利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用超高效液相色谱‑质谱联用技术同时检测白芍中11种有机磷类农药残留的方法，包括以下步骤：白芍药材用丙酮超声提取，提取溶液置于装有90mg石墨化碳黑的离心管中，涡旋净化，取上清液氮吹至干，加乙腈定容，用超高效液相色谱‑串联质谱在多反应监测模式下检测，基质标准曲线外标法定量。11种有机磷农药在2.5‑200ng/mL范围内线性拟合度高，11种农药在浓度为0.05mg/kg时的回收率在70％‑130％，相对标准偏差≤15％，方法检出限≤0.002mg/kg。该方法快速简便，灵敏度高，精密度高，准确度高，适合于白芍中11种有机磷类农药的分析检测。

Determination of 11 organophosphorus pesticide residues in Paeonia Alba by ultra high performance liquid chromatography mass spectrometry

【技术实现步骤摘要】
利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法
本专利技术涉及一种利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法，属于化学分析及检测领域。
技术介绍
白芍为毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPall.的干燥根。夏、秋二季采挖，洗净，除去头尾和细根，置沸水中煮后除去外皮或去皮后再煮，晒干。白芍具养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳的功能。用于血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕。白芍在种植过程中易感染多种病虫害且发病率高，滥用农药造成了白芍的直接污染，此外，白芍生长周期长(一般3-4年)，土壤和空气中残留的农药容易在植物组织中富集，又会对白芍产生间接污染。目前对于有机磷农药的检测多采用气相色谱或气相质谱法，其中气相色谱一般联用氮磷检测器(NPD)或火焰光度检测器(FPD)，而NPD或FPD均为专用检测器，使用范围受限，且容易出现假阳性结果；汪佳凤等人通过气相串联质谱法测定白芍中10种有机磷类农药残留，方法检出限均大于0.02mg/kg，且白芍前处理需要用到凝胶渗透色谱仪进行净化，成本高且操作复杂；刘小勤等人通过气相色谱-三重四级杆串联质谱法测定白芍中99种农药残留，该方法可以实现99种农药残留的同时测定，但部分农药的重复性RSD大于15％，重现性差，因此有必要探索出快速进行样品处理且准确定量的检测方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于，提供一种前处理简单、灵敏度高、精密度高、准确度高的有机磷类农药残留检测方法，同时为中药中有机磷类农药残留分析检测提供新的思路。为解决上述技术问题，本专利技术提供的利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药的方法，可以通过下列方法来实现：(1)溶液的制备：混合标准品溶液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品适量，配制成含有所述11种有机磷农药标准品的混合标准品溶液；供试品溶液的制备：精密称取适量白芍粉末供试品，经提取、用石墨化炭黑吸附纯化、稀释并定容，得供试品溶液；基质标准曲线溶液的制备：精密称取适量白芍粉末供试品至少五份，按一定梯度分别加入不同体积的混合标准品溶液，然后按所述供试品溶液的制备相同的方法，配制得具有一定浓度梯度的至少五个基质标准曲线溶液；(2)采用超高效液相色谱-质谱联用技术测定；色谱条件：色谱柱为ProshellHPH-C182.7μm3x100mm；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为乙腈；流动相B为甲酸铵-甲酸水溶液，其中甲酸铵浓度为8～12mmol/L，甲酸体积百分浓度为0.05～0.2％；采用梯度洗脱：流动相A+流动相B＝100％；0～20min，流动相A体积百分比由10％递增至75％；20～20.1min，流动相A体积百分比由75％递增至100％；20.1～25min，流动相A体积百分比保持100％；25～25.1min，流动相A体积百分比由100％递减至10％；25.1～30min，流动相A体积百分比保持10％；柱温为30～40℃；进样量为0.5～2μL；流速为0.3～0.5mL/min。质谱条件：ESI源，质谱多反应监测模式；(3)数据分析：将所述至少五个基质标准曲线溶液以及供试品溶液按所述色谱条件和质谱条件依次进样，记录图谱数据；根据至少五个基质标准曲线溶液的峰响应强度数据和浓度数据绘制出11种有机磷农药的基质标准曲线；根据基质标准曲线分别代入供试品溶液的峰响应强度数据分别计算并得出供试品溶液中11种有机磷农药的浓度；所述11种有机磷农药及其对应的响应峰离子对分别为：甲胺磷，离子对142/125，离子对142/94；久效磷，离子对224.1/193，离子对224.1/127；氧倍硫磷亚砜，离子对279.1/264，离子对279.1/247；氧丰索磷，离子对293.1/237，离子对293.1/281；氧倍硫磷砜，离子对295/217.1，离子对295/104.1；氧丰索磷砜，离子对309.1/281，离子对309.1/253；马拉氧磷，离子对315.1/269，离子对315.1/127；倍硫磷亚砜，离子对295/280，离子对295/109；乙基对氧磷，离子对276.1/248，离子对276.1/220；氧倍硫磷，离子对263/231，离子对263/216；乙基谷硫磷，离子对346.1/289，离子对346.1/261。具体的，所述混合标准品溶液中，11种有机磷农药标准品的浓度均为1μg/mL。具体的，所述混合标准品溶液配制时，先用丙酮稀释定容至10μg/mL，再用乙腈稀释定容至1μg/mL。在一种具体的实施方式中，混合标准品溶液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品各10mg置于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，使11种农药标准品储备液的浓度均为1000μg/mL；农药标准品储备液-18℃保存；取上述1000μg/mL各100μL，用丙酮定容至10mL，稀释到10μg/mL；再取1mL10μg/mL溶液，加乙腈定容至10mL，得到1μg/mL混合标准品溶液。具体的，所述供试品溶液配制时，以丙酮为提取溶剂。具体的，所述供试品溶液配制时，用石墨化炭黑吸附纯化后的上清溶液，除去溶剂后，再用乙腈溶解、稀释定容。在一种具体的实施方式中，白芍供试品溶液的制备：称取2g白芍供试品置于15mL离心管中，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min；取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min；取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，得到供试品溶液。在一种具体的实施方式中，白芍基质标准曲线溶液的制备：称取2g白芍供试品七份，置于15mL离心管中，分别加入1μg/mL混合标准品溶液5μL、10μL、20μL、50μL、100μL、200μL、400μL，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL。涡旋混匀，过0.22μm滤膜，得到呈浓度梯度的七个基质标准曲线溶液。其中，具体的，基质标准曲线的浓度梯度为：2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL。优选的，流动相B为甲酸铵-甲酸水溶液，其中甲酸铵浓度为10mmol/L，甲酸体积百分浓度为0.1％。优选的，所述色谱条件中，进样量为0.5μL。优选的，所述色谱条件中，柱温为35℃。优选的，所述色谱条件中，流速为0.4mL/min。优选的，所述质谱条件还包括干燥气温度350℃，干燥气流量5L/min，喷雾压力：45psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：11L/m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)溶液的制备：/n混合标准品溶液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品适量，配制成含有所述11种有机磷农药标准品的混合标准品溶液；/n供试品溶液的制备：精密称取适量白芍粉末供试品，经提取、用石墨化炭黑吸附纯化、稀释并定容，得供试品溶液；/n基质标准曲线溶液的制备：精密称取适量白芍粉末供试品至少五份，按一定梯度分别加入不同体积的混合标准品溶液，然后按所述供试品溶液的制备相同的方法，配制得具有一定浓度梯度的至少五个基质标准曲线溶液；/n(2)采用超高效液相色谱-质谱联用技术测定；/n色谱条件：色谱柱为ProshellHPH-C18 2.7μm 3x100mm；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为乙腈；流动相B为甲酸铵-甲酸水溶液，其中甲酸铵浓度为8～12mmol/L，甲酸体积百分浓度为0.05～0.2％；采用梯度洗脱：流动相A+流动相B＝100％；0～20min，流动相A体积百分比由10％递增至75％；20～20.1min，流动相A体积百分比由75％递增至100％；20.1～25min，流动相A体积百分比保持100％；25～25.1min，流动相A体积百分比由100％递减至10％；25.1～30min，流动相A体积百分比保持10％；柱温为30～40min℃；进样量为0.5～2μL；流速为0.3～0.5mL/min；/n质谱条件：ESI源，质谱多反应监测模式；/n(3)数据分析：/n将所述至少五个基质标准曲线溶液以及供试品溶液按所述色谱条件和质谱条件依次进样，记录图谱数据；根据至少五个基质标准曲线溶液的峰响应强度数据和浓度数据绘制出11种有机磷农药的基质标准曲线；根据基质标准曲线分别代入供试品溶液的峰响应强度数据分别计算并得出供试品溶液中11种有机磷农药的浓度；/n所述11种有机磷农药及其对应的响应峰离子对分别为：甲胺磷，离子对142/125，离子对142/94；久效磷，离子对224.1/193，离子对224.1/127；氧倍硫磷亚砜，离子对279.1/264，离子对279.1/247、氧丰索磷，离子对293.1/237，离子对293.1/281、氧倍硫磷砜，离子对295/217.1，离子对295/104.1、氧丰索磷砜，离子对309.1/281，离子对309.1/253、马拉氧磷，离子对315.1/269，离子对315.1/127；倍硫磷亚砜，离子对295/280，离子对295/109；乙基对氧磷，离子对276.1/248，离子对276.1/220；氧倍硫磷，离子对263/231，离子对263/216；乙基谷硫磷，离子对346.1/289，离子对346.1/261。/n...

【技术特征摘要】
1.一种利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)溶液的制备：
混合标准品溶液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品适量，配制成含有所述11种有机磷农药标准品的混合标准品溶液；
供试品溶液的制备：精密称取适量白芍粉末供试品，经提取、用石墨化炭黑吸附纯化、稀释并定容，得供试品溶液；
基质标准曲线溶液的制备：精密称取适量白芍粉末供试品至少五份，按一定梯度分别加入不同体积的混合标准品溶液，然后按所述供试品溶液的制备相同的方法，配制得具有一定浓度梯度的至少五个基质标准曲线溶液；
(2)采用超高效液相色谱-质谱联用技术测定；
色谱条件：色谱柱为ProshellHPH-C182.7μm3x100mm；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为乙腈；流动相B为甲酸铵-甲酸水溶液，其中甲酸铵浓度为8～12mmol/L，甲酸体积百分浓度为0.05～0.2％；采用梯度洗脱：流动相A+流动相B＝100％；0～20min，流动相A体积百分比由10％递增至75％；20～20.1min，流动相A体积百分比由75％递增至100％；20.1～25min，流动相A体积百分比保持100％；25～25.1min，流动相A体积百分比由100％递减至10％；25.1～30min，流动相A体积百分比保持10％；柱温为30～40min℃；进样量为0.5～2μL；流速为0.3～0.5mL/min；
质谱条件：ESI源，质谱多反应监测模式；
(3)数据分析：
将所述至少五个基质标准曲线溶液以及供试品溶液按所述色谱条件和质谱条件依次进样，记录图谱数据；根据至少五个基质标准曲线溶液的峰响应强度数据和浓度数据绘制出11种有机磷农药的基质标准曲线；根据基质标准曲线分别代入供试品溶液的峰响应强度数据分别计算并得出供试品溶液中11种有机磷农药的浓度；
所述11种有机磷农药及其对应的响应峰离子对分别为：甲胺磷，离子对142/125，离子对142/94；久效磷，离子对224.1/193，离子对224.1/127；氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈君子，殷红，陈永建，马长雨，孙光财，武晓剑，钱勇，谢天培，
申请(专利权)人：宁波立华制药有限公司，上海诗丹德标准技术服务有限公司，上海诗丹德生物技术有限公司，上海佰年诗丹德检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33