犬腺病毒2型单克隆抗体、可变区序列、杂交瘤细胞及其应用制造技术

本发明专利技术提供了具有特异性结合犬腺病毒2型Fiber蛋白的鼠单克隆抗体的可变区序列、特异性结合犬腺病毒2型Fiber蛋白构象表位的抗体，该抗体可以用于制备试剂盒和药物组合物。本发明专利技术的试剂盒克服了现有技术检测灵敏度低的问题，避免了漏检、假阴性现象发生，可检测多种靶标，且具有快速、简便、准确的优势；本发明专利技术的药物组合物能有效预防和治疗CAV‑2导致的疾病。

Canine adenovirus type 2 monoclonal antibody, variable region sequence, hybridoma cell and its application

【技术实现步骤摘要】
犬腺病毒2型单克隆抗体、可变区序列、杂交瘤细胞及其应用
本专利技术涉及犬腺病毒2型单克隆抗体、可变区序列、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞，以及使用该单克隆抗体制备的药物组合物，试剂盒及其应用，属于生物

技术介绍
犬传染性喉气管炎和肠炎均由犬腺病毒2型(CanineadenovirustypeII,CAV-2)引发，呈全球分布。犬传染性喉气管炎可感染不同品种、年龄和性别的犬，四季均可发生，以幼犬的感染率和死亡率最高；临床症状复杂，包括持续性高热、咳嗽、浆液性至粘液性鼻漏、扁桃体炎、喉气管炎、肺炎等呼吸道症状；易与其它病毒如犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒混合感染或继发感染，还易与犬波氏杆菌引发犬窝咳，幼犬特别易感染此病，从而使病情加重并导致临床诊断困难。CAV-2所引发的疾病是养犬业危害最大的疫病之一。目前，CAV-2的检测方法包括病毒分离、PCR、血凝试验等方法，但这些方法各有缺点，病毒分离鉴定试验过程繁琐，耗时过长，且通过肉眼观察、较为主观；以PCR为主的分子生物学方法对技术和设备要求均较高、操作繁琐；血凝试验不仅需要红细胞且要求现配现用，临床检测时发现还易受分泌物或排泄物中的杂质干扰，这些检测方法均难以在兽医临床现场应用。而目前市场上的商品化犬腺病毒2型胶体金检测试纸条仅有上海快灵生产的一种，检测灵敏度低、结果往往存在假阴性，既而存在散毒、导致群发感染的风险。因此，急需研制一种快速简便准确的产品以用于临床诊断。犬的预防、治疗目前主要是免疫含犬腺病毒2型的疫苗、高免血清，但疫苗中所含犬腺病毒2型毒株均为弱毒株，免疫动物后存在散毒的风险，且免疫后产生抗体尚且需要一段时间，不能快速建立对病毒的抵抗能力；而高免血清的制备程序复杂，不仅需筛选合格的试验动物，还要用弱毒、强毒多次免疫(李志敏等.犬多价高免血清的研制及应用.中国免疫学杂志,2005,21(7):521-523)。另外，针对已经感染的犬只特别是幼犬发病时，需要针对发病的动物快速控制病情、进行治疗，即使免疫现有疫苗也难以在短时间产生较高的抗体，而中和活性良好的单抗可以大大提高该病的治愈率，因此，治疗性单抗对该病的治疗和控制具有重要的意义。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供了一对犬腺病毒2型单克隆抗体，以及含单克隆抗体的试剂盒、药物组合物及其应用。本专利技术涉及一种特异性结合犬腺病毒2型的单克隆抗体1C5的可变区序列，其中所述单克隆抗体1C5重链可变区为SEQ.IDNo.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体1C5轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。本专利技术单克隆抗体1C5的可变区序列能特异性结合犬腺病毒2型，其针对的抗原表位位于纤突蛋白即Fiber蛋白。本专利技术涉及一种特异性结合犬腺病毒2型的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段重链可变区为SEQ.IDNo.1所示序列或其简并序列编码或其经过经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述抗体或抗体片段轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。作为本专利技术的一种实施方式，所述抗体为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体或所述抗体的片段；所述抗体或所述抗体的片段仍保留特异性结合犬腺病毒2型的能力。作为本专利技术的一种优选实施方式，所述抗体为单克隆抗体1C5。所述单克隆抗体1C5为犬腺病毒2型单克隆抗体，进一步为识别犬腺病毒2型Fiber蛋白构象表位的单克隆抗体，重链可变区的氨基酸序列为SEQ.IDNo.1编码，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ.IDNo.2编码；对CAV-2的HI效价≥1:5120，与CAV-2具有良好的反应性；对CAV-2的中和效价为1:1280，对于CAV-2具有很高的中和活性。本专利技术涉及一种特异性结合犬腺病毒2型的单克隆抗体4H12的可变区序列，其中所述单克隆抗体4H12重链可变区为SEQ.IDNo.3所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体4H12轻链可变区为SEQ.IDNo.4所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。本专利技术涉及一种特异性结合犬腺病毒2型的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段重链可变区为SEQ.IDNo.3所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述抗体或抗体片段轻链可变区所示序列或其简并序列编码或其序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。作为本专利技术的一种实施方式，所述抗体为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体或所述抗体的片段；所述抗体或所述抗体的片段仍保留特异性结合犬腺病毒2型的能力。作为本专利技术的一种优选实施方式，所述抗体为单克隆抗体4H12。所述单克隆抗体4H12为犬腺病毒2型单克隆抗体，进一步为识别犬腺病毒2型Fiber蛋白构象表位的单克隆抗体；重链可变区的氨基酸序列为SEQ.IDNo.3编码，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ.IDNo.4编码；对CAV-2的HI效价≥1∶5120，与CAV-2具有良好的反应性；对CAV-2的中和效价为1∶160，对CAV-2具有很高的中和活性。本专利技术还涉及一种杂交瘤细胞1C5株，所述杂交瘤细胞1C5株分泌所述单克隆抗体1C5。本专利技术还涉及一种杂交瘤细胞4H12株，所述杂交瘤细胞4H12株分泌所述单克隆抗体4H12。本专利技术还涉及一种药物组合物，其中，所述药物组合物包含免疫量的特异性结合犬腺病毒2型的抗体，以及药学上可接受的载体；所述特异性结合犬腺病毒2型Fiber抗原的抗体选自一种或多种以下抗体：单克隆抗体1C5、单克隆抗体4H12、单克隆抗体1C5的重链可变区和轻链可变区连接而成的单链抗体、单克隆抗体1C5的重链可变区和单克隆抗体4H12的轻链可变区连接而成的单链抗体、单克隆抗体1C5的轻链可变区和单克隆抗体4H12的重链可变区连接而成的单链抗体、单克隆抗体4H12的重链可变区和轻链可变区连接而成的单链抗体。作为本专利技术的一种优选实施方式，所述药物经肌肉注射给药。作为本专利技术的一种优选实施方式，所述药物的剂型包括但不限于粉末剂、颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂。本专利技术的药物组合物弥补现有疫苗的不足，避免了散毒的风险；解决了高免血清制备复杂所带来的困扰，能同时预防和治疗CAV-2，可用于紧急治疗该病，减少了发病率、降低了死亡率。本专利技术还涉及所述药物组合物在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合犬腺病毒2型的单克隆抗体的可变区序列，其中，单克隆抗体所述单克隆抗体为单克隆抗体1C5或4H12；/n所述单克隆抗体1C5重链可变区为SEQ.ID No.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体1C5轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；/n所述单克隆抗体4H12重链可变区为SEQ.ID No.3所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体4H12轻链可变区为SEQ.IDNo.4所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合犬腺病毒2型的单克隆抗体的可变区序列，其中，单克隆抗体所述单克隆抗体为单克隆抗体1C5或4H12；
所述单克隆抗体1C5重链可变区为SEQ.IDNo.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体1C5轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；
所述单克隆抗体4H12重链可变区为SEQ.IDNo.3所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体4H12轻链可变区为SEQ.IDNo.4所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。


2.一种特异性结合犬腺病毒2型的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段重链可变区为SEQ.IDNo.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述抗体或抗体片段轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；
优选地，所述抗体为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体或所述抗体的片段，所述抗体或所述抗体的片段仍保留特异性结合犬腺病毒2型的能力；
更优选地，所述抗体为单克隆抗体1C5。


3.一种特异性结合犬腺病毒2型的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段重链可变区为SEQ.IDNo.3所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述抗体或抗体片段轻链可变区所示序列或其简并序列编码或其序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；
优选地，所述抗体为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体或所述抗体的片段，所述抗体或所述抗体的片段仍保留特异性结合犬腺病毒2型的能力；
更优选地，所述抗体为单克隆抗体4H12。


4.一种杂交瘤细胞1C5株，所述杂交瘤细胞1C5株分泌权利要求2所述的单克隆抗体1C5。


5.一种杂交瘤细胞4H12株，所述杂交瘤细胞4H12株分泌权利要求3所述的单克隆抗体4H12。


6.一种药物组合物，其中，所述药物组合物包含免疫量的特异性结合犬腺病毒2型的抗体，以及药学上可接受的载体；
所述特异性结合犬腺病毒2型的抗体选自一种或多种以下抗体：单克隆抗体1C5、单克隆抗体4H12、单克隆抗体1C5的重链可变区和轻链可变区连接而成单链抗体、单克隆抗体1C5的重链可变区和单克隆抗体4H12的轻链可变区连接而成的单链抗体、单克隆抗体1C5的轻链可变区和...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，王莹，
申请(专利权)人：洛阳普泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41