【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于选择性消除和替换造血干细胞的组合物和方法相关申请本申请要求2017年3月13日提交的临时申请USSN62/470,814和2017年12月7日提交的临时申请USSN62/596,062的权益，所述临时申请的内容各自通过引用以其整体并入本文。序列表的并入命名为“POTH-026_001WO_SeqList.txt”的文本文件的内容，其于2018年3月2日创建，文件大小为229KB，通过引用以其整体并入本文。本专利技术的领域本专利技术涉及分子生物学，且更特别地涉及表达选择性靶向造血干细胞(HSC)的嵌合配体受体的细胞，以及制备和使用它们的方法。背景在本领域中对于以下方法存在长期感到、但未满足的需求：在用治疗性HSC组合物替换内源性造血干细胞(HSC)前选择性消除受试者中的这些内源性HSC的方法(例如，在骨髓移植的背景下)。本专利技术提供了选择性消除受试者中的内源性造血干细胞(HSC)的组合物和方法。概述本专利技术提供了消除受试者中的至少一种靶细胞的方法，其包括向受试者施用有效量的包含多种免疫细胞的组合物，其中所述多种中的各免疫细胞表达一种或多种嵌合配体受体(CLR)，所述嵌合配体受体各自特异性结合至少一种靶细胞上的靶配体，其中一种或多种CLR与靶配体的特异性结合活化免疫细胞，且其中活化的免疫细胞诱导靶细胞的死亡。在某些实施方案中，所述方法进一步包括消除多种免疫细胞的步骤。本专利技术提供了移植受试者的免疫系统的方法，其包括：(a)向受试者施用有效量的包含多种免疫细胞的组合物...
【技术保护点】
1.消除受试者中的至少一种靶细胞的方法，其包括向受试者施用有效量的包含多种免疫细胞的组合物，其中所述多种免疫细胞中的各免疫细胞表达一种或多种嵌合配体受体(CLR)，所述嵌合配体受体各自特异性结合至少一种靶细胞上的靶配体，其中一种或多种CLR与靶配体的特异性结合活化免疫细胞，且其中活化的免疫细胞诱导靶细胞的死亡。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170313 US 62/470814;20171207 US 62/5960621.消除受试者中的至少一种靶细胞的方法，其包括向受试者施用有效量的包含多种免疫细胞的组合物，其中所述多种免疫细胞中的各免疫细胞表达一种或多种嵌合配体受体(CLR)，所述嵌合配体受体各自特异性结合至少一种靶细胞上的靶配体，其中一种或多种CLR与靶配体的特异性结合活化免疫细胞，且其中活化的免疫细胞诱导靶细胞的死亡。
2.权利要求1的方法，其进一步包括消除多种免疫细胞的步骤。
3.移植受试者的免疫系统的方法，其包括：
(a)向受试者施用有效量的包含多种免疫细胞的组合物，其中所述多种免疫细胞中的各免疫细胞表达一种或多种嵌合配体受体(CLR)，所述嵌合配体受体各自特异性结合至少一种靶细胞上的靶配体，其中一种或多种CLR与靶配体的特异性结合活化免疫细胞，且其中活化的免疫细胞诱导靶细胞的死亡；
(b)消除多种免疫细胞；和
(c)向受试者施用有效量的包含多种治疗性造血干细胞(HSC)的组合物。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述诱导靶细胞的死亡包括诱导靶细胞的细胞裂解。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述至少一种靶细胞是多种靶细胞。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述至少一种靶细胞或多种靶细胞包含造血干细胞(HSC)。
7.权利要求5或6的方法，其中所述至少一种靶细胞或多种靶细胞包含免疫细胞。
8.权利要求7的方法，其中所述免疫细胞是T淋巴细胞(T细胞)。
9.权利要求8的方法，其中所述T细胞表达CD4或CD8。
10.权利要求8或9的方法，其中所述T细胞是辅助T(TH)细胞。
11.权利要求10的方法，其中所述辅助T细胞(TH)是I型辅助T(TH1)细胞。
12.权利要求10的方法，其中所述辅助T细胞(TH)是2型辅助T(TH2)细胞。
13.权利要求10的方法，其中所述辅助T细胞(TH)是T辅助17(TH17)细胞。
14.权利要求8或9的方法，其中所述T细胞是调节性T(TREG)细胞。
15.权利要求14的方法，其中所述T细胞是诱导的调节性T(iTREG)细胞或天然调节性T(nTREG)细胞。
16.权利要求14的方法，其中所述T细胞是诱导的调节性T(iTREG)细胞。
17.权利要求14的方法，其中所述T细胞是天然调节性T(nTREG)细胞。
18.权利要求8的方法，其中所述免疫细胞是天然杀伤(NK)细胞。
19.权利要求8-18中任一项的方法，其中所述至少一种靶细胞或多种靶细胞包含HSC，其中所述至少一种靶细胞或多种靶细胞进一步包含免疫细胞，且其中所述受试者处于排斥包含多种各自表达一种或多种CLR的免疫细胞的组合物的风险中。
20.权利要求1-19中任一项的方法，其中所述包含多种免疫细胞的组合物包含T细胞或NK细胞。
21.权利要求1-19中任一项的方法，其中所述包含多种免疫细胞的组合物包含T细胞和NK细胞。
22.权利要求1-21中任一项的方法，其中所述包含多种免疫细胞的组合物是同种异体的。
23.权利要求22的方法，其中所述同种异体组合物源自健康供体。
24.权利要求1-21中任一项的方法，其中所述包含多种免疫细胞的组合物是自体的。
25.权利要求24的方法，其中所述受试者具有疾病或病症，且其中所述自体组合物衍生自在发展疾病或病症之前、在从疾病或病症缓解的时段期间或在治疗疾病或病症之后从受试者获得的生物学样品。
26.权利要求1-25中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞中的至少一种免疫细胞包含基因修饰，且其中所述基因修饰减少或抑制T-细胞受体或主要组织相容性复合物(MHC)的表达。
27.权利要求1-25中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞中的一部分免疫细胞包含基因修饰，且其中所述基因修饰减少或抑制T-细胞受体或主要组织相容性复合物(MHC)的表达。
28.权利要求27的方法，其中所述部分占多种免疫细胞中的至少2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或其之间的任何百分比。
29.权利要求1-25中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞中的每种免疫细胞包含基因修饰，且其中所述基因修饰减少或抑制T-细胞受体(TCR)或主要组织相容性复合物(MHC)的表达。
30.权利要求26-29中任一项的方法，其中所述MHC由MHCI、MHCII或其组合组成或包含MHCI、MHCII或其组合。
31.权利要求26-29中任一项的方法，其中所述MHC由MHCI组成或包含MHCI。
32.权利要求26-29中任一项的方法，其中所述MHC由MHCII组成或包含MHCII。
33.权利要求26-32中任一项的方法，其中所述基因修饰是单链断裂、双链断裂、序列缺失、序列插入、序列取代或其任何组合。
34.权利要求33的方法，其中所述序列缺失、序列插入、序列取代或其组合包含编码内含子、外显子、启动子、增强子、转录阻遏物、CpG位点或其任何组合的序列。
35.权利要求26-34中任一项的方法，其中所述基因修饰包含编码β-2微球蛋白(β2M)的序列，且其中所述基因修饰减少或抑制MHCI的表达。
36.权利要求26-34中任一项的方法，其中所述基因修饰包含编码HLA-DRα、CIITA或其组合的序列，且其中所述基因修饰减少或抑制MHCII的表达。
37.权利要求26-36中任一项的方法，其中所述基因修饰包含编码α链(TCRα)、β链(TCRβ)或其组合的序列，且其中所述基因修饰减少或抑制TCR的表达。
38.权利要求26-37中任一项的方法，其中通过包含DNA结合结构域和内切核酸酶结构域的组合物引入所述基因修饰。
39.权利要求38的方法，其中所述DNA结合结构域包含指导RNA。
40.权利要求38的方法，其中所述DNA结合结构域包含分离或衍生自Cas9、转录活化因子样效应核酸酶(TALEN)、着丝粒和启动子因子1(Cpf1)或锌指核酸酶(ZFN)的序列。
41.权利要求40的方法，其中所述Cas9是催化失活的Cas9(dCas9)或短且催化失活的Cas9(dsCas9)。
42.权利要求38-41中任一项的方法，其中所述内切核酸酶结构域包含分离或衍生自Cas9、转录活化因子样效应核酸酶(TALEN)或IIS型内切核酸酶的序列。
43.权利要求42的方法，其中所述IIS型内切核酸酶是AciI、Mn1I、AlwI、BbvI、BccI、BceAI、BsmAI、BsmFI、BspCNI、BsrI、BtsCI、HgaI、HphI、HpyAV、Mbo1I、My1I、PleI、SfaNI、AcuI、BciVI、BfuAI、BmgBI、BmrI、BpmI、BpuEI、BsaI、BseRI、BsgI、BsmI、BspMI、BsrBI、BsrBI、BsrDI、BtgZI、BtsI、EarI、EciI、MmeI、NmeAIII、BbvCI、Bpu10I、BspQI、SapI、BaeI、BsaXI、CspCI、BfiI、MboII、Acc36I、FokI或Clo051。
44.权利要求38-43中任一项的方法，其中共价或非共价连接所述DNA结合结构域和所述内切核酸酶结构域。
45.权利要求44的方法，其中共价连接所述DNA结合结构域和所述内切核酸酶结构域作为融合蛋白。
46.权利要求38-43中任一项的方法，其中所述转座子包含含有DNA结合结构域和内切核酸酶结构域的组合物。
47.权利要求26-46中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞包含静息细胞、活化的细胞或其组合。
48.权利要求26-46中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞包含活化的细胞。
49.权利要求26-46中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞包含静息细胞。
50.权利要求26-46中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞包含静息的CAR-T细胞、活化的CAR-T细胞或其组合。
51.权利要求26-46中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞包含活化的CAR-T细胞。
52.权利要求26-46中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞包含静息的CAR-T细胞。
53.权利要求1-52中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞中的至少一种免疫细胞表达两种或更多种嵌合配体受体(CLR)，所述嵌合配体受体各自特异性结合至少一种靶细胞上的靶配体。
54.权利要求1-52中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞中的一部分免疫细胞表达两种或更多种嵌合配体受体(CLR)，所述嵌合配体受体各自特异性结合至少一种靶细胞上的靶配体。
55.权利要求54的方法，其中所述部分占多种免疫细胞中的至少2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或其之间的任何百分比。
56.权利要求1-52中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞中的各免疫细胞表达两种或更多种嵌合配体受体(CLR)，所述嵌合配体受体各自特异性结合至少一种靶细胞上的靶配体。
57.权利要求53-56中任一项的方法，其中第一CAR特异性结合第一靶配体，其中第二CAR特异性结合第二靶配体，且其中所述第一靶配体和所述第二靶配体是不同的。
58.权利要求57的方法，其中所述第一靶配体和所述第二靶配体不是同源的。
59.权利要求1-58中任一项的方法，其中所述至少一种靶细胞或多种靶细胞包含HSC，且其中所述至少一种靶HSC上的靶配体包含c-KIT/CD117、CD45、CD34、Thy1/CD90、c-mpl/CD110、CD133、CD49f、ABCG2/CD338、碳酸酐酶IX/CA9、CD123和CD150中的一种或多种。
60.权利要求1-59中任一项的方法，其中所述至少一种靶细胞或多种靶细胞包含HSC，其中所述至少一种靶细胞或多种靶细胞进一步包含免疫细胞，且其中所述受试者处于排斥包含多种免疫细胞的组合物的风险中，所述免疫细胞各自表达一种或多种CLR。
61.权利要求1-60中任一项的方法，其中所述至少一种靶细胞或多种靶细胞包含HSC，其中所述至少一种靶细胞或多种靶细胞进一步包含免疫细胞，且其中所述受试者处于排斥包含多种治疗性HSC的组合物的风险中。
62.权利要求60或61的方法，其中所述靶免疫细胞上的靶配体包含CD3、CD4、CD8、CD25、FoxP3、TCRα、TCRβ、TCRαβ、TCRγλ、CD52、NK1.1、CD16、CD30、CD31、CD38、CD56、CD94、NKG2A、NKG2C、NKp30、NKp44、NKp46、CD9、CD103和KIR中的一种或多种。
63.权利要求1-62中任一项的方法，其中所述一种或多种CLR各自包含
(a)包含配体识别区的胞外域，
(b)跨膜结构域，和
(c)包含至少一个共刺激结构域的胞外域.
权利要求63的方法，其中所述配体识别区包含蛋白支架、Centyrin、单链可变片段(scFv)、VHH、免疫球蛋白和抗体模拟物中的一种或多种。
64.权利要求63的方法，其中所述免疫球蛋白是抗体或其片段。
65.权利要求64的方法，其中所述抗体是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM同种型。
66.权利要求64的方法，其中所述抗体片段是互补决定区(CDR)、重链CDR、重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR、轻链CDR1、轻链CDR2、轻链CDR3、抗原结合片段(Fab)、可变结构域(Fv)、重链可变区、轻链可变区、完整重链、完整轻链、一个或多个恒定结构域、Fc(可结晶片段)或其任何组合。
67.权利要求63的方法，其中所述抗体模拟物包含affibody、afflilin、affimer、affitin、alphabody、anticalin和avimer、设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)、Fynomer、Kunitz结构域肽和单体中的一种或多种。
68.权利要求1-67中任一项的方法，其中所述CLR中的至少一种是双特异性的。
69.权利要求1-67中任一项的方法，其中所述CLR中的至少一种是三特异性的。
70.权利要求63-69中任一项的方法，其中(a)的胞外域进一步包含信号肽。
71.权利要求70的方法，其中所述信号肽包含编码人CD2、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ、CD4、CD8α、CD19、CD28、4-1BB或GM-CSFR信号肽的序列。
72.权利要求63-71中任一项的方法，其中(a)的胞外域进一步包含在配体识别区和跨膜结构域之间的铰链。
73.权利要求72的方法，其中所述铰链包含衍生自人CD8α、IgG4和/或CD4序列的序列。
74.权利要求63-73中任一项的方法，其中所述跨膜结构域包含编码人CD2、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ、CD4、CD8α、CD19、CD28、4-1BB或GM-CSFR跨膜结构域的序列。
75.权利要求63-74中任一项的方法，其中所述胞内域包含人CD3ζ胞内域。
76.权利要求63-75中任一项的方法，其中所述至少一个共刺激结构域包含人4-1BB、人CD28、人CD40、人ICOS、人MyD88、人OX-40细胞内区段，或其任何组合。
77.权利要求63-76中任一项的方法，其中所述至少一个共刺激结构域包含人CD28和/或人4-1BB共刺激结构域。
78.权利要求77的方法，其中所述4-1BB共刺激结构域位于跨膜结构域和CD28共刺激结构域之间。
79.权利要求63-78中任一项的方法，其中所述包含多种免疫细胞的组合物中的至少一种免疫细胞包含分裂CLR。
80.权利要求79的方法，其中所述分裂CLR包含具有不同细胞内结构域的两种或更多种CLR，当在至少一种免疫细胞中同时表达时，与不表达分裂CLR的免疫细胞或不表达CLR的免疫细胞相比，其增加或降低免疫细胞的活性。
81.权利要求80的方法，其中所述同时表达增加免疫细胞的活性，且其中所述分裂CLR包含：
(a)第一CLR，其包含：包含配体识别区的胞外域、跨膜结构域和由初级细胞内信号传导结构域组成的胞内域，和
(b)第二CLR，其包含：包含配体识别区的胞外域、跨膜结构域和由次级细胞内信号传导结构域组成的胞内域。
82.权利要求80的方法，其中所述初级细胞内信号传导结构域包含人CD3ζ胞内域。
83.权利要求81或82的方法，其中所述次级细胞内信号传导结构域包含人4-1BB、人CD28、人CD40、人ICOS、人MyD88或人OX-40细胞内区段。
84.权利要求81或82的方法，其中所述次级细胞内信号传导结构域包含人4-1BB和人CD28。
85.权利要求80的方法，其中所述同时表达降低免疫细胞的活性，且其中所述分裂CLR包含：
(a)第一CLR，其包含：包含配体识别区的胞外域、跨膜结构域和包含初级细胞内信号传导结构域、次级细胞内信号传导结构域的胞内域，和
(b)第二CLR，其包含：包含配体识别区的胞外域、跨膜结构域和由抑制性细胞内信号传导结构域组成的胞内域。
86.权利要求85的方法，其中所述初级细胞内信号传导结构域包含人CD3ζ胞内域，且所述次级细胞内信号传导结构域包含人4-1BB、人CD28、人CD40、人ICOS、人MyD88或人OX-40细胞内区段。
87.权利要求86的方法，其中所述初级细胞内信号传导结构域包含人CD3ζ胞内域，且所述次级细胞内信号传导结构域包含人4-1BB和人CD28。
88.权利要求85-87中任一项的方法，其中所述抑制性细胞内信号传导结构域包含衍生自PD1、CTLA4、LAG3、B7-H1、B7-1、CD160、BTLA、PD1H、LAIR1、TIM1、TIM3、TIM4、2B4、TIGIT、ITIM、ITSM、YVKM、PP2A、SHP2、KIEELE和Y265的信号传导结构域。
89.权利要求80-88中任一项的方法，其中所述第二CAR选择性结合非靶细胞上的靶配体。
90.权利要求1-89中任一项的方法，其中一种或多种CLR以选自以下的至少一种亲和力结合配体：小于或等于10−9M、小于或等于10−10M、小于或等于10−11M、小于或等于10−12M、小于或等于10−13M、小于或等于10−14M和小于或等于10−15M的KD。
91.权利要求90的方法，其中KD由表面等离振子共振测定。
92.权利要求1-91中任一项的方法，其中所述包含多种免疫细胞的组合物进一步包含至少一种药学上可接受的载体。
93.权利要求1-92中任一项的方法，其进一步包括向受试者施用动员组合物。
94.权利要求93的方法，其中所述动员组合物在包含多种各自包含一种或多种CLR的免疫细胞的组合物之前施用。
95.权利要求94的方法，其中所述动员组合物在包含多种各自包含一种或多种CLR的免疫细胞的组合物之前1天和7天之间、包括端点施用。
96.权利要求93-95中任一项的方法，其中所述动员组合物包含粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、普乐沙福或其组合。
97.权利要求1-96中任一项的方法，其进一步包括向受试者施用有效量的预调节组合物，以增强包含多种各自包含一种或多种CLR的免疫细胞的组合物的植入和通过包含多种各自包含一种或多种CLR的免疫细胞的组合物消除至少一种靶细胞的效率。
98.权利要求97的方法，其中所述预调节组合物抑制免疫系统。
99.权利要求97或98的方法，其中所述预调节组合物包含自身免疫疗法、抗排斥药、淋巴清除剂、清髓剂、化学治疗剂或其组合。
100.权利要求99的方法，其中所述淋巴清除剂包括环磷酰胺或氟达拉滨。
101.权利要求99的方法，其中所述清髓剂包括低剂量的放射或局部放射疗法。
102.权利要求99的方法，其中所述化学治疗剂包括白消安、曲奥舒凡、美法仑、噻替帕或其组合。
103.权利要求1-102中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞中的每种免疫细胞在施用于受试者之前进行预辐照。
104.权利要求103的方法，其中消除多种免疫细胞的步骤包括向受试者施用有效量的多种预辐照的免疫细胞，由此防止多种预辐照的免疫细胞的增殖或缩短多种预辐照的免疫细胞的存活。
105.权利要求1-104中任一项的方法，其中所述多种免疫细胞中的每种免疫细胞包含诱导型胱天蛋白酶多肽或编码诱导型胱天蛋白酶多肽的序列。
106.权利要求105的方法，其中所述诱导型胱天蛋白酶多肽包含
(a)配体结合区，
(b)接头，和
(c)截短的胱天蛋白酶9多肽。
107.权利要求106的方法，其中所述诱导型胱天蛋白酶多肽不包含非-人序列。
108.权利要求105-107中任一项的方法，其中消除多种免疫细胞的步骤包括向受试者施用有效量的诱导剂以诱导胱天蛋白酶多肽，由此起始免疫细胞的死亡。
109.权利要求105-108中任一项的方法，其中所述包含多种各自包含一种或多种CLR的免疫细胞的组合物进一步包含诱导剂。
110.权利要求3-109中任一项的方法，其中所述多种治疗性HSC中的每种HSC包含诱导型胱天蛋白酶多肽或编码诱导型胱天蛋白酶多肽的序列。
111.权利要求110的方法，其中所述诱导型胱天蛋白酶多肽包含
(a)配体结合区，
(b)接头，和
(c)截短的胱天蛋白酶9多肽。
112.权利要求111的方法，其中所述诱导型胱天蛋白酶多肽不包含非-人序列。
113.权利要求112的方法，其进一步包括向受试者施用包含诱导剂的组合物，由此起始多种治疗性HSC的死亡。
1...
【专利技术属性】
技术研发人员：E奥斯特塔，D舍德洛克，JD道恩，
申请(专利权)人：波赛达治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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