用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物及其制备方法技术方案

本发明专利技术属于二抗检测系统技术领域，具体涉及用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物及其制备方法，其利用树枝状聚酰胺胺结构上的‑NH

【技术实现步骤摘要】
用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物及其制备方法
本专利技术涉及二抗检测系统
，具体而言，涉及用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物及其制备方法。
技术介绍
目前国内科研机构以及临床诊断机构所使用的免疫组化即用型二抗检测系统主要有两种，一种是通过卵白素-生物素或者链霉素-生物素之间的高亲和力而对检测信号进行放大的二抗检测系统(生物素检测系统)；另一种是通过在聚合物上耦联多个抗体和酶的方式而对信号进行放大的二抗检测系统(“酶-聚合物-抗体”检测系统)。生物素检测系统有时会受到待测组织的内源性生物素的干扰而产生假阳性结果，从而会影响结果的准确性，因此此种二抗检测系统在国内的应用逐渐在减少，特别是在临床辅助诊断的应用日益减少；“酶-聚合物-抗体”检测系统，不会受到待测组织内源性生物素的干扰，染色背景低，操作步骤及时间较少，集准确、方便、快捷的优点于一身，因此其在临床辅助诊断中的应用也越来越广泛。随着肿瘤发病率逐年上升，病理科疫组化项目越发显得重要，且每年递增15％，其市场潜力巨大。二抗使用量市场资料(包括仪器二抗)：全国约1192家三级医院(其中三甲医院779家，2018年统计)，1888家二甲医院。基本上每家三级医院、60％的二甲医院都有开展免疫组化项目，根据2018年调查的不完全资料显示，手工免疫组化染色二抗试用量平均为40ml，按照80元/ml计算，全国约为413家三级医院、1132家二甲医院，年销售额为4900万。三甲医院基本是仪器染色，按照80元/片，每家医院年均15000张片子计算，年销售额为93亿元。目前国内市场上供应“酶-聚合物-抗体检测系统”二抗产品的公司主要有：Dako基因公司(Envision二抗)，约占市场份额的35％；福建迈新(Maxvision二抗)，约占市场份额的50％；北京中杉金桥(PV6000二抗)，约占市场份额的15％；仪器二抗市场份额目前的分布情况：罗氏诊断仪器约占市场份额的65％；徕卡诊断仪器约占市场份额的20％；其余品牌合计约占市场份额的15％；国产销售的二抗产品大多是进口分包装，在聚合物结构设计、制备工艺上没有大的改进，具体体现在：单位体积内酶、抗体数量没有显著增加；聚合物空间位阻没有明显降低，导致国产二抗产品相对于进口产品，价格没有明显降低，灵敏度没有改善。
技术实现思路
为了解决目前国内使用的“酶-聚合物-抗体”检测系统(二抗)大多依赖进口，价格昂贵、使用成本高，灵敏度无法提高的问题，提供用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物及其制备方法。用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物(即SL-PolyHRP聚合物，后文统一以该名称指代前文所述的聚酰胺胺结构多聚物)，所述聚酰胺胺结构多聚物包括树枝状聚酰胺胺2-13％，结合酶75-95％和免疫球蛋白2-13％，其结构式为：其中，n≥1。进一步地，所述树枝状聚酰胺胺的分子量为(1500-60000U)，其表面修饰基团为-NH2，-NH2基团的数量为32-128。进一步地，所述结合酶的分子量为(25000-44000U)，RZ值为2.1-3.5。进一步地，所述免疫球蛋白的分子量为(70000-100000U)。进一步地，所述结合酶优选为过氧化物酶，所述免疫球蛋白优选为羊抗兔免疫球蛋白。一种制备聚酰胺胺结构多聚物的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)、称取结合酶，溶解到碳酸氢钠溶液中，然后添加适量二苯基亚砜溶液，反应1小时，反应后的溶液用交联葡聚糖凝胶柱进行过滤、分析、纯化，纯化液为碳酸氢钠溶液，收集深色的过滤液；(2)、将(1)步收集到的过滤液，进行低温离心浓缩，取其浓缩液装于试管中，2-8℃冷藏备用，在浓缩液中，加入树枝状聚酰胺胺，于30℃下低速搅拌反应24小时，然后将上述的反应液，通过碳酸氢钠溶液在交联葡聚糖凝胶柱上进行过滤、分析、纯化，收集深色物质溶液；(3)、将(2)步纯化后的深色物质溶液，进行低温离心浓缩，取其浓缩液装于试管中，加入二苯基亚砜，反应4小时，然后用PBS溶液将反应溶液在交联葡聚糖凝胶柱上进行过滤、分析、纯化，收集深色物质，低温浓缩备用；(4)、将免疫球蛋白溶解到PBS溶液中，充分搅拌均匀，加入(3)步的浓缩液，磁力搅拌均匀，孵育48小时后，加入抗原封闭剂牛血清白蛋白，充分搅拌均匀，最后合成的聚酰胺胺结构多聚物存储于2-8℃备用。本专利技术的优点在于：1、SL-PolyHRP聚合物采用了最新的制备工艺，分子充分活化，亲和力好，便于结合更多的蛋白分子。2、利用聚酰胺胺合成提供的环状的树枝化结构，克服了传统聚合物空间位阻大的问题，SL-PolyHRP聚合物的灵敏度明显好于现有市场产品。3、SL-PolyHRP聚合物二抗试剂在背景没有增加的情况下，其染色强度明显好于现有市场产品。4、国内自主研发合成，产品成本低，市场竞争力强。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为实施例中树枝状聚酰胺胺的结构式；图2为128个蛋白分子结合在具有128个-NH2表面修饰基团的树枝状聚酰胺胺分子上的SL-PolyHRP聚合物的结构示意图；图3为SL-PolyHRP聚合物的红外光谱图。具体实施方式为了解决目前国内使用的“酶-聚合物-抗体”检测系统(二抗)大多依赖进口，价格昂贵、使用成本高，灵敏度无法提高的问题，提供用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物及其制备方法。为了使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本实施例中优选采购结构式如图1所示的树枝状聚酰胺胺(可采用威海晨源分子新材料，货号:CYD-150A，产品链接：http://www.whcyd.com/product_data/19.html)；分子量为30000U的辣根过氧化物酶(参考文献：洪伟杰，张朝晖，芦国营.辣根过氧化物酶的结构与作用机制[J].生命的化学，2005，25(01))和分子量为80000U的羊抗兔免疫球蛋白进行SL-PolyHRP聚合物制备实验。制备步骤：(1)、选用辣根过氧化物酶(30000U，纯化)5.5g溶解到10ml碳酸氢钠(0.1M、PH＝7.0)溶液中，然后添加二苯基亚砜溶液0.5ml(取5g二苯基亚砜溶于10ml乙醇溶液，30℃震荡)，反应1小时，反应后的溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物，其特征在于，所述聚酰胺胺结构多聚物包括树枝状聚酰胺胺2-13％，结合酶75-95％和免疫球蛋白2-13％，其结构式为：/n

【技术特征摘要】
1.用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物，其特征在于，所述聚酰胺胺结构多聚物包括树枝状聚酰胺胺2-13％，结合酶75-95％和免疫球蛋白2-13％，其结构式为：



其中，n≥1。


2.根据权利要求1所述的用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物，其特征在于，所述树枝状聚酰胺胺的分子量为(1500-60000U)，其表面修饰基团为-NH2，-NH2基团的数量为32-128。


3.根据权利要求2所述的用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物，其特征在于，所述结合酶的分子量为(25000-44000U)，RZ值为2.1-3.5。


4.根据权利要求3所述的用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物，其特征在于，所述免疫球蛋白的分子量为(70000-100000U)。


5.根据权利要求4所述的用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物，其特征在于，所述结合酶优选为过氧化物酶，所述免疫球蛋白优选为羊抗兔免疫球蛋白。


6.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭瑞政，
申请(专利权)人：百盛广州生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44