一种抗癌药物的活性检测及筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，具体涉及医疗技术领域，包括S1、配置MTT溶液；S2、配置三联溶解液；S3、制备癌细胞悬液；S4、接种；S5、加入MTT溶液；S6、加入三联溶解液；S7、吸光值测量；S8、设置调零孔和对照孔；S9、计算。本发明专利技术通过使用暖风扇将从药品柜内取出的三联溶解液的存放瓶进行吹拂，能够使得三联溶解液快速升温，加快了三联溶解液内部的SDS结晶的溶解效率，有效提高整体检测效率，同时暖风扇有效加快瓶外因温差产生的水珠的蒸发效率，有效防止人员在拿取三联溶解液的存放瓶时，因存放瓶表面的水珠意外进入三联溶解液的存放瓶内而影响检测的精度，进而有效保证整体检测的精度。

【技术实现步骤摘要】
一种抗癌药物的活性检测及筛选方法
本专利技术涉及医疗
，更具体地说，本专利技术涉及一种抗癌药物的活性检测及筛选方法。
技术介绍
在医学上，癌是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类，癌症具有细胞分化和增殖异常、生长失去控制、浸润性和转移性等生物学特征，其发生是一个多因子、多步骤的复杂过程，分为致癌、促癌、演进三个过程，与吸烟、感染、职业暴露、环境污染、不合理膳食、遗传因素密切相关，随着人类平均寿命的延长，癌症对人类的威胁日益突出，已经成为我国城乡居民的第一位死因，除了原发于性腺的恶性肿瘤外，仅有甲状腺癌和胆囊癌是女性发病率高于男性的，其他恶性肿瘤都是男性高于女性。抗癌药指特定的肿瘤分子变异部位的高度选择性使的靶向治疗，具有疗效高，毒性小的特点，目前全球各国已批准上市的抗癌药物大约有130～150种，用这些药物配制成的各种抗癌药物制剂大约有1300～1500种，抗癌药物可采用体外的MTT法进行筛选，MTT法，是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能，二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在540或720nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比，该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等，它的特点是灵敏度高、经济。现有的使用MTT法对抗癌药物进行筛选时，需要将三联溶解液从低温环境中取出，使其内部的SDS结晶自然溶解，不仅溶解效率较低，使得整体检测效率较低，且三联溶解液的存放瓶因与环境存在温差，故其表面容易冷凝有较多水珠，这些水珠在使用者拿取时容易不慎进入三联溶解液中而容易降低其浓度，进而容易降低检测精度。
技术实现思路
为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术的实施例提供一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，通过使用暖风扇将从药品柜内取出的三联溶解液的存放瓶进行吹拂热风，能够使得三联溶解液快速升温，加快了三联溶解液内部的SDS结晶的溶解效率，进而有效提高整体检测效率，同时暖风扇的热风对瓶外因温差产生的水珠吹拂，有效加快水珠的蒸发效率，有效防止人员在拿取三联溶解液的存放瓶时，因存放瓶表面的水珠意外进入三联溶解液的存放瓶内而影响检测的精度，进而有效保证整体检测的精度。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，具体步骤如下：S1、配置MTT溶液；S2、配置三联溶解液；S3、制备癌细胞悬液，制备具体步骤如下：S3.1、将新鲜的恶性肿瘤组织块用剪刀剪切成小块，然后使用生理盐水进行浸泡一段时间，然后再使用生理盐水进行洗涤；S3.2、将清洗后的恶性肿瘤组织块放入匀浆机内打散；S3.3、打散后的产物放入离心管中，然后使用离心机进行离心，离心后弃去上清液，然后加入适量红细胞裂解液，震荡后静置,然后再次使用离心机进行离心，离心后弃去上清液；S3.4、然后向产物中加入磷酸缓冲盐溶液进行冲洗，然后使用离心机进行离心，离心后弃去上清液，得到沉淀物，然后向沉淀物加入适量的保存液，从而制得癌细胞悬液；S4、接种：将癌细胞悬液接种于细胞培养板上，每孔100ul，放入培养箱中培养，从而使细胞单层铺满孔底部，然后加入抗癌药物；S5、加入MTT溶液：然后再放入培养箱中培养，然后利用显微镜观察，然后每孔加入10ulMTT溶液，继续放入培养箱中培养；S6、加入三联溶解液：将三联溶解液从药品柜内取出，同时使用暖风扇对其进行吹拂，使三联溶解液内的SDS结晶全部溶解，然后向细胞培养板的每个孔内加入100ul三联溶解液，然后再放入培养箱中继续培养；S7、吸光值测量：将细胞培养板从培养箱中取出，然后使用显微镜进行观察，当孔内的结晶物全部溶解后，使用酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值；S8、设置调零孔和对照孔：同时在细胞培养板上的孔内加入培养基、MTT溶液以及二甲基亚砜溶液设置成调零孔，在细胞培养板上的孔内加入细胞悬液、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT溶液以及二甲基亚砜设置为对照孔；S9、计算：将各孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值，然后OD值取平均数即得到细胞存活率，以此反映抗癌药物的活性，从而达到对抗癌药物进行筛选。在一个优选地实施方式中，在步骤S1中MTT溶液配置步骤具体如下：S1.1、先将混合瓶外端使用遮光膜包裹，然后称取MTT染料0.5g，然后将其与100ml磷酸缓冲盐溶液放入混合瓶中，摇匀混合，配置成浓度为5mg/ml的MTT溶液；S1.2、使用0.22μm的滤膜将MTT溶液中的细菌滤除，然后再次将MTT溶液放入包裹有遮光膜的混合瓶内，从而进行避光保存。在一个优选地实施方式中，在步骤S2中三联溶解液配置步骤具体如下：S2.1、准备10gSDS、5ml异丁醇以及0.1ml10M浓度的HCl；S2.2、向SDS、异丁醇以及HCl中加入双蒸水，使其溶解配成100ml的三联溶解液；S2.3、将配置好的三联溶解液放于低温的药品柜内保存，保存温度为4℃。在一个优选地实施方式中，在步骤S3.1中使用生理盐水浸泡时间为40min-50min。在一个优选地实施方式中，在步骤S3.3中离心机转速为2000r/min,离心时间为10min-15min，加入适量红细胞裂解液震荡后静置时间为40min-50min。在一个优选地实施方式中，在步骤S3.4中离心机的转速为2000r/min,离心时间为10min-15min，离心后弃去上清液，重复此操作三次，最终得到沉淀物。在一个优选地实施方式中，在步骤S4中细胞培养板为96孔平底板，在步骤S4、步骤S5以及步骤S6培养箱中的培养环境为5％CO2和37℃的温度。在一个优选地实施方式中，在步骤S5中第一次培养箱的培养时间为30h-48h，第二次培养箱的培养时间为4h-5h。在一个优选地实施方式中，在步骤S6中暖风扇的温度为60℃-70℃，培养箱的培养时间为6h-7h。本专利技术的技术效果和优点：1、本专利技术通过使用暖风扇将从药品柜内取出的三联溶解液的存放瓶进行吹拂，能够使得三联溶解液快速升温，使得其恢复至室温的时间缩短，与现有技术中使三联溶解液的存放瓶自然放置到室内回温相比，本专利技术加快了三联溶解液内部的SDS结晶的溶解效率，进而有效提高整体检测效率，同时由于三联溶解液的存放瓶与周围环境存在温差，故三联溶解液的存放瓶表面冷凝有较多水珠，通过暖风扇的热风对水珠进行吹拂干燥，有效加快水珠的蒸发效率，与现有技术相比，本专利技术有效防止人员在拿取三联溶解液的存放瓶时，因存放瓶表面的水珠意外进入三联溶解液的存放瓶内而影响检测的精度，进而有效保证整体检测的精度；2、本专利技术通过在配置MTT溶液之前先将混合瓶外端使用遮光膜包裹，有效防止环境中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：具体步骤如下：/nS1、配置MTT溶液；/nS2、配置三联溶解液；/nS3、制备癌细胞悬液，制备具体步骤如下：/nS3.1、将新鲜的恶性肿瘤组织块用剪刀剪切成小块，然后使用生理盐水进行浸泡一段时间，然后再使用生理盐水进行洗涤；/nS3.2、将清洗后的恶性肿瘤组织块放入匀浆机内打散；/nS3.3、打散后的产物放入离心管中，然后使用离心机进行离心，离心后弃去上清液，然后加入适量红细胞裂解液，震荡后静置,然后再次使用离心机进行离心，离心后弃去上清液；/nS3.4、然后向产物中加入磷酸缓冲盐溶液进行冲洗，然后使用离心机进行离心，离心后弃去上清液，得到沉淀物，然后向沉淀物加入适量的保存液，从而制得癌细胞悬液；/nS4、接种：将癌细胞悬液接种于细胞培养板上，每孔100ul，放入培养箱中培养，从而使细胞单层铺满孔底部，然后加入抗癌药物；/nS5、加入MTT溶液：然后再放入培养箱中培养，然后利用显微镜观察，然后每孔加入10ulMTT溶液，继续放入培养箱中培养；/nS6、加入三联溶解液：将三联溶解液从药品柜内取出，同时使用暖风扇对其进行吹拂，使三联溶解液内的SDS结晶全部溶解，然后向细胞培养板的每个孔内加入100ul三联溶解液，然后再放入培养箱中继续培养；/nS7、吸光值测量：将细胞培养板从培养箱中取出，然后使用显微镜进行观察，当孔内的结晶物全部溶解后，使用酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值；/nS8、设置调零孔和对照孔：同时在细胞培养板上的孔内加入培养基、MTT溶液以及二甲基亚砜溶液设置成调零孔，在细胞培养板上的孔内加入细胞悬液、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT溶液以及二甲基亚砜设置为对照孔；/nS9、计算：将各孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值，然后OD值取平均数即得到细胞存活率，以此反映抗癌药物的活性，从而达到对抗癌药物进行筛选。/n...

【技术特征摘要】
1.一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：具体步骤如下：
S1、配置MTT溶液；
S2、配置三联溶解液；
S3、制备癌细胞悬液，制备具体步骤如下：
S3.1、将新鲜的恶性肿瘤组织块用剪刀剪切成小块，然后使用生理盐水进行浸泡一段时间，然后再使用生理盐水进行洗涤；
S3.2、将清洗后的恶性肿瘤组织块放入匀浆机内打散；
S3.3、打散后的产物放入离心管中，然后使用离心机进行离心，离心后弃去上清液，然后加入适量红细胞裂解液，震荡后静置,然后再次使用离心机进行离心，离心后弃去上清液；
S3.4、然后向产物中加入磷酸缓冲盐溶液进行冲洗，然后使用离心机进行离心，离心后弃去上清液，得到沉淀物，然后向沉淀物加入适量的保存液，从而制得癌细胞悬液；
S4、接种：将癌细胞悬液接种于细胞培养板上，每孔100ul，放入培养箱中培养，从而使细胞单层铺满孔底部，然后加入抗癌药物；
S5、加入MTT溶液：然后再放入培养箱中培养，然后利用显微镜观察，然后每孔加入10ulMTT溶液，继续放入培养箱中培养；
S6、加入三联溶解液：将三联溶解液从药品柜内取出，同时使用暖风扇对其进行吹拂，使三联溶解液内的SDS结晶全部溶解，然后向细胞培养板的每个孔内加入100ul三联溶解液，然后再放入培养箱中继续培养；
S7、吸光值测量：将细胞培养板从培养箱中取出，然后使用显微镜进行观察，当孔内的结晶物全部溶解后，使用酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值；
S8、设置调零孔和对照孔：同时在细胞培养板上的孔内加入培养基、MTT溶液以及二甲基亚砜溶液设置成调零孔，在细胞培养板上的孔内加入细胞悬液、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT溶液以及二甲基亚砜设置为对照孔；
S9、计算：将各孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值，然后OD值取平均数即得到细胞存活率，以此反映抗癌药物的活性，从而达到对抗癌药物进行筛选。


2.根据权利要求1所述的一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：在步骤S1中MTT溶液配置步骤具体如下：
S1.1、先将混合瓶外端使...

【专利技术属性】
技术研发人员：付信宝，
申请(专利权)人：淄博职业学院，
类型：发明
国别省市：山东;37