抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体及其用途制造技术

本披露提供了抗PD‑L1/抗LAG3双特异性抗体，其能够有效阻断在PD‑L1与其受体PD‑1之间以及在LAG3与其配体(例如MHC II类分子和FGL1)之间的相互作用。该双特异性抗体可以对PD‑L1蛋白(例如人PD‑L1蛋白)和LAG3蛋白(例如人LAG3蛋白)二者均具有高结合亲和力。还提供了对单独的该PD‑L1或LAG3蛋白具有特异性的抗体和片段，或具有额外的对一种或多种其他抗原的特异性的抗体和片段。

Anti PD-L1 / anti Lag3 bispecific antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体及其用途本专利技术要求于2018年8月21日提交的PCT/CN2018/101547和2019年5月22日提交的PCT/CN2019/087943的优先权，将其内容以其全文并入本文。
本专利技术涉及抗体领域，具体涉及抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体及其用途。
技术介绍
程序性死亡配体1(PD-L1)，也称为分化簇274(CD274)或B7同系物1(B7-H1)，是一种40kDa的1型跨膜蛋白，据信其在特定事件(例如妊娠、组织同种异体移植、自身免疫疾病和其他疾病状态如肝炎)期间在抑制免疫系统的过程中起主要作用。PD-L1与PD-1或B7.1的结合传递抑制性信号，该抑制性信号减少CD8+T细胞在淋巴结处的增殖，并且对该PD-1的补充也能够通过进一步由基因Bcl-2的更低调节介导的细胞凋亡来控制外来抗原特异性T细胞在淋巴结中的积累。已经显示PD-L1的上调可以允许癌症逃避宿主免疫系统。对来自肾细胞癌患者的肿瘤样本的分析发现，PD-L1的高肿瘤表达与增加的肿瘤侵袭性和增加的死亡风险相关。许多PD-L1抑制剂作为免疫肿瘤学疗法正在开发中，并且在临床试验中正在展现出良好的结果。除了治疗癌症外，PD-L1抑制也在治疗感染性疾病方面显示出前景。在细胞内感染的小鼠模型中，单核细胞增生李斯特氏菌(L.monocytogenes)诱导T细胞、NK细胞和巨噬细胞中的PD-L1蛋白表达。PD-L1阻断(例如使用阻断抗体)导致感染小鼠的死亡率增加。阻断减少由巨噬细胞产生的TNFα和一氧化氮，减少由NK细胞产生的颗粒酶B，并且降低单核细胞增生李斯特氏菌抗原特异性CD8T细胞(但不是CD4T细胞)的增殖。此证据表明PD-L1在细胞内感染中充当阳性共刺激分子。淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)(也称为CD223)是免疫球蛋白(Ig)超家族的成员，与CD4密切相关，并且不同地影响T细胞功能。LAG-3在激活的T细胞、耗竭性T细胞、肿瘤浸润T细胞和调节性T细胞(Treg)上表达。在与主要组织相容性复合物2(MHCII类)结合后，LAG-3/MHCII类相互作用导致T细胞增殖、激活和内稳态的负调节。与细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)、程序性细胞死亡配体-1(PD-L1)和程序性细胞死亡-1(PD-1)类似，LAG-3代表癌症中的重要免疫检查点。LAG-3不仅在激活/耗竭性效应T细胞上表达，还在调节性T细胞上表达。LAG3拮抗作用不仅可以促进效应T细胞的激活，还可以阻断调节性T细胞的抑制功能。因此，LAG-3代表用于癌症免疫疗法的有希望的靶标，并且临床前证据表明抗LAG-3抗体可以促进抗肿瘤反应。鉴于上述情况，需要开发以刺激可抑制各种癌症和肿瘤细胞生长的免疫应答的方式调节LAG-3活性以及可用于治疗自身免疫疾病、炎性疾病或病毒性疾病的新颖药剂。
技术实现思路
本披露提供了抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其能够有效阻断在PD-L1与其受体PD-1之间以及在LAG3与其配体(例如MHCII类分子)之间的相互作用。该双特异性抗体可以对PD-L1蛋白(例如人PD-L1蛋白)和LAG3蛋白(例如人LAG3蛋白)二者均具有高结合亲和力。抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体可以包括能够特异性地识别和/或结合PD-L1蛋白的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(作为PD-L1靶向部分)、以及能够特异性地识别和/或结合LAG3蛋白的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(作为LAG3靶向部分)。抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体可以包括抗PD-L1抗体或其抗原结合片段作为PD-L1靶向部分。在一个实施例中，双特异性抗体中包含的抗PD-L1抗体或其片段可以特异性地结合PD-L1(例如人PD-L1)蛋白的免疫球蛋白C(IgC)结构域。在一些实施例中，IgC结构域由人PD-L1蛋白的氨基酸残基133-225组成。在一些实施例中，抗PD-L1抗体或其片段可以结合人PD-L1蛋白的氨基酸残基Y134、K162和N183中的至少一个。在一些实施例中，抗PD-L1抗体或其片段不与PD-L1蛋白的免疫球蛋白V(IgV)结构域结合，并且例如，IgV结构域由人PD-L1蛋白的氨基酸残基19-127组成。例如，人PD-L1蛋白可以选自下组，该组由GenBank登录号NP_001254635.1、NP_001300958.1、NP_054862.1等表示的蛋白质组成，但是可以不限于此。这些抗PD-L1抗体可用于治疗目的，例如治疗各种类型的癌症、感染(炎症)等，并且还可用于诊断和预后目的。在一个实施例中，抗PD-L1抗体或其片段能够对人PD-L1蛋白具有特异性。抗PD-L1抗体或其片段可以包含：(1)VHCDR1，其具有选自由SEQIDNO:1和SEQIDNO:61-67组成的组的氨基酸序列；(2)VHCDR2，其具有选自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:68-77和525-527组成的组的氨基酸序列；(3)VHCDR3，其具有选自由SEQIDNO:3、SEQIDNO:78-90和SEQIDNO:513-519组成的组的氨基酸序列；(4)VLCDR1，其具有选自由SEQIDNO:4、SEQIDNO:91-92和SEQIDNO:520-521组成的组的氨基酸序列；(5)VLCDR2，其具有选自由SEQIDNO:5和SEQIDNO:93-105组成的组的氨基酸序列；以及(6)VLCDR3，其具有选自由SEQIDNO:6、SEQIDNO:106-111和SEQIDNO:522-524组成的组的氨基酸序列。例如，抗PD-L1抗体或其片段可以包含：VHCDR1，其具有SEQIDNO:1的氨基酸序列；VHCDR2，其具有SEQIDNO:2的氨基酸序列；(3)VHCDR3，其具有SEQIDNO:3或515的氨基酸序列；VLCDR1，其具有SEQIDNO:4的氨基酸序列；VLCDR2，其具有SEQIDNO:5的氨基酸序列；以及VLCDR3，其具有SEQIDNO:6的氨基酸序列。抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体可以包括抗LAG3抗体或其抗原结合片段作为LAG3靶向部分。在一个实施例中，抗LAG3抗体或其片段可以特异性地结合LAG3(例如人LAG3)蛋白；例如，抗LAG3抗体或其片段可以结合LAG-3的细胞外结构域。例如，本文所述的抗LAG3抗体或其片段可除了抑制LAG-3蛋白与MHCII类分子的结合还可抑制LAG-3蛋白与半乳糖凝集素-3(LGALS3)和C型凝集素结构域家族4成员G(LSECtin)蛋白的结合，考虑到现有的抗LAG-3抗体仅显示出对与MHCII类分子结合的抑制作用，这是本披露的抗LAG3抗体或其片段的独特且相当重要的作用。在一些实施例中，本披露的抗体及其片段能够逆转调节性T细胞(Treg)对效应T细胞(Teff)的抑制作用。在一些实施例中，本披露的抗体及其片段能够抑制LAG3与纤维蛋白原样蛋白1(FGL1)之间的结合。例如，人LAG3蛋白可以选自下组，该组由GenB本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其包括抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以及抗LAG3抗体或其抗原结合片段，其中/n该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段能够特异性地结合人程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白的免疫球蛋白C(Ig C)结构域，其中该Ig C结构域由氨基酸残基133-225组成；并且/n该抗LAG3抗体或其抗原结合片段包含：VH CDR1，其具有选自由SEQ ID NO:116-117、354和453-460组成的组的氨基酸序列；VH CDR2，其具有选自由SEQ ID NO:118-119、355和461-467组成的组的氨基酸序列；VH CDR3，其具有选自由SEQ ID NO:120-160、356和468-475组成的组的氨基酸序列；VL CDR1，其具有选自由SEQ ID NO:163-195、229、357和490组成的组的氨基酸序列；VL CDR2，其具有选自由SEQ ID NO:196-217、358和476-483组成的组的氨基酸序列；和VL CDR3，其具有选自由SEQ ID NO:218-228、230-253、359和484-489组成的组的氨基酸序列。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180821 CN PCT/CN2018/101547;20190522 CN PCT/CN201.一种抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其包括抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以及抗LAG3抗体或其抗原结合片段，其中
该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段能够特异性地结合人程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白的免疫球蛋白C(IgC)结构域，其中该IgC结构域由氨基酸残基133-225组成；并且
该抗LAG3抗体或其抗原结合片段包含：VHCDR1，其具有选自由SEQIDNO:116-117、354和453-460组成的组的氨基酸序列；VHCDR2，其具有选自由SEQIDNO:118-119、355和461-467组成的组的氨基酸序列；VHCDR3，其具有选自由SEQIDNO:120-160、356和468-475组成的组的氨基酸序列；VLCDR1，其具有选自由SEQIDNO:163-195、229、357和490组成的组的氨基酸序列；VLCDR2，其具有选自由SEQIDNO:196-217、358和476-483组成的组的氨基酸序列；和VLCDR3，其具有选自由SEQIDNO:218-228、230-253、359和484-489组成的组的氨基酸序列。


2.如权利要求1所述的抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其中该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段能够结合该PD-L1蛋白的氨基酸残基Y134、K162或N183中的至少一个。


3.如权利要求2所述的抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其中该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段能够结合该PD-L1蛋白的氨基酸残基Y134、K162和N183。


4.如权利要求1-3中任一项所述的抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其中该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段不结合该PD-L1蛋白的免疫球蛋白V(IgV)结构域，其中该IgV结构域由氨基酸残基19-127组成。


5.如权利要求1-4中任一项所述的抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其中该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以及该抗LAG3抗体或其抗原结合片段各自独立地是嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。


6.一种抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其包括抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以及抗LAG3抗体或其抗原结合片段，其中
该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含：
(1)VHCDR1，其具有选自由SEQIDNO:1和SEQIDNO:61-67组成的组的氨基酸序列；
(2)VHCDR2，其具有选自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:68-77和525-527组成的组的氨基酸序列；
(3)VHCDR3，其具有选自由SEQIDNO:3、SEQIDNO:78-90和SEQIDNO:513-519组成的组的氨基酸序列；
(4)VLCDR1，其具有选自由SEQIDNO:4、SEQIDNO:91-92和SEQIDNO:520-521组成的组的氨基酸序列；
(5)VLCDR2，其具有选自由SEQIDNO:5和SEQIDNO:93-105组成的组的氨基酸序列；以及
(6)VLCDR3，其具有选自由SEQIDNO:6、SEQIDNO:106-111和SEQIDNO:522-524组成的组的氨基酸序列，并且
该抗LAG3抗体或其抗原结合片段包含：
(i)VHCDR1，其具有选自由SEQIDNO:116-117、354和453-460组成的组的氨基酸序列；
(ii)VHCDR2，其具有选自由SEQIDNO:118-119、355和461-467组成的组的氨基酸序列；
(iii)VHCDR3，其具有选自由SEQIDNO:120-160、356和468-475组成的组的氨基酸序列；
(iv)VLCDR1，其具有选自由SEQIDNO:163-195、229、357和490组成的组的氨基酸序列；
(v)VLCDR2，其具有选自由SEQIDNO:196-217、358和476-483组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)VLCDR3，其具有选自由SEQIDNO:218-228、230-253、359和484-489组成的组的氨基酸序列。


7.如权利要求6所述的抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其中该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以及该抗LAG3抗体或其抗原结合片段各自独立地是嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。


8.如权利要求8所述的抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其中该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以及该抗LAG3抗体或其抗原结合片段是人源化抗体。


9.如权利要求6-8中任一项所述的抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其中该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区包含选自由SEQIDNO:7-26、113、493、495、497、499、501、503、505、507、509和511组成的组的氨基酸序列或与选自由SEQIDNO:7-26、113、493、495、497、499、501、503、505、507、509和511组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的多肽。


10.如权利要求6-9中任一项所述的抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其中该抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，该轻链可变区包含选自由SEQIDNO:27-33、494、496、498、500、502、504、506、508、510和512组成的组的氨基酸序列或与选自由SEQIDNO:27-33、494、496、498、500、502、504、506、508、510和512组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。


11.如权利要求6-10中任一项所述的抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其中该抗LAG3抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区包含选自由SEQIDNO:254-302、352、360-373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403、405、407、409、411、413、415、417、419、421、423、425、427、429、431、433、435、437、439、441、443、445、447、449、451和491组成的组的氨基酸序列或与选自由SEQIDNO:254-302、352、360-373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403、405、407、409、411、41...

【专利技术属性】
技术研发人员：朴银英，李良順，郑义静，金荣光，金衍周，朴泳燉，李尙勋，刘原圭，郑在浩，方磊，蒋雯卿，
申请(专利权)人：天境生物，ABL生物有限公司，
类型：发明
国别省市：开曼群岛;KY