本发明专利技术公开了TGF‑β在制备预防或治疗腰椎间盘突出药物中的应用。TGF‑β可通过抑制TSLP表达，维持腰椎间盘稳态，从而预防腰椎间盘突出。TGF‑β抑制剂通过抑制TGF‑β的表达，从而提高TSLP的表达，TSLP可以通过诱导单核细胞趋化因子‑1(monoeyte chemotactic protein‑1,MCP‑1)的表达升高来促进巨噬细胞向椎间盘组织浸润，进而促进突出腰椎间盘组织的重吸收过程。
Application of TGF - \u03b2 in preparation of drugs for prevention or treatment of lumbar disc herniation
【技术实现步骤摘要】
TGF-β在制备预防或治疗腰椎间盘突出药物中的应用
本专利技术涉及医学研究领域，具体的涉及TGF-β在制备预防或治疗腰椎间盘突出药物中的应用。
技术介绍
腰椎退行性疾病已成为影响人类生活质量的主要疾病之一，每年因腰椎退变疾病带来的损失巨大。因此，研究腰椎退变的病理生理机制对治疗腰椎退变疾病尤为重要。正常情况下，机体通过一套复杂精密的调节系统维持自身稳态平衡，保证各系统之间协调运作，最近的研究表明，机体在维持椎间盘稳态、修复椎间盘退变过程中同样存在着应对调节机制。腰椎间盘突出是指腰椎间盘退行性改变或外伤所致纤维破裂造成髓核从椎间盘破裂脱出，压迫腰椎神经，从而出现要退放射性疼痛，此称为腰椎间盘突出症。目前，只有少数脱出型椎间盘突出症及经保守治疗症状未缓解的腰椎间盘突出症患者接受手术治疗。俞振翰等研究表明，突出的椎间盘组织可通过重吸收过程达到自愈，但其潜在机制仍未明确。王志伟和元虎提出，巨噬细胞浸润参与重吸收的过程，可以使突出的椎间盘组织明显缩小。这可能与巨噬细胞直接或间接介导的一些因子释放有关，包括基质金属蛋白酶(mmatrixmetalloproteinases,MMPs)和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)。胸腺基质淋巴细胞生成素(thymicstromallym-phopoietin，TSLP)是1994年由Friend等在小鼠胸腺基质细胞的上清液中发现的IL-7样细胞因子，主要由非造血细胞分泌，如纤维母细胞、上皮细胞和基质细胞等。TSLPmRNA主要在胸腺、肺、皮肤、小肠等组织的上皮细胞及基质细胞和肥大细胞中表达，并与哮喘、气道变态炎性反应密切相关。Moret等发现，TSLP在风湿关节炎中扮演重要角色；Koyama等在对类风湿关节炎和骨关节炎患者滑膜成纤维细胞的体外实验研究中证实了TSLP的表达增加，说明在骨组织中也有TSLP的表达，并且参与炎症反应。Ohba等研究证实，在小鼠及人类的椎间盘组织中同样有TSLP的表达，并且在体外实验中证实肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)可通过核因子-κB(nuclearfactor-κB，NF-κB)上调TSLP的表达，而TSLP可通过促使单核细胞趋化因子-1(monocytechemotacticprotein-1，MCP-1)的表达增加而引起巨噬细胞向椎间盘组织浸润，同时作者在椎间盘突出患者的椎间盘组织中也发现了TSLP表达增加，认为TSLP为介导重吸收的重要因子。然而，椎间盘突出后，机体是否上调了TSLP的表达、如何调控TSLP，目前我们仍不知道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供TGF-β在制备预防或治疗腰椎间盘突出药物中的应用。申请人在研究时发现，使用炎症因子TNF-α刺激鼠椎间盘组织模拟腰椎间盘突出症的炎性环境时，抑制了TGF-β的活性有诱导磷酸化NF-κB蛋白表达的作用,而NF-κB蛋白可上调TSLP的表达。申请人由此假设：生理状况下TGF-β通路持续活化，抑制NF-κB通路活性，从而特异性抑制TSLP表达，维持椎间盘稳态、延缓椎间盘退变；抑制TGF-β表达可影响腰椎间盘突出症的重吸收，并通过上调TSLP的表达来促进重吸收过程。本专利技术研究了TGF-β通过对TSLP的表达进行调控，进而参与预防腰椎间盘退变和突出椎间盘的重吸收过程，提供了TGF-β在制备预防或治疗腰椎间盘突出药物中的应用。进一步的，TGF-β可通过抑制TSLP表达，维持腰椎间盘稳态，从而预防腰椎间盘突出。进一步的，TGF-β抑制剂通过抑制TGF-β的表达，从而提高TSLP的表达，进而参与腰椎间盘突出的重吸收过程。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了TGF-β在制备预防或治疗腰椎间盘突出药物中的应用，揭示了TGF-β通过调控TSLP的表达参与预防腰椎间盘退变疾病和突出椎间盘重吸收过程的机理，为今后研究腰椎间盘突出的病理生理过程提供新的分子理论基础，并为寻求最佳抗炎时机及今后利用机体自生修复机制保守治疗腰椎间盘突出提供新的靶点。附图说明图1是免疫组化法检测组织中NF-κB磷酸化水平图，细胞核染色为棕黄色或棕褐色为阳性，ABC法x40，A为对照组，B为TNF-α组，C为TGF-β组，D为TGF-β抑制剂组(HTS组)。图2是使用10ng/mlTNF-α、10ng/mlTGF-β、1uMHTS(TGF-β通路抑制剂)培养鼠椎间盘组织0、3、6、12、24h后，免疫印迹法(Western-blot)检测p-NFκB蛋白表达情况。图3是TNF-α组、TGF-β组、HTS组实验流程图。图4是HTS组、HTS+IMD组、HTS+MG组实验流程图图5是临床组实验流程图。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术技术方案做进一步详细描述：1、实验材料准备鼠椎间盘组织的分离及培养：选取6周龄遗传工程小鼠(C57BL/6J)，脱颈处死后切取小鼠尾部，去除表皮及皮下组织，解剖显微镜下切取10个尾椎椎间盘置于12孔培养板中，将提取的椎间盘组织放入含有0.1％小牛血清的DMEM1mL的12孔板内，37℃，5％CO2恒温箱内培养，得到鼠椎间盘组织培养板。2、鼠椎间盘组织中TGF-β/Smad2/3通路状态(1)TNF-α、TGF-β、TGF-β抑制剂(HTS-466284)培养鼠椎间盘组织将鼠椎间盘组织培养板分为对照组、TNF-α组、TGF-β组、TGF-β抑制剂组(HTS组)。TNF-α组加入10ng/mlTNF-α，TGF-β组加入10ng/mlTGF-β、TGF-β抑制剂组(HTS组)加入1umol/LTGF-β抑制剂(HTS-466284)，37℃，5％CO2恒温箱内培养0、3、6、12、24小时。(2)鼠椎间盘组织中p-Smad2/3表达的测定①将培养后的小鼠椎间盘组织用PBS冲洗，加入组织裂解液，物理研磨后提取蛋白质，BCA法测定蛋白质浓度，10％～15％SDS-PAGE凝胶电泳1h，湿转印法1.5h转印至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜。质量浓度为5％的脱脂牛奶或质量分数为3％的小牛血清室温封闭PVDF膜1h，加入抗p-Smad2/3抗体(质量浓度为5％的脱脂牛奶或质量分数为3％的小牛血清1∶1000稀释)，4℃孵育过夜，加入辣根过氧化酶标记的抗兔或鼠抗体(质量浓度为5％的脱脂牛奶或质量分数为3％的小牛血清1:2000稀释)，室温孵育1h，0.5％TBS/T洗膜，加入ECL曝光液，曝光显影。②免疫组织化学染色法检测磷酸化Smad2/3的水平：将培养6h后的小鼠椎间盘组织用质量分数为4％的多聚甲醛固定，脱水，石蜡包被，组织切片，厚度为5umol/L。用质量分数为3％的过氧化氢(含质量分数为80％的甲醛处理切片，去除组织过氧过氢酶活性后，用抗p-Smad2/3抗体或正常山羊血清4℃孵育过夜。常规ABC法染色：磷酸缓冲盐溶液(PB本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.TGF-β在制备预防或治疗腰椎间盘突出药物中的应用。/n
【技术特征摘要】
1.TGF-β在制备预防或治疗腰椎间盘突出药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的TGF-β在制备预防或治疗腰椎间盘突出药物中的应用，其特征在于，TGF-β可通过抑制TSLP表达，维持腰椎间盘稳态，从而预...
【专利技术属性】
技术研发人员：祝勇，杨学军，达逸峰，黄智，王文磊，李莉，
申请(专利权)人：内蒙古医科大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：内蒙;15
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