解淀粉芽孢杆菌及其用途及其菌剂的制备方法技术

本发明专利技术提供一种解淀粉芽孢杆菌，所述解淀粉芽孢杆菌2019年9月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称FB1‑5，保藏号CGMCC No.18482。本发明专利技术还提供了解淀粉芽孢杆菌的用途及其菌剂的制备方法。本发明专利技术提供的解淀粉芽孢杆菌具有抑制病原真菌的生长，促进根系发育，加快植株生长，缩短生长周期，提早开花坐果，增加产量等特点。

Bacillus amylolyticus and its application and preparation

【技术实现步骤摘要】
解淀粉芽孢杆菌及其用途及其菌剂的制备方法
本专利技术涉及微生物领域。更具体地说，本专利技术涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其用途及其菌剂制备方法。
技术介绍
微生物肥料是指含有特定微生物活体的制品，应用于农业生产，通过其中所含微生物的生命活动，以增加植物养分的供应量或促进植物生长，提高产量，改善农产品品质及农业生态环境。微生物肥料发挥功效的关键是其中所含微生物菌株的性能及数量，为此，微生物肥料产品要求标明有效活菌的菌种名称及数量。即便如此，同种微生物不同的菌株，其功能也不一样，如解淀粉芽孢杆菌，有的菌株具有防病功能，有的具有促生长功能，有的具产蛋白酶功能等，不同的菌株都有着不同的功能和用途。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种解淀粉芽孢杆菌，其能够抑制病原真菌的生长、促进农作物的生根、生长以及产量的增加。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种解淀粉芽孢杆菌，所述解淀粉芽孢杆菌2019年9月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称FB1-5，保藏号CGMCCNo.18482。优选的是，所述解淀粉芽孢杆菌用于抑制病原真菌的生长。优选的是，所述解淀粉芽孢杆菌用于抑制病原镰刀菌的生长。优选的是，所述解淀粉芽孢杆菌用于促进农作物的生长。优选的是，所述解淀粉芽孢杆菌用于促进果树的生长。优选的是，所述解淀粉芽孢杆菌用于促进火龙果树的生长。优选的是，所述解淀粉芽孢杆菌用于提高果树的开花率以及坐果率。一株解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：1)用接种环刮取试管斜面上的单菌落，接种于NB液体培养基中，30-35℃，200-250rmp，摇瓶培养18-24小时，得到种子液；2)将种子液按体积比0.5-2％的比例接种到扩繁培养基中，30-35℃摇瓶培养18-24小时。3)将步骤2)扩繁培育的菌种按体积比为1-2％的比例转接到扩繁培养基中进行大规模培养，跟踪检测菌量及芽孢情况，当芽孢率大于90％时，停止发酵培养，得到高密度液体微生物菌剂。优选的是，所述高密度液体微生物菌剂中的解淀粉芽孢杆菌的菌体密度大于50亿个/mL。优选的是，步骤3)中，停止发酵培养时，往获得的高密度液体微生物菌剂中添加芸苔素内酯、果糖6磷酸和维生素c，所述芸苔素内酯的质量分数为0.5-1％，所述果糖6磷酸的质量分数为3-5％，所述维生素c的质量分数为0.1-0.5％。本专利技术至少包括以下有益效果：本专利技术提供的解淀粉芽孢杆菌具有抑制病原真菌的生长，促进根系发育，加快植株生长，缩短生长周期，提早开花坐果，增加产量等特点。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。附图说明图1为本专利技术的解淀粉芽孢杆菌的菌落平板图；图2说明的是本专利技术的解淀粉芽孢杆菌拮抗镰刀菌的平板图；图3说明的是解淀粉芽孢杆菌促进火龙果生长的示意图。具体实施方式下面对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。从广西南宁市隆安县那桐镇广西金穗农业集团有限公司方村基地健康火龙果根际采集土样，采用“梯度稀释+镰刀菌平板涂布”的初筛方法初筛拮抗菌，具体方法：称取5g土壤，加入带玻璃珠的100ml无菌水中，28℃，200转/分，震荡摇匀40分钟，取土壤悬液1ml进行10-1-10-4系列浓度梯度稀释，然后取10-3,10-4梯度80ul稀释液，20ul镰刀菌菌液，混合涂布于PDA平板，于28℃倒置培养3天，然后挑取出现抑菌圈的菌落进行划线分离，分出单菌落再通过平板对峙实验对拮抗菌进行复筛，复筛方法：PDA平板上十字交叉画线标记，用打孔器从长满镰刀菌的平板上挖取一块病原菌菌块放置于十字交叉点，在距菌块2.5厘米处3个位置接种拮抗菌，另一个位置不接种作为空白对照，28℃倒置培养5天，观察测试拮抗菌对病原菌的抑菌情况，计算抑菌率。如图1所示，本专利技术的解淀粉芽孢杆菌FB1-5的基本生物学特征为：菌落呈乳白色不透明，表面皱褶无光泽，近边沿有一圈凸起，边缘不规则，革兰氏染色呈阳性，杆状，中生芽孢，椭圆形，两端钝圆，水解淀粉和明胶，可利用柠檬酸盐；接触酶呈阳性，氧化酶呈阴性，硝酸盐还原酶呈阳性，甲基红试验呈阴性，V-P试验呈阳性；在pH4-10范围内生长良好，最佳pH指为6.5，在50℃生长良好，7％NaCl浓度下可以生长。菌株分子鉴定：挑取单菌落接种到NB液体培养基中，培养过夜，采用上海生工《细菌基因组DNA快速抽提试剂盒》提取基因组DNA，交由广州擎科生物技术有限公司完成测序，所得16SrDNA序列如序列表SEQNo.1所示。将序列SEQNo.1在GeneBank数据库进行Blast比对，结果显示：与已知的解淀粉芽孢杆菌16SrDNA序列的同源性＞99％，可认为是同种内不同菌株的解淀粉芽孢杆菌。本专利技术的解淀粉芽孢杆菌经形态特征、生理生化反应和16SrDNA序列分析，鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌的一个新菌株，命名为解淀粉芽孢杆菌FB1-5。本专利技术的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)已于2019年9月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏名称FB1-5，保藏号CGMCCNo18482。试验一、平板对峙抑菌效果试验在PDA平板上十字交叉画线标记，用打孔器从长满镰刀菌的平板上挖取一块病原菌菌块放置于十字交叉点，在距菌块2.5厘米处3个位置接种解淀粉芽孢杆菌FB1-5，另一个位置不接种作为空白对照，28℃倒置培养5天，观察拮抗菌对病原菌的抑菌情况。抑菌率＝(对照组菌落半径－处理组菌落半径)/(对照组菌落半径－菌饼半径)×100％。如图2所示，本专利技术的解淀粉芽孢杆菌FB1-5对镰刀菌的抑菌率为67.9％。试验二、土壤抑菌效果试验选择pH4.0以上的土壤作为试验用土，过筛，除去大颗粒，备用；用马铃薯土豆培养基(PDA)培养病原镰刀菌，得到含有大量孢子的病原菌菌液；将镰刀菌菌液添加到备用土壤中，搅拌混匀，平均分为A、B两等分，其中A组添加泥土重量比1％的解淀粉芽孢杆菌FB1-5菌剂(菌体密度为100亿/mL)，B组添加泥土重量比1％的解淀粉芽孢杆菌FB1-5菌剂灭活基质。采用稀释涂布法，定期跟踪检测土壤中病原镰刀菌菌量，评价抑菌效果，结果如表1所示。表1土样病原菌数量变化情况表(cfu/g)0天7天14天21天28天35天A组6本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌2019年9月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称FB1-5，保藏号CGMCC No.18482。/n

【技术特征摘要】
1.一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌2019年9月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称FB1-5，保藏号CGMCCNo.18482。


2.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌用于抑制病原真菌的生长。


3.根据权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌用于抑制病原镰刀菌的生长。


4.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌用于促进农作物的生长。


5.根据权利要求4所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌用于促进果树的生长。


6.根据权利要求5所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌用于促进火龙果树的生长。


7.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌用于提高果树的开花率、坐果率。


8.如权利要求1-7任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭寿湖，张琦敏，林振业，马金霞，梁春吉，
申请(专利权)人：广西金穗生态科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45