雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法技术

本发明专利技术提供了一种雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法，以0.1mg.mL

Determination of triptolide a in Tripterygium Wilfordii and its preparation Tripterygium wilfordii polyglycoside tablets

【技术实现步骤摘要】
雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法
本专利技术涉及一种雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法，属于中药材和药品质量控制的

技术介绍
雷公藤(TripterygiμmwilfordiiHook.f.)系卫矛科(Celastraceae)雷公藤属多年生藤本植物，药用部位为全根或去皮根木质部。现代药理及临床研究发现，雷公藤具有抗炎免疫调节、抗肿瘤及抗生育、抗氧化，抗HIV病毒和对阿尔茨海默病有治疗效果等多种生物活性。雷公藤多苷是其根经提取精制的有效部位混合物，是我国首先研究利用的抗炎免疫调节中药提取物。雷公藤多苷片与其他雷公藤制剂相比具有用量小、不良反应少等优点，早在1984年就投入临床使用，广泛应用于治疗麻风、类风湿性关节炎、自身免疫性肝炎、肾病综合征、白塞综合征及皮肤病等疾病，疗效显著。雷公藤药材及其雷公藤多苷片含有许多有效成分，具有其他很多药物无法比拟的效果，雷公藤内酯甲作为其活性成分之一，目前《卫生部药品标准·中药成方制剂(第十七册)》和现行标准为国家食品药品监督管理局国家药品标准WS3－B-3350－98－2011，均以雷公藤内酯甲的含量作为控制指标。雷公藤及其雷公藤多苷片成分非常复杂，且雷公藤内酯甲紫外吸收较弱，雷公藤药材或雷公藤多苷片提取物直接进样分析，难以检测到雷公藤内酯甲色谱峰。已有文献报道采用中性氧化铝柱，硅胶柱等洗脱后结合薄层扫描法，紫外高效液相法或直接使用蒸发光散射测定器，液质联用进行含量测定。但薄层扫描法定量重现性差，准确度低；使用中性氧化铝柱等操作复杂，容易将少量样品吸附到固体载体上，难以从基体中分离出来，造成含量分析存在一定误差。直接使用蒸发光散射测定器，雷公藤内酯甲的峰分离不理想，很难进行准确的含量测定。液液分配色谱法(Liquid-liquidchromatography,LLC)原理是基于样品在两种互不混溶的溶剂之间的分配作用，溶质中各组分在通过两溶剂相过程中因分配系数不同而得以分离,是一种不用固态支撑体的全液体色谱方法。与其他传统分离方法相比，液液分配色谱具有仪器价格低廉，性能可靠，易于操作，分离速度快、溶剂消耗低、回收率高等优点，已被应用于生化、生物工程、医药、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品的众多领域。目前，液液分配色谱多用于某种或多种物质的分离纯化，但将其作为样品前处理技术富集复杂样品中含量相对较小的目标组分的研究尚未有相关报道。因此，有必要建立一种操作简单、快速、有效的雷公藤内酯甲定量分析方法，用于雷公藤药材及制剂的分析。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题，本专利技术设计的目的在于提供一种应用液液分配色谱富集雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲并通过高效液相色谱检测的方法。本专利技术通过以下技术方案加以实现：本专利技术以雷公藤内酯甲为对照品，通过溶剂系统正己烷、乙酸乙酯、乙醇和水的建立并优化获得了相应体积比范围，使雷公藤内酯甲在溶剂系统中的分配系数K在0.5-2之间，通过对液液分配色谱仪分离柱的旋转速度的控制和流动相流速的控制，结合高效液相色谱富集并检测雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的方法。进一步，较为具体的，所述的雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法，按照如下步骤进行：(1)雷公藤内酯甲对照品溶液的制备：精密称取雷公藤内酯甲的对照品适量，用乙醇溶解，并稀释成含雷公藤内酯甲0.1mg.mL-1的对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：①溶剂系统的配制：将正己烷、乙酸乙酯、乙醇及水按体积比2～4:1～3:2～4:1～3混合，然后剧烈振摇5～10min，然后置于分液漏斗中，静置分层，分层后上相溶液作为固定相，下相溶液作为流动相，超声波脱气10～20min；②样品的粗提：取雷公藤多苷片20片研细，精密称取1.5g，加入30～100mL乙酸乙酯，超声处理30～60min，用适量乙酸乙酯分次洗涤，合并滤液和洗液并蒸干，得到残渣，然后将残渣用10mL上相溶液和10mL下相溶液溶解，超声溶解脱气后作为分离样品溶液备用；或将雷公藤药材粉碎(过四号筛)，取5～15.0g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入乙酸乙酯超声处理3次，每次乙酸乙酯的加入量为200mL，超声时间为30min，然后过滤并合并三次滤液，浓缩近干，得到残渣；然后将残渣用10mL上相溶液和10mL下相溶液溶解，超声溶解脱气后作为分离样品溶液备用；③样品的富集：将液液分配色谱分离柱填满固定相，开启速度控制器，控制转速为700～800rmp，设置柱温为25℃，以1～3mL/min的流速将流动相泵入柱内，待整个固定相-流动相体系达到流体动力学平衡，即待色谱柱出口不再有固定相流出时，将步骤②制备的分离样品溶液通过进样阀进样，根据高效液相色谱法测出雷公藤内酯甲的保留时间，收集与保留时间为对应的流出液，蒸干，残渣用乙腈溶解，转移至2～10mL的容量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，过0.22μm的滤膜，得到的滤液即为供试品溶液；(3)高效液相色谱方法测定雷公藤内酯甲的含量：色谱条件：十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈：0.1％磷酸水＝90～60：10～40；测定波长为210nm；流速：1.0mL·min-1；检测器：紫外；柱温：35℃；进样量：20μL；测定：分别精密吸取所述的对照品溶液和所述的供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定并记录色谱图，计算得到雷公藤内酯甲的含量；所述的雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的含量不得少于0.1mg/g。本专利技术将液液分配色谱作为前处理技术富集雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲。进一步，所述的正己烷、乙酸乙酯、乙醇、水体积比优选为3：2：3：2，富集的样品杂质含量相对较少，符合含量测定的要求。进一步，优选的，本案所述的超声参数为：功率300W，频率40kHz。本专利技术收集保留时间为137-170min的液液分配色谱的流出液。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过液液分配色谱对雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片进行前处理，富集雷公藤内酯甲，再通过高效液色谱法进行含量检测。该方法操作过程简单，专属性强，重现性好，分离成本大大降低，分离效果好，产品回收率高，样品用量少，稳定性好，精密度高，定性、定量准确度高，能够对雷公藤药材及雷公藤多苷片的品质进行有效评价。附图说明图1雷公藤内酯甲线性回归方程；图2雷公藤多苷片的液液分配色谱图；图3雷公藤药材的液液分配色谱图；图4雷公藤多苷片未处理前的高效液相色谱图；图5雷公藤内酯甲对照品高效液相色谱图；图6雷公藤多苷片供试品的高效液相色谱图；图7雷公藤药材供试品的高效液相色谱图。具体实施方式以下结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步的阐述，应当理解此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例11、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法，其特征在于：所述的方法按照如下步骤进行：/n(1)雷公藤内酯甲对照品溶液的制备：/n精密称取雷公藤内酯甲的对照品适量，用乙醇溶解，并稀释成含雷公藤内酯甲0.1mg.mL

【技术特征摘要】
1.一种雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法，其特征在于：所述的方法按照如下步骤进行：
(1)雷公藤内酯甲对照品溶液的制备：
精密称取雷公藤内酯甲的对照品适量，用乙醇溶解，并稀释成含雷公藤内酯甲0.1mg.mL-1的对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备：
①溶剂系统的配制:将正己烷、乙酸乙酯、乙醇及水按体积比2～4:1～3:2～4:1～3混合，然后剧烈振摇5～10min，然后置于分液漏斗中，静置分层，分层后上相溶液作为固定相，下相溶液作为流动相，超声波脱气10～20min；
②样品的粗提：取雷公藤多苷片20片研细，精密称取1.5g，加入30～100mL乙酸乙酯，超声处理30～60min，用适量乙酸乙酯分次洗涤，合并滤液和洗液并蒸干，得到残渣，将所述的残渣用10mL上相溶液和10mL下相溶液溶解，超声溶解脱气后作为分离样品溶液备用；
或将雷公藤药材粉碎过四号筛，取5～15.0g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入乙酸乙酯超声处理3次，每次乙酸乙酯的加入量为200mL，超声时间为30min，然后过滤并合并三次滤液，浓缩近干，得到残渣；然后将所述的残渣用10mL上相溶液和10mL下相溶液溶解，超声溶解脱气后作为分离样品溶液备用；
③样品的富集：将液液分配色谱分离柱填满固定相，开启速度控制器，控制转速为700～800rmp，设置柱温为25℃，以1～2mL/min的流速将流动相泵入柱内...

【专利技术属性】
技术研发人员：童胜强，赵姗姗，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33