一种芝麻来源的ACE抑制肽、制备方法及其在制备降血压药物方面的应用技术

本发明专利技术提供了一种芝麻ACE抑制肽，属于生物小分子活性肽领域，具体涉及一种芝麻二肽，该二肽由半胱氨酸和酪氨酸组成，其序列为：Cys‑Tyr。本发明专利技术芝麻二肽不仅可以通过蛋白酶解、分离纯化获得，而且可以通过化学固相合成的方法进行人工合成。本发明专利技术通过测定ACE抑制活性发现：该活性肽具有很强的ACE抑制活性，属于食源性降压肽，分子量小，具有易吸收、溶解度好、低致敏性等特点，可以用于制备降血压药物，作为添加剂或者活性药物添加至食品、医药、保健品、化妆品、日化用品等多种行业和领域，具有广阔的应用开发前景。

A sesame derived ACE inhibitory peptide, its preparation and application in the preparation of antihypertensive drugs

【技术实现步骤摘要】
一种芝麻来源的ACE抑制肽、制备方法及其在制备降血压药物方面的应用
本专利技术属于生物小分子活性肽领域，具体涉及一种来源于芝麻蛋白的ACE抑制肽CY、制备方法及其在制备降血压药物、保健品、食品、化妆品、日化用品等中的应用。
技术介绍
高血压是世界上死亡率最高的疾病之一，是冠心病、中风、心力衰竭的主要发病因素。近年来高血压的发病率不断提高，且趋于年轻化。因此，高血压的防治已成为全球医学界的一项艰巨任务。血管紧张素转化酶（ACE）对血压起着重要的调节作用。目前，许多合成的ACE抑制剂如卡托普利、依那普利可能诱发皮肤疹、、腹泻、咳嗽和头晕等不良症状，因此从天然来源的食物中提取具有降血压功能的ACE抑制剂具有重要的社会意义和应用价值。生物活性肽是蛋白质水解释放或由生物工程等方法制得的2-20个氨基酸组成的多肽类物质。在加工、酶解、发酵或胃肠消化过程中，食物可以释放生物活性肽。大量研究证实，食源性活性肽具有抗疲劳、降血压、提高免疫力、降血脂、抗菌、抗病毒、激素调节等多种生理功能，且易被人体消化吸收，溶解性好，食用安全性高，是目前热门的研究课题和极具发展前景的活性因子。目前已从牛奶蛋白、大豆蛋白、海洋蛋白、蛋清蛋白等多种食源性蛋白中分离出大量的ACE抑制肽。芝麻（SesamumindicumL.），又称胡麻、脂麻、油麻，是我国重要油料作物之一。目前我国芝麻主要用于生产芝麻油，制油后产生大量的芝麻饼粕，其主要成分为蛋白质。芝麻饼粕中的蛋白大部分直接作为饲料、肥料使用，其蛋白资源没有得到充分利用。因此，芝麻蛋白可以作为活性肽的重要来源，有效利用蛋白资源，为芝麻蛋白深加工提供新途径，实现芝麻加工副产物的高效增值。
技术实现思路
针对人工合成的ACE抑制剂有严重毒副作用，人们对降血压药物的安全性产生忧虑，本专利技术目的在于提供一种芝麻来源的ACE抑制肽，以消除人们对人工合成ACE抑制剂安全性的担忧。该芝麻来源的ACE抑制肽抑制活性高、副作用小、易于分离纯化，且制备工艺简单，在食品、医药、保健品等领域有广阔的市场前景，可应用于制备具有调节血压作用的保健食品或药物。本专利技术还提供了上述芝麻来源的ACE抑制肽的制备方法以及其在制备降血压药物、保健品、食品、化妆品、日化用品等中的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种芝麻来源的ACE抑制肽，该ACE抑制肽由半胱氨酸和酪氨酸两个氨基酸组成，其序列为Cys-Tyr（CY），具有较好的降血压活性功效。上述的芝麻二肽来源于芝麻11S球蛋白储藏前体蛋白2（11S2_SESIN）。本专利技术提供了一种从芝麻蛋白中制备上述ACE抑制肽的方法，其通过蛋白酶解、分离纯化等步骤获取，具体包括以下步骤：1）提取芝麻蛋白：将芝麻饼粕粉碎、溶剂萃取法脱脂，加蒸馏水混匀（将脱脂后的芝麻粕原料与蒸馏水以1g/10mL-25mL的料液比进行混匀）后采用碱溶酸沉法提取蛋白，离心，收集所得沉淀物并冷冻干燥，即为蛋白原料；2）蛋白酶解：将步骤1）所得蛋白原料加蒸馏水混匀获得5-8%的蛋白溶液，中和至中性，然后于90-95℃条件下加热20-30min使其完全变性；用酸将pH值调至1.5-2.2，加入胃蛋白酶酶解3.5-4.5h，再用碱将pH值调至7.6-8.5，加入胰酶酶解5.5-6.5h，酶解结束后中和酶解液，离心、取上清液，4-10℃低温备用；3）分离纯化：将步骤2）所得上清液用100kDa,50kDa,30kDa,10kDa,5kDa以及3kDa不同截留分子量的超滤膜进行超滤，测定不同分子量多肽组分的ACE抑制活性，收集高活性组分（经试验验证，透过3kDa超滤膜对应的活性组分，其ACE抑制活性最高）；然后采用NGC色谱系统对上述高活性组分进一步分离，收集并筛选出高活性的洗脱峰对应的组分，即收集保留时间在7.6-8.2min的组分，浓缩后于-60℃冷冻干燥即得芝麻多肽样品。将该芝麻多肽样品使用Nano-LC-ESI-MS/MS进行质谱鉴定，鉴定到该活性肽的氨基酸序列为：Cys-Tyr。具体的，步骤2）中，胃蛋白酶与蛋白溶液添加量比例为0.40-0.42g：100g，胰酶与蛋白溶液添加量比例为0.40-0.42g：100g，酶解温度为36-38℃。pH值调节时，酸优选用盐酸溶液，碱优选用氢氧化钠溶液。进一步的，步骤2）中，所述胰酶优选由质量比为10:2-4的胰蛋白酶和α-糜蛋白酶混合组成，酶解温度优选控制在37℃。具体的，步骤3）中，NGC色谱系统的条件为：流动相A为含0.1%三氟乙酸的甲醇，流动相B为含0.1%三氟乙酸的超纯水；流速7.5mL/min，流动相A由55%变化至60%，线性梯度洗脱60min；检测波长为220nm，色谱柱为Shim-packGISC18制备柱。本专利技术还提供了上述芝麻来源的ACE抑制肽的制备方法，可以通过人工化学合成制备，如其采用化学固相合成法按照本领域常规技术人工合成ACE抑制肽。本专利技术还提供了上述芝麻来源的ACE抑制肽在制备降血压药物、保健品、食品、化妆品、日化用品中的应用，如其可以作为添加剂或者活性药物添加至食品、医药、保健品、化妆品、营养强化剂、日化用品等多种行业和领域，具有广阔的应用开发前景。和现有技术相比，本专利技术的有益效果：1）本专利技术所用的原料为芝麻，来源广泛，有效利用芝麻蛋白资源，对保护环境、促进社会经济的可持续发展有重要意义；2）本专利技术提供的芝麻活性肽分子量小，易吸收，易于分离纯化，且具有强ACE抑制活性；3）本专利技术提供的芝麻小分子肽活性显著，安全性高，可用于开发治疗高血压的相关保健品或者药物，在食品、保健品、医药等许多领域有广阔的市场前景。附图说明图1为实施例1中NGC色谱系统分离色谱图；图2为实施例1提取所得芝麻多肽样品在Nano-LC-ESI-MS/MS中的二级质谱图；图3为实施例2中人工合成活性二肽CY的HPLC图；图4为实施例2中人工合成活性二肽CY的质谱图；表1为实施例1和2制备所得芝麻二肽CY的ACE抑制活性的IC50值。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的说明，但本专利技术不局限于具体实施例。实施例1一种从芝麻蛋白中制备ACE抑制肽的方法，其具体包括如下步骤：1）芝麻蛋白提取：将芝麻饼粕粉碎，采用索氏抽提器进行脱脂，选用溶剂为石油醚，萃取温度为80℃，脱脂6h。将脱脂后的芝麻粕原料与蒸馏水以1g/20mL的料液比进行混合，室温搅拌60min以混匀。碱溶酸沉法提取蛋白，具体为：用5mol/LNaOH调节pH为11.0，室温搅拌60min，在4℃条件下以5000r/min离心20min，收集上清液后用5mol/LHCl将pH调至4.3，离心，收集蛋白沉淀物，冷冻干燥并在4-10℃储存备用，即为蛋白原料；2）蛋白酶解：将步骤1）所得蛋白原料加蒸馏水搅拌均匀，混合成8%的蛋白溶液，用5mol/LNaOH中和至中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种芝麻来源的ACE抑制肽，其特征在于，该ACE抑制肽由两个氨基酸组成，其序列为Cys-Tyr。/n

【技术特征摘要】
1.一种芝麻来源的ACE抑制肽，其特征在于，该ACE抑制肽由两个氨基酸组成，其序列为Cys-Tyr。


2.一种从芝麻蛋白中制备权利要求1所述ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）提取芝麻蛋白：将芝麻饼粕粉碎、脱脂，加蒸馏水混匀后采用碱溶酸沉法提取蛋白，离心，收集所得蛋白沉淀物并冷冻干燥，即为蛋白原料；
2）蛋白酶解：将步骤1）所得蛋白原料加蒸馏水混匀获得5-8%的蛋白溶液，中和至中性，然后于90-95℃条件下加热20-30min；用酸将pH值调至1.5-2.2，加入胃蛋白酶酶解3.5-4.5h，再用碱将pH值调至7.6-8.5，加入胰酶酶解5.5-6.5h，酶解结束后中和酶解液，离心、取上清液；
3）分离纯化：将步骤2）所得上清液用3kDa的超滤膜进行超滤，然后采用NGC色谱系统进一步分离，收集保留时间在7.6-8.2min的组分，浓缩后冷冻干燥即得。


3.如权利要求2所述从芝麻蛋白中制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤2）中，胃蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：王瑞丹，芦鑫，高锦鸿，贾聪，孙强，黄纪念，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：河南;41