制各目标化合物的单标中间液，再将各单标中间液混合、稀释，配制成外标混合液，依次稀释该外标混合液，得一系列标准溶液；
3)上机检测：设置液相色谱和质谱条件，进行上机检测；
所述液相色谱的流动相A相选自甲酸铵、甲酸铵水溶液、甲酸、甲酸水溶液中的一种或几种。


2.根据权利要求1所述的TMAO及其相关代谢产物的检测方法，其特征在于，所述处理后的样本溶液中包括内标混合液。


3.根据权利要求1所述的TMAO及其相关代谢产物的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的流动相A相为甲酸铵水溶液和甲酸水溶液。


4.根据权利要求1所述的TMAO及其相关代谢产物的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的流动相B相为乙腈。


5.根据权利要求1所述的TMAO及其相关代谢产物的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的梯度洗脱条件为：
0-1min：流动相A为10％→10％，流动相B为90％→90％；
1-6.5min：流动相A为10％→29.5％，流动相B为90％→70.5％；
6.5-8min：流动相A为29.5％→50％，流动相B为70.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓军亮，楼格尔，钟召赟，黄颖瑜，秦欢欢，王剑锋，王琪，杜杰，刘志鹏，周雪敏，
申请(专利权)人：上海阿趣生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31