一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法技术

一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法，其方法包括如下步骤：将预培养后的微藻细胞培养液，导流至照射在紫外线光光照强度为20‑100μmol/(m

A culture method of microalgae under UV stress

【技术实现步骤摘要】
一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法
本专利技术属于微藻培养
，具体涉及一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法。
技术介绍
微藻作为地球上的先锋物种，是一种利用光能、二氧化碳和水在其细胞内合成各种有机物的自养生物，对环境的适应能力极强。这种极强的适应能力与微藻细胞在长期进化过程中形成的高效代谢路径和大量产生并积累的各类损伤修复活性物质息息相关。已有大量的研究报道指出微藻细胞在胁迫培养条件下，所产生并积累的超氧化物歧化酶、多不饱和脂肪酸、色素等具有损伤修复活性的物质远高于正常培养的微藻细胞。紫外线是一种波长范围在200nm－280nm的光波，自然光中常含有极少量的紫外光波。少量的紫外线对微藻细胞的生长具有调节作用，但当其剂量到达一定程度后，则对微藻细胞生长产生损伤和不利影响。已有相当多的研究指出中低剂量、短时间的紫外线胁迫能够刺激微藻细胞产生胁迫适应机制，该机制能使微藻细胞大量产生并积累各类损伤修复活性物质。而这些损伤修复活性物质经提取纯化以后不但可用于医疗和营养保健品，而且已经越来越多的应用于化妆和护肤品行业，具有广阔的市场应用前景。不同藻类在不同紫外线强度、不同照射时间和不同照射后培养条件下，其细胞包内损伤修复活性物质的产生和积累量具有显著性差异。目前并没有利用紫外线胁迫，对微藻进行循环流式胁迫，进而使其大量产生并积累损伤修复活性物质的方法公开。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是：提供一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法，通过此方法能够实现微藻细胞在紫外线胁迫条件下连续、均匀、高效生长，并能大量提高微藻细胞中超氧化物歧化酶、多不饱和脂肪酸等损伤修复活性物质含量，是一种生产制造超氧化物歧化酶、多不饱和脂肪酸等损伤修复活性物质的好方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法。本专利技术的一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法，其所述方法包括如下步骤：将预培养后的微藻细胞培养液，导流至照射在紫外线光光照强度为20-100μmol/(m2·s)的石英圆管中，再导流回原微藻液培养容器，如此不断循环，通气培养10-14d后即得。优选预培养后的微藻细胞培养液中细胞浓度在1.0x106-1.2x106个/L范围内。优选所述预培养后的微藻细胞培养液是以衣藻或小球藻作为藻种进行培养。优选所述预培养微藻细胞培养液的方法包括如下步骤：配制TAP培养基，灭菌后向其中接入微藻细胞，将接种后的培养液置于25℃，日光灯光照强度为100μmol/(m2·s)，转速为20rpm的摇床光照培养箱中，培养6-8天，即可获得微藻细胞预培养液。优选整个通气培养过程中通入的气体为无菌空气。优选培养总时间依据微藻细胞培养液种类不同而不同。采用衣藻细胞培养液时，通气培养的时间为10天；采用小球藻细胞培养液时，培养的总时间为14天。优选所述石英圆管为无色透明石英材质，透光率高于95％，厚度小于0.7mm，圆管的总长度(cm)＝微藻细胞液初始添加量(ml)/扁管横截面积(cm2)*0.5。优选所述石英圆管的管身为平行并排弯折而成。有益效果1、本专利技术的微藻细胞培养液采用循环的方式不断重复流经紫外线照射的石英圆管，为藻细胞提供了紫外线胁迫照射和非紫外线受照的交替循环机会，有利于藻细胞内损伤修复物质的大量生产和积累。2、本专利技术的微藻细胞培养液采用流动的方式经过紫外线照射的石英圆管，避免了藻细胞沉淀造成的细胞活性下降，紫外光受照不均匀的问题。3、本专利技术采用石英材质圆管能提高紫外光透过率，提高能源使用效率，节约能源。总之，本专利技术的一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法，可实现微藻细胞在紫外线胁迫和非紫外线受照条件下连续、均匀、高速生长，并能大量提高微藻细胞中超氧化物歧化酶、多不饱和脂肪酸等损伤修复活性物质含量，是一种生产制造多种损伤修复活性物质的好方法。附图说明图1分组培养时甲、乙三角瓶连接示意图图2石英圆管的平行并排弯折示意图附图标记1—口1，2—口2，3—口3，4—口4，5—口5，6—口6。具体实施方式下面结合说明书附图介绍本专利技术的较佳实施例，举例证明本专利技术可以实施，通过向本领域中的技术人员完整介绍本专利技术，使其
技术实现思路
更加清楚和便于理解。本专利技术可以通过许多不同形式的实施例来得以体现，其保护范围并非仅限于文中提到的实施例，本文的附图和说明本质上是举例说明而不是限制本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的原材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到或已公开。下述实施例1和2中的石英圆管采购定制于英泰石英制品加工厂。均为无色透明石英材质，透光率为99％，厚度小于0.6mm，总长度为160cm(石英圆管总长度＝1000/π*12*0.5≈160cm)，按照图2方式平行并排弯折而成。实施例1：采用衣藻(sp.cw15，购于美国杜克大学藻种库)细胞作为藻种进行循环流式紫外线胁迫微藻培养，具体步骤如下：1.获得衣藻细胞预培养液。配制TAP培养基2L(TAP培养基配方如下表1所示)，灭菌后向其中接入衣藻(sp.cw15)藻细胞，将接种后的培养液置于25℃，日光灯光照强度为100μmol/(m2·s)，转速为20rpm的摇床光照培养箱中，培养7天，即可获得衣藻细胞预培养液。表1TAP培养基配方化合物终浓度NH4Cl7.0mmol/lCaCl2·2H2O0.45mmol/lMgSO4·7H2O0.83mmol/lK2HPO4(无水)1.65mmol/lKH2PO4(无水)1.05mmol/lH2NC(CH2OH)320.0mmol/l冰醋酸1.0ml/lNaEDTA·2H2O0.134mmol/lZnSO4·7H2O0.136mmol/lH3BO30.184mmol/lMnCl2·4H2O40.0umol/lFeSO4·7H2O32.9umol/lCoCl2·6H2O12.3umol/lCuSO4·6H2O10.0umol/l(NH4)6Mo7O24·4H2O0.928umol/l2.检测预培养液中衣藻细胞浓度。摇匀衣藻细胞预培养液后采用血球计数板在显微镜下进行计数，计算预培养液中衣藻细胞浓度为1.1x106个/L。3.分组培养。按照图1将甲、乙两组装置安装好后，通过密闭橡胶管分别将甲组的口1与图2中石英圆管的进口相连，将甲组的口2与石英本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：将预培养后的微藻细胞培养液，导流至照射在紫外线光光照强度为20-100μmol/(m

【技术特征摘要】
1.一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：将预培养后的微藻细胞培养液，导流至照射在紫外线光光照强度为20-100μmol/(m2·s)的石英圆管中，再导流回原微藻液培养容器，如此不断循环，通气培养10-14d后即得。


2.根据权利要求1所述的一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法，其特征在于预培养后的微藻细胞培养液中细胞浓度在1.0x106-1.2x106个/L范围内。


3.根据权利要求2所述的一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法，其特征在于所述预培养后的微藻细胞培养液是以衣藻或小球藻作为藻种进行培养。


4.根据权利要求3所述的一种循环流式紫外线胁迫微藻培养方法，其特征是所述预培养微藻细胞培养液的方法包括如下步骤：配制TAP培养基，灭菌后向其中接入微藻细胞，将接种后的培养液置于25℃，日光灯光照强度为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：高翔，周维成，杨婷，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33