一种土牛膝抗炎活性提取物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种土牛膝抗炎活性提取物及其制备方法，其技术方案要点是包括以下步骤：A、选取粗毛牛膝的根及根茎作为植物原料，将植物阴干粉碎后，通过20目筛网得到细粉，将细粉用70％～100％醇溶液，回流提取2h后，重复提取3次，在60℃下减压浓缩，在阴暗低温及通风较好的地方晾干，制得甲醇中间提取物；B、将步骤A得到的甲醇中间提取物130g用甲醇充分溶解，与反相硅胶搅拌，水浴锅挥干溶剂，后经ODS柱层析(4*10cm)，利用醇类‑水溶液梯度洗脱，其中水、10％醇溶液、30％醇溶液、50％醇溶液、70％醇溶液、90％醇溶液、纯醇溶液、丙酮分别洗脱2.0L，并合并30％‑70％醇溶液洗脱组分得到土牛膝抗炎活性提取物,经试验验证对急慢性咽炎具有明显疗效。

【技术实现步骤摘要】
一种土牛膝抗炎活性提取物及其制备方法
本专利技术属于医药
，具体涉及一种土牛膝抗炎活性提取物及其制备方法。
技术介绍
咽炎为咽部的非特异性炎症，通常分为急性咽炎和慢性咽炎。急性咽炎为咽部黏膜及黏膜下组织的急性炎症，咽淋巴组织常被累及，炎症早期可局限，随病情进展常可涉及整个咽腔，以秋冬及冬春之交较常见。主要表现为咽部干燥，灼热，疼痛，吞咽疼痛明显，咽部充血肿胀等。慢性咽炎又可分为慢性单纯性咽炎、慢性肥厚性咽炎和萎缩性咽炎，其中慢性单纯性咽炎较多见，病变主要在黏膜层，表现为咽部黏膜慢性充血，黏膜及黏膜下结缔组织增生，黏液腺可肥大，分泌功能亢进，黏液分泌增多。患者常咯出咽内黏痰，或感觉咽部有异物感，咯不出，咽不下。病程长，易复发，症状顽固。近年来，随着生活、饮食的多样化发展，不良的生活习惯亦日益渐多，咽炎作为呼吸科及耳鼻喉科的常见疾病，病程较长且症状容易反复，难以治愈，并导致干咳、咽痛、咽痒等症状，影响睡眠与工作质量。粗毛牛膝(AchyranthesasperaL.)为苋科牛膝属植物，又名土牛膝，其药用部位主要为根及根茎。生于海拔200-1750m的山坡疏林中，主要分布于我国北自长城，东起中国台湾省、福建，西至云南和四川，南达广东和广西。《中华本草》、《全国中草药汇编》等典籍记载，土牛膝具有活血祛瘀，泻火解毒，利尿通淋之功效，主治跌打损伤，风湿关节痛，咽喉肿痛，白喉和水肿。对土牛膝进行系统成分、药效、毒理等研究，证实本品具有抗呼吸道、泌尿系统感染作用。本专利技术制备的土牛膝抗炎成分的制备与研究，工艺简单，成本低廉，对于土牛膝资源的开发和咽炎的防治具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的一种土牛膝抗炎活性提取物，经试验验证对急慢性咽炎具有明显疗效。本专利技术另一目的是提供一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法，包括以下步骤：A、选取粗毛牛膝的根及根茎作为植物原料，将植物阴干粉碎后，通过20目筛网得到细粉，将细粉用70％～100％醇溶液，回流提取2h后，重复提取3次，在60℃下减压浓缩，在阴暗低温及通风较好的地方晾干，制得甲醇中间提取物；B、将步骤A得到的甲醇中间提取物130g用甲醇充分溶解，与反相硅胶搅拌，水浴锅挥干溶剂，后经ODS柱层析(4*10cm)，利用醇类-水溶液梯度洗脱，其中水、10％醇溶液、30％醇溶液、50％醇溶液、70％醇溶液、90％醇溶液、纯醇溶液、丙酮分别洗脱2.0L，并合并30％-70％醇溶液洗脱组分得到土牛膝抗炎活性提取物。优选的，所述醇类或醇溶液为甲醇或乙醇，所述提取过程为超声或回流。优选的，所述土牛膝最终抗炎提取物的使用浓度为6.25-200μg/ml。优选的，所述水浴锅挥干溶剂过程是在小于等于60℃条件下干燥。优选的，所述甲醇中间提取物分离采用全亲水性材料ODS-AQ反相柱(用量为与浸膏比0.9～1.5倍，以干燥为准)。优选的，选取粗毛牛膝的根及根茎作为植物原料，将植物阴干粉碎后，通过20目筛网得到细粉，将细粉用70％～100％醇溶液，回流提取2h后，重复提取3次，在60℃下减压浓缩，在阴暗低温及通风较好的地方晾干，制得甲醇中间提取物，提取物为黑褐色固体，130.33g，产率11.15％；将上述甲醇中间提取物130g用甲醇充分溶解后，与117.5gODS-AQ全亲水性反相硅胶搅拌，水浴锅挥干溶剂，后经ODS柱层析(4*10cm)，利用甲醇-水溶液梯度洗脱，其中水、10％甲醇水溶液、30％甲醇水溶液、50％甲醇水溶液、70％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、纯甲醇、丙酮分别洗脱2.0L，各部分减压浓缩后，分别得到水洗物110.5g、10％甲醇洗脱物1.3g、30％甲醇洗脱物2.42、50％甲醇洗脱物2.99g、70％甲醇洗脱物4.37g、90％甲醇洗脱物4.31g、100％甲醇洗脱物3.39g、丙酮洗脱物1.27g。各部分测定活性，并合并30％-70％甲醇洗脱组分共得9.78g，最终收率为0.83％。一种土牛膝抗炎活性提取物，所述提取物中包含蜕皮甾酮、R-牛膝甾酮、S-牛膝甾酮、N-反式阿魏酰酪胺、N-顺式阿魏酰酪胺、N-反式阿魏酰-3-甲氧基酪胺、N-顺式阿魏酰-3-甲氧基酪胺、竹节参皂苷Ⅳa八种药效成分。对分离所得单体，通过色谱分析鉴定与文献对比获得确认，上述8中药效组分被证实对咽炎具有抑制作用。一种土牛膝抗炎活性提取物治疗咽炎的应用。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：1、本专利技术的一种土牛膝抗炎活性提取物，能够有效地对LPS诱导RAW264.7细胞产生的NO表现出明显的抑制活性，抗炎效果显著，并以活性模型为指导，对土牛膝抗炎物质进行纯化、去杂质；以LPS刺激小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7，可以诱导细胞产生多种相关介质和细胞因子，其中，NO作为众多炎症介质中的重要因子之一，在调节多种生理功能方面起重要作用，例如血管扩张，神经传递和炎症应答等，RAW264.7细胞株经LPS刺激向细胞培养液中释放产生的NO，其浓度可以用来评价炎症反应的强弱程度；本专利技术建立在LPS诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞的体外炎症模型中，通过NO检测试剂盒检测被LPS刺激的小鼠巨噬细胞产生的NO是否被所制备的药物干预产生抑制作用；2、本专利技术的一种土牛膝抗炎活性提取物，进一步分析获知其包含主要的八种药效单体组分，并且通过液相色谱分析，对每种单体进行了定性和定量的测定，是对土牛膝抗炎活性提取物有效性的证明，为进一步的产品改进提供了参考；3、本专利技术的一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法，通过提纯和浓缩步骤，提取到含有8种药效组分的抗炎提取物，作为抗炎消炎主要的药效组分，对土牛膝抗炎活性提取物的作用做了进一步诠释，提取和浓缩方法高效，且对不同条件提取方法进行对比，对于如何提高得料率给出了依据，提取方法相对比较稳定且品质可控，为批量生产广泛推广提供了参考。【说明书附图】图1：提取物液相色谱图【具体实施方式】结合具体实施例说明本专利技术的一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法：实施例1-2的制备方法：实施例1：一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法，包括以下步骤：A、粗毛牛膝采集于湖南省永州市马鞍岭种植基地，主要选取植物的根及根茎作为植物原料，将植物阴干粉碎后，通过20目筛得细粉，将细粉用70％～100％醇溶液，回流提取2h后，重复提取3次，在60℃下减压浓缩。在阴暗低温及通风较好的地方晾干，制得甲醇中间提取物，提取物为黑褐色固体，130.33g，产率11.15％；B、将步骤A得到的甲醇中间提取物130g用甲醇充分溶解，与117.5gODS-AQ全亲水性反相硅胶搅拌，低于60℃水浴锅挥干溶剂，后经ODS柱层析(4*10cm)，利用甲醇-水溶液梯度洗脱，其中水、10％甲醇水溶液、30％甲醇水溶液、50％甲醇水溶液、70％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、纯甲醇、丙酮分别本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：/nA、选取粗毛牛膝的根及根茎作为植物原料，将植物阴干粉碎后，通过20目筛网得到细粉，将细粉用70％～100％醇溶液，回流提取2h后，重复提取3次，在60℃下减压浓缩，在阴暗低温及通风较好的地方晾干，制得醇中间提取物；/nB、将步骤A得到的醇中间提取物130g用甲醇充分溶解，与反相硅胶搅拌，水浴锅挥干溶剂，后经ODS柱层析(4*10cm)，利用醇类-水溶液梯度洗脱，其中水、10％醇溶液、30％醇溶液、50％醇溶液、70％醇溶液、90％醇溶液、纯醇溶液、丙酮分别洗脱2.0L，并合并30％-70％醇溶液洗脱组分得到土牛膝抗炎活性提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
A、选取粗毛牛膝的根及根茎作为植物原料，将植物阴干粉碎后，通过20目筛网得到细粉，将细粉用70％～100％醇溶液，回流提取2h后，重复提取3次，在60℃下减压浓缩，在阴暗低温及通风较好的地方晾干，制得醇中间提取物；
B、将步骤A得到的醇中间提取物130g用甲醇充分溶解，与反相硅胶搅拌，水浴锅挥干溶剂，后经ODS柱层析(4*10cm)，利用醇类-水溶液梯度洗脱，其中水、10％醇溶液、30％醇溶液、50％醇溶液、70％醇溶液、90％醇溶液、纯醇溶液、丙酮分别洗脱2.0L，并合并30％-70％醇溶液洗脱组分得到土牛膝抗炎活性提取物。


2.根据权利要求1所述的一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法，其特征在于：所述醇类或醇溶液为甲醇或乙醇，所述提取过程为超声或回流。


3.根据权利要求1所述的一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法，其特征在于：所述土牛膝最终抗炎提取物的使用浓度为6.25-200μg/ml。


4.根据权利要求1所述的一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法，其特征在于：所述水浴锅挥干溶剂过程是在小于等于60℃条件下干燥。


5.根据权利要求1所述的一种土牛膝抗炎活性提取物的制备方法，其特征在于：所述醇中间提取物分离采用全亲水性材料ODS-AQ反相柱(用量为与浸膏比0.9～1.5倍，以干燥为准)。

【专利技术属性】
技术研发人员：罗懿钒，欧阳文，张云坤，李顺祥，唐纯玉，王雄龙，唐代凤，周华荣，
申请(专利权)人：湖南时代阳光药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43