一种鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法技术

本发明专利技术提供一种鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法，涉及植物保护和育种技术领域，所述方法包括：S1：制备小麦纹枯病菌丝悬浮液；S2：以小麦种子为材料，进行种子萌发，得到萌发种子；S3：萌发种子于22℃黑暗培养，得到小麦幼芽；S4：将小麦幼芽浸于小麦纹枯病菌丝悬浮液中，进行接种，得到接种后的小麦幼芽；S5：对接种后的小麦幼芽进行培养，得到小麦幼苗；S6：调查小麦幼苗的纹枯病发病情况，预测不同小麦品种的纹枯病苗期抗性。本发明专利技术提供的鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法，操作简单，方便快捷高效，能在较短的时间内准确鉴定出小麦品种的苗期纹枯病的抗性水平，成本低，省工省力，适于推广应用。

A method to identify resistance of Wheat Sheath Blight at Seedling Stage

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法
本专利技术涉及植物保护和育种
，具体而言，涉及一种鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法。
技术介绍
小麦纹枯病(wheatsharpeyespot)是由禾谷丝核菌(Rhizoctoniacerealis)和立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)引起的一种以土壤带菌传播为主的真菌病害。在自然条件下，苗期小麦纹枯病主要发生在小麦的叶鞘上，小麦拔节后，随着温度升高、雨水充足，症状逐渐加重。发病初期，在地表或近地表的叶鞘上产生黄褐色椭圆形或梭形病斑，随后病原菌逐步向内部茎秆浸染，茎秆形成中间灰褐色，四周褐色的近圆形或椭圆形眼斑，发病严重时造成茎壁失水坏死，最后小麦病株因养分、水分供不应求而枯死，形成枯株白穗，导致千粒重降低，产量锐减。近年来，由于生产上缺乏抗病品种、氮肥过量使用以及秸秆还田等耕作制度的改变，小麦纹枯病的发生率逐年提高。据农业部数据显示，我国小麦纹枯病常年发病面积达千万亩，部分重发年份可达上亿亩。药剂防治虽然可在一定程度减轻小麦纹枯病的危害，但也造成了小麦生产成本的增加和环境的污染，因此培育和利用抗病品种是减轻小麦纹枯病危害最为经济、有效和环保的手段。建立高效可靠的小麦纹枯病抗性鉴定方法是培育和利用抗病品种的重要基础。目前关于小麦纹枯病成株期抗性鉴定的方法较多，分为自然鉴定和人工接种鉴定。但成株期鉴定受田间环境影响较大，鉴定时间长，表型稳定性差，或者方法复杂，工作量大，鉴定时间长，不适用于大规模抗性鉴定(余蓬勃,任妍,侯玮秀,等.小麦苗期抗纹枯病鉴定方法的改良及抗病品种筛选[J/OL].植物病理学报:1-8)。相对来说，温室内对小麦纹枯病进行苗期抗性鉴定，环境易于控制，周期短，可重复性强。目前在温室内对小麦纹枯病苗期鉴定方法已有一些研究，任丽娟等在小麦3～4叶期(温室内)利用带菌牙签轻轻地嵌入麦苗茎秆与叶鞘内，并在接种处缠绕浸湿的医用脱脂棉球进行接种，结果表明，这种方法鉴定评价方法在发病一致性、稳定性较好(任丽娟,姚金保,陈萍,马鸿翔.一种新的小麦纹枯病抗性苗期鉴定评价方法[J].江苏农业科学,2009(05):131-133)，但该方法需要制作带菌牙签，接种过程比较繁琐，效率较低，不适合大批量鉴定小麦苗期纹枯病抗性。余蓬勃等利用塑料小盒温室土壤种植待鉴定小麦，在麦苗2叶期进行病麦粒接种，对96份小麦品种进行纹枯病抗性鉴定的结果表明，该方法纹枯病发病稳定，重复性好(余蓬勃,任妍,侯玮秀,等.小麦苗期抗纹枯病鉴定方法的改良及抗病品种筛选[J/OL].植物病理学报:1-8)，但该方法需要病麦粒制作、土壤高温灭菌等过程，存在工作量相对较大，效率不高的问题。目前我国小麦纹枯病的发病面积不断扩大，危害程度日益加重，生产上迫切需要抗纹枯病的品种。因此，建立一种快速准确高效的小麦纹枯病鉴定方法十分必要，该方法的确立可为抗纹枯病种质资源的筛选、抗病小麦新品种培育和抗病机制等研究提供基础。
技术实现思路
本专利技术解决的问题是如何快速准确高效的鉴定小麦纹枯病苗期抗性。为解决上述问题，本专利技术提供一种鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法，包括：S1：制备小麦纹枯病菌丝悬浮液；S2：以小麦种子为材料，进行种子萌发，得到萌发种子；S3：将所述萌发种子于22℃进行黑暗培养，得到小麦幼芽；S4：将所述小麦幼芽浸于所述小麦纹枯病菌丝悬浮液中，进行接种，得到接种后的小麦幼芽；S5：对所述接种后的小麦幼芽进行培养，得到小麦幼苗；S6：调查所述小麦幼苗的纹枯病发病情况，预测不同小麦品种的所述小麦幼苗的纹枯病苗期抗性。通过在温室中进行种子萌发、培养，使得对小麦纹枯病苗期抗性的鉴定方法不受生长季节、外界环境的限制，同时由于温室环境下室内温度、湿度等条件均易于控制，因此，与传统的田间鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法相比，更加便捷，省时省力。为提高鉴定结果的一致性，本专利技术进一步在步骤S3中，挑选萌发程度一致的种子进行培养，具体的，该步骤为挑选萌发程度一致的种子转置于发芽盒内于22℃继续黑暗培养，得到小麦幼芽。此外，种子萌发后，进行黑暗培养，使得该萌发种子培养成的小麦幼芽与经光照培养的小麦幼芽相比，植株发黄，生长相对较弱，因而在后续过程中更加易于接种，从而有利于缩短对小麦纹枯病苗期抗性进行鉴定的时间，降低对小麦纹枯病苗期抗性进行鉴定的难度，提高了鉴定结果的可靠性和稳定性。可选地，步骤S1包括：S1-1：取-20℃保存的纹枯菌菌株，接种于PDA平板上，于22℃条件下培养3d，进行纹枯菌的活化，得到活化的菌丝；S1-2：将所述活化的菌丝接种于PDA液体培养基上，于22℃震荡培养5d，进行菌丝的培养，得到菌液；S1-3：将所述菌液转移至离心管中，加入钢珠，进行漩涡震荡，得到所述小麦纹枯病菌丝悬浮液。其中制备小麦纹枯病菌丝悬浮液过程中的纹枯菌菌株为-20℃保存的纹枯菌菌株29-1，由农作物重大病虫草害防控湖北省重点实验室保存。将-20℃保存的纹枯菌菌株于22℃条件下培养3d后，纹枯菌得到活化，进一步将活化的菌丝于22℃震荡培养5d，进行菌丝的培养；具体的，震荡培养过程为，于22℃的摇床中，以150r/min的频率进行震荡培养5d，得到菌液；为便于使小麦幼苗进行接种，进一步通过旋涡震荡对菌液中的菌丝进行粉碎处理；旋涡震荡处理过程中，所用的离心管的规格为50ml，加入的钢珠的数量为15～20个，钢珠的直径3mm；旋涡震荡后，将纹枯菌菌丝打成长度为1～2mm的小片段后混匀，形成菌丝悬浮液。此外，在步骤S1-1进行培养过程中，为了防止培养过程中培养皿盖上出现的蒸馏水流到培养皿上，导致菌落成片，使得不能计数或分离，同时为了减少染菌的可能，本专利技术在S1-1中将纹枯菌菌株于培养箱中进行倒置培养。可选地，步骤S2包括：S2-1：对所述小麦种子进行消毒，得到消毒后的小麦种子；S2-2：将所述消毒后的小麦种子置于无菌水中，于22℃黑暗条件下萌发2d，得到所述萌发种子。为提高种子的萌发率，在对种子进行萌发过程中，挑选饱满度较好的种子，并对挑选的种子进行消毒后再进行萌发，以免因种子活力等其他问题而影响鉴定结果的准确性。在黑暗条件下对种子进行萌发，使得由该萌发种子培养的小麦幼芽生长较弱，因而更加易于接种，从而有利于缩短对小麦纹枯病苗期抗性进行鉴定的时间。可选地，步骤S2-1包括：依次用乙醇溶液、无菌水对所述小麦种子进行冲洗后，将冲洗后的所述小麦种子置于双氧水中进行浸泡，得到所述消毒后的小麦种子。可选地，所述双氧水的浓度为0.6％。可选地，所述乙醇溶液的浓度为70％。具体的消毒过程为，将挑选好的小麦种子首先用浓度为70％乙醇冲洗1min，再用无菌水对乙醇冲洗后的种子进行款速冲洗，以除去小麦种子表层的乙醇；将无菌水冲洗后的小麦种子置于培养皿中浓度为0.6％的双氧水中浸泡过夜，得到消毒后的小麦种子。对消毒后的小麦种子进行萌发时，将浸泡小本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法，其特征在于，包括：/nS1：制备小麦纹枯病菌丝悬浮液；/nS2：以小麦种子为材料，进行种子萌发，得到萌发种子；/nS3：将所述萌发种子于22℃进行黑暗培养，得到小麦幼芽；/nS4：将所述小麦幼芽浸于所述小麦纹枯病菌丝悬浮液中，进行接种，得到接种后的小麦幼芽；/nS5：对所述接种后的小麦幼芽进行培养，得到小麦幼苗；/nS6：调查所述小麦幼苗的纹枯病发病情况，预测不同小麦品种的所述小麦幼苗的纹枯病苗期抗性。/n

【技术特征摘要】
1.一种鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法，其特征在于，包括：
S1：制备小麦纹枯病菌丝悬浮液；
S2：以小麦种子为材料，进行种子萌发，得到萌发种子；
S3：将所述萌发种子于22℃进行黑暗培养，得到小麦幼芽；
S4：将所述小麦幼芽浸于所述小麦纹枯病菌丝悬浮液中，进行接种，得到接种后的小麦幼芽；
S5：对所述接种后的小麦幼芽进行培养，得到小麦幼苗；
S6：调查所述小麦幼苗的纹枯病发病情况，预测不同小麦品种的所述小麦幼苗的纹枯病苗期抗性。


2.如权利要求1所述的鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法，其特征在于，步骤S1包括：
S1-1：取-20℃保存的纹枯菌菌株，接种于PDA平板上，于22℃条件下培养3d，进行纹枯菌的活化，得到活化的菌丝；
S1-2：将所述活化的菌丝接种于PDA液体培养基上，于22℃震荡培养5d，进行菌丝的培养，得到菌液；
S1-3：将所述菌液转移至离心管中，加入钢珠，进行漩涡震荡，得到所述小麦纹枯病菌丝悬浮液。


3.如权利要求1所述的鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法，其特征在于，步骤S2包括：
S2-1：对所述小麦种子进行消毒，得到消毒后的小麦种子；
S2-2：将所述消毒后的小麦种子置于无菌水中，于22℃黑暗条件下萌发2d，得到所述萌发的种子。


4.如权利要求3所述的鉴定小麦纹枯病苗期抗性的方法，其特征在于，步骤S2-1包括：依次用乙醇溶液、无菌水对所述小麦种子进行冲洗后，将冲洗后的所述小麦种子置于双氧水中进行浸泡...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘易科，高春保，朱展望，邹娟，舒军，朱光，佟汉文，陈泠，张宇庆，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院粮食作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42